首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
文章检索
  按 检索   检索词:      
出版年份:   被引次数:   他引次数: 提示:输入*表示无穷大
  收费全文   5766篇
  免费   712篇
  国内免费   351篇
电工技术   75篇
综合类   523篇
化学工业   1668篇
金属工艺   61篇
机械仪表   184篇
建筑科学   307篇
矿业工程   25篇
能源动力   55篇
轻工业   1438篇
水利工程   22篇
石油天然气   37篇
武器工业   15篇
无线电   309篇
一般工业技术   311篇
冶金工业   246篇
原子能技术   36篇
自动化技术   1517篇
  2024年   31篇
  2023年   129篇
  2022年   520篇
  2021年   430篇
  2020年   216篇
  2019年   170篇
  2018年   164篇
  2017年   197篇
  2016年   209篇
  2015年   254篇
  2014年   360篇
  2013年   392篇
  2012年   385篇
  2011年   412篇
  2010年   341篇
  2009年   352篇
  2008年   373篇
  2007年   363篇
  2006年   302篇
  2005年   239篇
  2004年   190篇
  2003年   170篇
  2002年   103篇
  2001年   88篇
  2000年   65篇
  1999年   53篇
  1998年   41篇
  1997年   43篇
  1996年   41篇
  1995年   42篇
  1994年   32篇
  1993年   16篇
  1992年   22篇
  1991年   18篇
  1990年   10篇
  1989年   12篇
  1988年   3篇
  1987年   9篇
  1986年   4篇
  1985年   5篇
  1984年   2篇
  1982年   2篇
  1980年   3篇
  1964年   3篇
  1963年   3篇
  1961年   3篇
  1958年   1篇
  1957年   1篇
  1956年   1篇
  1955年   1篇
排序方式: 共有6829条查询结果,搜索用时 15 毫秒
51.
针对手工选点生成的三次样条曲线无法准确地描述图像边缘的问题,以粒子群三次参数样条曲线优化算法为基础对现有的图像边缘算法进行了改进。在图像边缘上取若干点作为样条曲线的型值点,利用粒子群算法对这些型值点进行优化,使得到的样条曲线对图像边缘有很好的贴合。实验表明,该算法不仅能够快速拟合样条曲线,而且优化后的样条曲线形态能较好地贴合图像边缘轮廓。  相似文献   
52.
中国人丙型肝炎病毒全长NS3基因的克隆、序列分析及表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 为改进HCV试剂的质量克隆 1b型丙型肝炎病毒 (HCV)全长NS3基因并在原核细胞中表达。方法 用RT PCR方法从中国人血清中扩增全长NS3片段 ,进行序列分析 ,并克隆到pET3 0a(+)原核表达载体中 ,构建的原核表达载体pET NS3 180 0在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,用Westernblot方法进行验证。结果 扩增到 1b型HCV全长NS3片段 ,经Westernblot实验表明该片段具有抗原活性。结论 构建的质粒可在大肠杆菌中表达完整的NS3蛋白  相似文献   
53.
目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。  相似文献   
54.
含脊髓灰质炎病毒1型(简称 PV1)全基因7.4Kb cDNA 和编码 PV1外壳蛋白 VP12.5Kb 的 cDNA 片段的两株重组痘苗病毒(RV-1和 RV-2)表达了 PV1抗原。经荧光标记的抗 PV1型特异性单克隆抗体检测,感染了 RV-1和 RV-2的 Herp-2细胞呈阳性荧光反应。免疫印迹实验证实两株重组痘苗病毒分别表达 PV1抗原三条和两条特异性蛋白带。免疫家兔后能诱导产生抗 PV1中和抗体。本文对重组病毒表达 PV1抗原的效率进行了初步讨论。  相似文献   
55.
目的 克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因 ,构建其真核表达系统并表达目的蛋白。方法 采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB ,目的片段T A克隆后测序。重组质粒pUCm T SEB经酶切获得的pUCm T SEB基因片段与真核表达载体pPIC9K连接。将重组真核载体pPIC9K SEB转化入P .pastorisGS115株 ,经PCR筛选并鉴定pPIC9K SEB P .pastorisGS115。在 0 5 % (v v)甲醇诱导下 ,采用SDS PAGE检测重组SEB(rSEB)的表达 ,并对rSEB的N端氨基酸序列和诱导人脐静脉内皮EVC 30 4细胞分泌IL 1α和TNFα的作用进行了检测。结果 所克隆的SEB基因核苷酸及氨基酸序列的同源性分别高达 98 84 %~ 10 0 %和 10 0 %。表达的SEB在SDS PAGE图谱的位置与预期相符。rSEB氨基末端氨基酸序列与预期完全相符。rSEB与SEB商品有相似的促人脐静脉内皮细胞EVC 30 4分泌IL 1α和TNFα的活性。结论 已成功地构建了SEB的真核表达系统 ,为进一步分析SEB分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。  相似文献   
56.
