枯草芽孢杆菌脂肪酶表达质粒的构建及其表达

以枯草芽孢杆菌168(B.subtilis 168)染色体为模板PCR扩增出P43启动子,与大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pUBC19相连得到表达载体pUBC-P43,然后将枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipA克隆到载体pUBC-P43启动子下游,得到重组质粒pUBCPL并转化B.subtilis TZ10.经中性红油脂平板、酶切和PCR方法鉴定得到重组菌TZ10/pUBCPL.宿主菌TZ10是B.subtilis DB104染色体缺失了lipA基因后获得.重组菌经初步发酵,以橄榄油为底物测定发酵上清液最高脂肪酶活力为49.1 U·L-1,而相应菌株DB104发酵最高酶活力仅为11.4 U·L-1.     

苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基的优化

采用正交实验法,对苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基进行优化,将发酵产品干燥粉碎后制成菌悬液,通过测量其吸光度来确定不同农副产品培养基成分对苏云金芽孢杆菌发酵的影响.实验结果表明,不同培养基成分配比对发酵效果影响差别很大,确定最佳培养基组分为:麦麸63.9%、豆饼粉16.0%、玉米粉8.0%、酵母粉1.6%、米糠8.0%、KH2PO4 0.5%、FeSO4 0.3%、(NH4)2SO4 1.1%和MgSO4 0.6%.     

粮油食品防霉微生物筛选及其活性物质初步研究

为开发新型防霉剂,降低粮油食品储藏、运输、流通等过程中霉变对其品质和食用安全的影响,研究筛选获得具有强防霉活性的微生物。采用抑菌圈法,以禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）为指示菌筛选具有防霉活性的菌株。利用形态学观察、生化特征鉴定和16S rDNA基因序列比对进行菌株鉴定;通过不同温度、pH和蛋白酶K处理对防霉活性物质进行初步分析。结果显示：通过初筛获得33株对禾谷镰刀菌具有强抑制活性的菌株,复筛后选择的7株菌归属为芽孢杆菌属（Bacillus）;活性物质分析发现7株菌的活性物质均不耐高温和强酸碱,同时蛋白酶K处理对其防霉效果没有明显影响,初步推断为肽类;通过抑菌谱测定发现菌株ASAG 62对常见霉菌（产黄青霉Penicillium flavum、黑曲霉Aspergillus Niger、赭曲霉Aspergillus ochre、黄曲霉Aspergillus flavus、禾谷镰刀菌F. graminearum）均具有良好的抑制效果。     

云南木姜子提取物对蜡样芽孢杆菌抑菌作用的研究

目的 研究云南木姜子(Yunnan Litsea cubeba)的抑菌活性及抑菌稳定性。方法 用乙醇对云南木姜子果实进行提取并分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。比较不同萃取相对蜡样芽孢杆菌的抑制作用,并通过热处理、酸碱处理、紫外照射、金属离子处理、糖和盐处理对其稳定性进行考察。结果 云南木姜子提取物对蜡样芽孢杆菌具有良好的抑菌作用,其活性成分主要分布于乙酸乙酯相,其对蜡样芽孢杆菌的最小抑菌浓度为0.08 mg/mL;云南木姜子乙酸乙酯萃取相经紫外线照射、酸碱处理和不同温度处理仍表现出良好的稳定性,盐和糖处理条件使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性增强,对于金属离子处理,Mg²⁺使其对蜡样芽孢杆菌的抑菌活性提高,Fe³⁺、Fe²⁺、Al³⁺和Ca²⁺等使其抑菌活性降低。结论 云南木姜子提取物具有良好的抑菌活性,温度、紫外和pH对其抑菌成分的稳定性有较小的影响,金属离子、糖和盐浓度对其抑菌活性影响较大。因此可考虑将云南木姜子作为一种天然植物源防腐剂,它在保鲜方面具有良好的开发和...     

