黄曲霉毒素G1人工抗原的合成

以间氯过氧苯甲酸(m-chloroperbenzoie acid,MCPBA)为氧化剂,使黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1,AFG1)转化为其8,9.环氧化物,与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)在两相反应体系中实现偶联,得到复合物AFG1-BSA.复合物紫外扫描结果显示其扫描图谱与BSA和黄曲霉毒素G1的图谱有明显差异,同时复合物与BSA荧光强度的差异,这表明BSA与黄曲霉毒素G1偶联.AFG1-BSA中AFGl与BSA的摩尔比为4.29:1.以合成人工抗原免疫小鼠,制备了特异性的鼠抗AFG1多克隆抗血清.用间接ELISA法测得抗体血清的最高效价可达1:16000,并测定了抗体的敏感度以及特异性.     

烟草根际固氮菌的筛选、鉴定及优化培养

对四川广元烟草主产区三个种植基地的烟草根际固氮菌进行筛选, 分离出28 株具有固氮活性的菌株。 经扩增rDNA 限制性酶切片段分析法(ARDRA) 初步分类, 共获得5 个操作分类单元(OTU), 并由16S rDNA 序列进行了分析鉴定。结果表明不同分类单元分别是:苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和炭疽杆菌。优化了N7 菌株(巨大芽孢杆菌) 培养条件, 确定其最佳碳源为蔗糖, 最适宜初始pH 值为7.5, 最适温度为30℃。      

气调醇化过程中片烟细菌群落结构的变化

气调醇化是片烟醇化的一种方法。微生物尤其是细菌在片烟醇化过程中对烟叶的吸食品质起着至关重要的作用。为研究气调醇化过程中片烟细菌群落结构变化规律,利用Illumina MiSeq测序平台比较气调防霉杀虫阶段（S1）、气调醇化阶段（S2）及气调保质阶段（S3）共36份样品的细菌16S rDNA序列的多样性。结果表明,从S1到S3的过程中,片烟中细菌的物种丰富度和多样性水平呈增加趋势。S1阶段片烟的优势种群为鞘氨醇单胞菌属、假单胞菌属和甲基杆菌属,其占比在整个气调醇化过程中呈逐渐下降趋势;S2阶段的优势种群为芽孢杆菌属、鞘氨醇单胞菌属和伯克霍尔德菌属,其中芽孢杆菌属和伯克霍尔德菌属在整个气调醇化过程中占比呈先上升后下降的趋势;S3阶段细菌种群分布较为均匀。非度量多维尺度分析结果表明,3个醇化阶段的样品可以较明显地区分开来。可见,气调醇化过程中片烟的细菌种群组成非常丰富,不同醇化阶段活跃的微生物类群有所不同,鞘氨醇单胞菌属、假单胞菌属和甲基杆菌属主要在醇化前期参与了烟叶醇化过程,而芽孢杆菌属和伯克霍尔德菌属则主要在醇化后期发挥着微生物醇化的作用。     

除草剂莎稗磷多克隆抗体的制备

根据莎稗磷的化学结构特征,设计合成莎稗磷半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白偶联,免疫新西兰大耳白兔获得抗莎稗磷多克隆抗血清用于免疫分析试验。抗血清效价高达1∶160 000,100μg/L莎稗磷的抑制率达到了59.76%。抗体经Protein A-Sepharose 4B亲和层析柱纯化后,50μg/L莎稗磷的抑制率提高到92%,其它有机磷农药及结构类似化合物与抗体的交叉反应率均小于0.01%,表明了所制备莎稗磷抗体的高特异性。     