目的 研究重组人成骨蛋白 -1(rhOP -1)在大肠杆菌中的克隆和非诱导表达。方法 利用RT -PCR技术 ,从正常胎儿肾组织总cDNA中扩增得到rhOP- 1成熟肽基因片段 ,再将rhOP- 1成熟肽基因克隆于原核融合表达载体pGEX- 4T- 2中 ,构建表达质粒pCCBC- OP- 1,并转化到大肠杆菌JM10 9(DE3)中 ,在发酵过程中不添加任何诱导剂。表达产物经SDS -PAGE分析。结果 扩增的目的基因序列与文献报道一致。表达的目的蛋白相对分子质量为 14 0 0 0 ,表达量达到菌体蛋白的 4 0 %。结论 克隆了人OP -1成熟肽基因 ,并实现了rhOP- 1的非诱导高效表达。  相似文献   
57.
微小隐孢子虫CP15/60基因在Hela细胞中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 构建隐孢子虫CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,观察其在Hela细胞中的表达。方法用Xho I和EcoR I从pMD18-T-15/60中酶切得到CP 15/60基因,将其插入真核表达载体pCR3.1(+)的 XhoI和EcoRI位点,构建CP15/60真核表达载体pcDNA3.1-15/60,用脂质体介导法将其转染Hela细胞,并用G418加压筛选,用RT-PCR方法检测外源CP15/60基因的转录,ELISA法和间接免疫荧光法检测其活性。结果 酶切鉴定表明已成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1-15/60,外源CP15/60基因能在转染细胞中有效转录,经检测表达产物具有良好的生物活性。结论 已成功地构建了pcDNA3.1-15/60真核表达载体,并在Hela细胞中具有良好的表达。  相似文献   
58.
采用基因表达式编程的沟灌入渗模型参数估计方法   总被引:1,自引:0,他引:1  
刘琨  黄冠华 《水利学报》2017,48(11):1293-1302
入渗参数的准确估计是沟灌系统设计优化的关键问题。本文基于基因表达式编程(GEP)算法,通过数值试验获得了沟灌入渗模型参数γ估计GEP算法所需的有效数据集合,进行了参数γ的敏感性分析,确定了模型参数γ估计GEP算法的输入因子及其最优组合,建立了γ与最优组合因子的定量关系,进而提出了γ的估计方法。研究结果表明,γ对积水深度、初始有效含水率和沟深度最敏感;土壤水力特性参数对γ影响较大,模型参数γ估计GEP算法的最优输入因子组合为积水深度、沟深、初始有效含水率、饱和导水率和进气值参数;变积水深度条件下γ的估计值与定积水深度的γ值相近;在变积水深度条件下,与利用HYDRUS-2D模型计算得到的"精确"入渗量相比,应用基于γ估计值的沟灌入渗模型计算的累积入渗量误差小于5%,满足计算精度要求。入渗过程中边界效应对总入渗量的贡献逐渐增大,与细质土壤相比,粗质土壤中边界效应对总入渗量的贡献更大,本研究条件下黏壤土中边界效应最终贡献约为25%,砂土中约为37%。研究表明GEP算法可作为沟灌入渗模型参数γ估计的一种有效方法。  相似文献   
59.
中国传统雕塑和传统绘画都是历史上最具有魅力的两种艺术形式,也是素材和品种最为繁多的艺术,两者有很多方面是相融相通的,其中又以木雕,尤其是明清家具木雕与绘画最为相似。文章将通过对明清家具和传统绘画的客观比较,得出两者在造型方面的相似之处,这种互通性对当今新中式家具及发展当代家具雕刻有着积极的现实意义。  相似文献   
60.
该文对高校科研管理工作进行了详细分析,结合高职院科研工作的特点,设计并开发了基于C/S和B/S混合模式的科研管理信息系统,该系统从某高职院科研管理工作的业务流程和教职工的实际需要出发,设计了相应的功能模块和操作流程,应用了正则表达式技术直接从“知网”提取教职工论文发表信息,节省了数据录入时间. 该系统投入运行近两年,使用结果表明,该科研管理系统使科研管理工作更加规范,工作效率大大提高.  相似文献   
设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号