强烈炽热球菌几丁质酶水解制备低脱乙酰度壳寡糖及其组成与结构分析

利用全基因合成方法合成了强烈炽热球菌（Pyrococcus furiosus）的几丁质酶编码基因并在大肠杆菌（Escherichia coli）中实现了可溶表达。利用该酶对低脱乙酰度壳聚糖进行水解并对获得的壳寡糖产物进行组成及结构分析。分子排阻高效液相色谱结果显示,水解产物相对分子质量分布范围为1?000～5?000。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析结果显示,酶解产物中包含聚合度2～9、不同脱乙酰度的壳寡糖。核磁共振对酶解产物壳寡糖的结构鉴定结果显示,所有寡糖组分的还原端均主要由两个连续的N-乙酰氨基葡萄糖组成。综上,本研究利用来源于强烈炽热球菌的几丁质酶制备了还原末端结构确定的低脱乙酰度壳寡糖,为复杂结构壳寡糖结构与功能关系研究提供了理论支持。     

微生物来源的昆虫几丁质酶抑制剂的筛选与分离纯化

通过对筛选条件进行优化,建立可靠的平板透明圈初筛方法和DNS 比色复筛方法;以棉铃虫几丁质酶作为筛选靶标并用此筛选模型对500 多株菌株进行筛选,筛选出包括A0901# 菌株在内的具有几丁质酶抑制作用的活性菌株29 株。采用活性追踪的方法对A0901# 菌株发酵产物进行分离纯化,通过乙醇沉淀、Sevag 试剂除蛋白及Sephadex G-100 凝胶色谱得到一个纯的活性物质,经HPLC 检测显示在保留时间15min 左右为一单峰,DNS 比色法验证其抑制率为54.2%,红外、质谱、元素分析表明此物质的分子式为C9H18O10,并证明其为一个多羟基的化合物。     

Soybean seeds surface‐coated with depolymerised chitins: chitinase activity as a predictive index for the harvest of beans in field culture

The chitinase activity of soybeans was 200% higher than that of the control in the callus culture of soybeans and in their seed germination period on treatment with depolymerised chitins (DP 2–8). In the field culture of soybean seeds surface‐coated with a thin layer of depolymerised chitins, the soybean harvest was 118% higher than that of the control. The seed‐coating treatment was thus effective in enhancing the bean harvest, and the chitinase activity of soybean seeds during their germination period was usable as a predictive index for the harvest of beans in field culture. © 2000 Society of Chemical Industry     

双酶协同降解胶体几丁质及其作用机制

建立一种几丁质酶(chitinase,ChiA)和β-N-乙酰基己糖胺酶HJ5N协同催化体系,可实现一步反应降解胶体几丁质制备N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine,GlcNAc),探讨不同因素对双酶协同催化体系的影响和双酶协同作用机制.结果表明,双酶协同催化体系的最适反应温度为30℃,最适反应pH...     

绿僵菌几丁质酶的分离纯化及性质

从自然罹病死亡的金龟子体内分离到一株金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）,它在几丁质的诱导下能产生较高活性的几丁质酶.发酵液经硫酸铵盐析、DEAE纤维素柱层析、Phenyl Sepharose^TM 6 Fast Flow疏水柱层析等方法,得到电泳纯的几丁质酶.用SDS-PAGE测得该酶相对分子质量为61.5 kD,而经质谱分析为57.14 kD.最适反应温度为55 ℃,最适反应pH值为6.0,酶的等电点pI为4.02,其N末端序列为VIGPAAPL,用硫酸-酚法测得其含糖量为56.2%.水解几丁质的K_m为14.5 μmol•L^-1.该酶在45 ℃,pH值3.0～9.5较为稳定.Zn²⁺、Ca²⁺、Ba²⁺和Mn²⁺离子对几丁质酶活性有明显的促进作用,而Hg²⁺、Co²⁺和Fe²⁺离子完全抑制几丁质酶的活性.此酶还可被EDTA所抑制,表明金属离子为其活性所必需.PMSF试剂对几丁质酶的活力影响比较大,丝氨酸可能是酶活力的必需基团.     

绿僵菌Ma83固态发酵几丁质酶和部分酶学性质的初步研究

研究了金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeMa83菌株产几丁质酶的固态发酵条件和粗酶液的酶学性质。研究结果显示 ,当以麸皮∶蚕蛹粉为 3∶1作为培养基 ,最适氮源为1%NaNO3,起始pH为 6 5 ,发酵温度为 31℃ ,接种量为 2mL液态种子时酶活力最高。此外 ,添加稻壳对Ma83产几丁质酶有促进作用。该菌株在生长 2d时 ,酶活力达 33 9U /g干培养基。酶的最适反应温度为 5 0℃ ,最适反应 pH为 6 0 ;不同温度保温 1h后 ,酶的半失活温度为 42℃。不同 pH值的缓冲溶液中 (2 5℃ )放置 1h后 ,酶在pH 5 0～ 6 0条件下稳定性最高     

家蚕蛹糖水解酶18家族几丁质酶的抗原表位预测与结构分析

家蚕蛹是蚕桑产业中的重要副产物资源,因营养丰富、蛋白质含量高、富含不饱和脂肪酸等优点,常用作人们的休闲食品,近年来,随着以蚕蛹为原料的多元化产品开发研究的不断发展,蚕蛹资源的利用越来越成为增加蚕桑产业效益的重要途径,但因食用或饲用家蚕蛹而引发的过敏症状较为严重,制约了其在食品和饲料中的应用。已有报道家蚕蛹中的糖水解酶18家族几丁质酶(Bm Chi)是一种重要变应原物质,但至今尚无其三维结构数据,本文通过生物信息学软件分析,对家蚕蛹糖水解酶18家族几丁质酶的同源性、二级结构、亲疏水性、可塑性、表面可及性和抗原性等进行了综合分析,确定其抗原表位位点,为深入开展该变应原的免疫学特性研究打下基础,并为家蚕蛹蛋白的脱敏研究提供理论基础。     

高产几丁质酶菌株的诱变选育及发酵条件的优化

以粘质沙雷氏菌G3-1为出发菌株,通过紫外-LiCl和微波-LiCl两轮复合诱变,得到一株产酶能力高且遗传稳定的突变株GF-21,通过单因素实验和正交实验对突变株GF-21的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最优发酵培养基成分为:乳糖6 g/L,尿素10 g/L,KCl 1.0 mmol/L,NaCl 5 g/L,胶体几丁质10 g/L,此时,几丁质酶活力为4.73 U/mL,比优化前提高了109.3%,较出发菌株提高了470%;最优发酵条件为:培养基初始pH9.0,温度30 ℃,摇床转速220 r/min,接种龄5 h,接种量10%。本文为几丁质酶的生产应用奠定了良好的基础。     

微生物热稳定几丁质酶的研究进展

热稳定几丁质酶具有热稳定性和酸碱适应性,能在高温条件下保持良好活性。目前,寻找具有工业化潜在应用价值的新酶源越来越受到关注。本文简述了热稳定几丁质酶的微生物来源,热稳定性机制,及其工业应用和发展前景。