纳豆菌液态发酵制备蚕蛹肽的工艺优化及其抗炎活性研究

为提高蚕蛹的资源利用率和产品附加值,本研究以蚕蛹蛋白为原料,通过纳豆菌液态发酵制备蚕蛹肽.通过单因素实验和响应面试验确定最佳发酵工艺条件;采用脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型,对最佳发酵工艺参数组合下获得的蚕蛹肽进行体外抗炎活性研究.结果表明:蚕蛹肽的最佳发酵工艺条件为接种量5.0 mL、蚕蛹蛋白添加...     

纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)为出发菌,研究了其液体发酵产生纳豆激酶(Nattokinase,NK)的培养基组成(碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成)和培养条件(温度、初始pH值、发酵时间、接种量和装液量)对产酶量的影响.结果表明,液体发酵培养基的最佳碳源为麦芽糖,浓度为1.0%;最...     

Mn-SOD的纯化方法研究

以嗜热芽孢杆菌B．S110—2所产Mn—SOD为研究对象,对其纯化方法进行了研究,用碱处理的方法替代了传统的硫酸铵分级沉淀蛋白的方法;通过对金属螯合层析中二价金属离子的选择及洗脱液pH的选择,初步建立了一套适合分离纯化Mn-SOD的金属螯合层析体系,为实际生物产品的分离奠定了基础。     

细菌和真菌分解低品位磷矿

研究了枯草芽孢杆菌、假单孢菌和曲霉对低品位磷矿粉的分解作用. 结果表明,3种菌株均显著促进了磷矿粉中磷的浸出,磷的浸出率最高可达7%,其中曲霉的解磷能力远强于枯草芽孢杆菌和假单孢菌,进一步证实了真菌的解磷能力强于细菌. 磷矿粉用量越低,磷的浸出率越高. 随培养时间增加,磷的浸出率逐渐升高,但培养到15 d后磷的浸出几乎达到饱和. 另外,碳源浓度为3%时,枯草芽孢杆菌和假单孢菌培养液中磷的浸出率最高,而碳源浓度为2%时曲霉培养液中磷的浸出率达到最高,浓度过高或过低均抑制磷的浸出.     

枯草芽孢杆菌联产纳豆激酶和g-聚谷氨酸

利用实验室保存的纳豆激酶生产菌Bacillus subtilis Natto NLSSe进行了g-聚谷氨酸合成研究,在不添加谷氨酸的培养基中合成了分子量在200~300 万Da的g-聚谷氨酸,表明该菌是谷氨酸非依赖型菌. 合成纳豆激酶的合适碳、氮源分别是蔗糖和大豆蛋白胨,合成g-聚谷氨酸的合适碳、氮源分别是柠檬酸和NH4C1. 通过正交实验研究了碳、氮源对纳豆激酶和g-聚谷氨酸联产的影响,结果表明,增加培养基中大豆蛋白胨及柠檬酸的浓度能分别促进纳豆激酶和g-聚谷氨酸的合成,而不抑制另一产物的合成,有利于纳豆激酶和g-聚谷氨酸的联产. 在大豆蛋白胨10 g/L, NH4C1 9 g/L,柠檬酸15 g/L时,纳豆激酶酶活为121.2 U/mL,g-聚谷氨酸产量为1.1 g/L,均达到了单独合成时的水平.     

枯草芽孢杆菌Dg5041液体发酵生产γ-聚谷氨酸

以枯草芽孢杆菌Dg5041为生产菌,对其摇瓶发酵生产γ–聚谷氨酸(γ-PGA)的工艺进行研究,通过单因素实验和正交实验获得了该菌的优化培养条件。优化的培养基组成为:葡萄糖35 g/L,酵母膏10 g/L,谷氨酸钠40 g/L,MgSO41.0 g/L,K2HPO4 2.0 g/L,MnSO40.5 g/L,pH 7.0,250 mL锥形瓶装液量50 mL。菌种在37℃,120 r/min培养24 h加入5%NaCl后继续培养24 h,γ-PGA产量达到18.54 g/L。研究结果表明,枯草芽孢杆菌Dg5041是一株很有潜力的γ-PGA高产菌。