庆阳豆豉优势菌株的分离鉴定

为了确定庆阳豆豉的主要作用微生物,获得优势发酵菌株,以甘肃庆阳7个县区农户所制的发酵豆豉为材料,采用不同培养基分离纯化,通过平板透明圈法初筛,发酵液蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活性测定,对传统豆豉发酵微生物进行了分离筛选,最后对优势菌株进行生理生化鉴定及16S rDNA分子生物学鉴定。共分离出22株细菌菌株,初筛获得10株均可分解蛋白质、淀粉和纤维素能力的菌株,其中QY2b蛋白酶和纤维素酶活性最高,分别达到了25.37 U/mL和6.015 U/mL。通过对QY2b的形态观察及生理生化试验,结合16S rDNA鉴定手段,确定该优势发酵菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

Thermotoga neapolitana α-葡萄糖苷酶基因克隆及表达

本文拟克隆新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)的一种α-葡萄糖苷酶基因(TNAG),其GenBank注册号为lcl27401。首先以T.neapolitana DSM 4359基因组DNA为模板,通过PCR扩增目的基因并完成T克隆,在NCBI数据库中比对结果表明:目的基因与Thermotoqa sp.RQ2等氨基酸序列相似度高于99%。再将目的基因连接至表达载体pET-32a(+),并导入大肠杆菌Rosetta中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE显示表达蛋白的大小约为72KDa。热纯化后酶液测活反应的最适温度为80℃,最适pH在5.0左右。     

WT1基因的分子克隆

本研究采用PCR法扩增HpG2细胞中的WT1基因,克隆至pMD-T载体上,经蓝白班筛选获得阳性转化子,并测序.结果表明:WT1基因大小为320bp.     

真空包装酱猪肝中污染微生物的分离鉴定和抑菌研究

对腐败酱猪肝中的污染微生物进行分离培养和纯化,筛选到最适培养基结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂培养基VRBGA,得到了3种不同的污染微生物.经16SrDNA鉴定,一株球菌为血居吸虫肠球菌,两株杆菌分别为普通变形杆菌和猪粪便细菌.污染微生物的单一防腐剂研究表明,对血居吸虫肠球菌,Nisin、聚赖氨酸、单辛酸甘油酯和壳聚糖具有较好的抑菌作用,最小抑菌浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.2 mg/mL;对普通变形杆菌,脱氢醋酸钠、单辛酸甘油酯、D-异抗坏血酸和壳聚糖具有较好的抑菌作用,最小抑菌浓度分别为0.8、0.4、0.6、0.2 mg/mL;对猪粪便细菌,脱氢醋酸钠、单辛酸甘油酯和壳聚糖具有较好的抑菌作用,最小抑菌浓度分别为1、0.8、0.2 mg/mL.壳聚糖和单辛酸甘油酯能同时有效抑制腐败酱猪肝中的3种污染微生物.     

云南复烤烟叶不同地点醇化过程中可培养真菌种群分析

为较全面的了解云南复烤烟叶在不同地点醇化过程中真菌多样性,挖掘其中的有益微生物,提高烟草醇化品质,以复烤烟叶为试验材料,利用18S rDNA克隆测序技术,系统研究了其醇化过程中可培养真菌的种群结构。结果表明,醇化过程中,复烤烟叶叶面真菌数量除曲靖仓库在6月有所上升外,其余各地均随着醇化的进行而逐渐下降,其中曲靖和楚雄两地非常接近,元江最少;通过形态特征及18S rDNA鉴定,烟叶叶面真菌包括根霉属真菌、青霉属真菌、曲霉属真菌等24个真菌属（种）。不同地点,不同时期烟叶叶面真菌的数量、种类及优势种群不尽相同,而根霉属真菌始终为优势种群。     

牛乳主要过敏原αS1-酪蛋白的纯化鉴定及其多克隆抗体的制备

目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得α_S1-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别α_S1-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对α_S1-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质（等电点和含量）、免疫学技术和质谱技术对纯化的α_S1-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的α_S1-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性。结果:在4种酪蛋白中,α_S1-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26%的α_S1-酪蛋白,得率为27.19%。免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应（<0.25%）外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高。结论:本研究制备了高纯度的α_S1-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为α_S1-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础。