LPS与巨噬细胞中htrα2的表达及相关性研究

通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控.为了进一步证实LPS刺激的特异性,实验建立VSV(vesicular stomatitis virus)病毒感染巨噬细胞模型,采用荧光定量PCR,免疫荧光方法分别从htra2的蛋白水平和定位上研究htra2的变化与LPS刺激巨噬细胞产生效应的相关性;构建了htra2基因过表达的质粒pKH3-htra2-HA,采用ELISA,Western Blot及荧光定量PCR等方法,检测过表达htra2对巨噬细胞产生和分泌炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-1b(Interleukin-1b)的影响.实验结果表明:htra2仅在LPS刺激巨噬细胞的体系中受到调控,且过表达的htra2会上调巨噬细胞IL-1b和IL-6的表达水平.     

酶转化制备人参皂苷Rg2及其对巨噬细胞增殖分化的影响

利用Absidia sp.G8r菌产酶液,以人参皂苷Re为底物进行酶转化制备人参皂苷Rg2。采用硅胶柱层析法分离纯化人参皂苷Rg2,探讨了人参皂苷Rg2对巨噬细胞增殖及单核-巨噬细胞分化的影响。结果表明,人参皂苷Re转化为Rg2,酶转化率为66.3%。硅胶柱层析法对产物分离纯化,得到高纯度Rg2,HPLC检测纯度达95%,得率为13.1%。人参皂苷Rg2对巨噬细胞增殖分化的研究表明,低质量浓度(25～100μg/mL)对巨噬细胞的增殖抑制作用不明显,高质量浓度(大于100μg/mL)时对巨噬细胞的增殖抑制作用明显;当Rg2质量浓度为100μg/mL时,能促进单核-巨噬细胞的分化。     

山药多糖对丙烯酰胺诱导的巨噬细胞氧化损伤的保护作用

该文研究山药多糖对丙烯酰胺(acrylamide, AM)诱导的巨噬细胞氧化损伤的保护作用。以AM诱导小鼠巨噬细胞(RAW264.7)损伤,山药多糖进行保护,检测山药多糖对细胞增殖、吞噬活力以及氧化应激的影响;并构建生物大分子(蛋白、脂类、DNA)氧化损伤模型,评价山药多糖对生物大分子的保护作用。结果表明,与正常对照组相比,不同质量浓度的山药多糖对细胞增殖影响无显著性差异。与诱导组(AM)相比,不同浓度的山药多糖能显著促进细胞生长和提高细胞吞噬活力。山药多糖预处理能有效抑制细胞活性氧产生,减少丙二醛累积,提高细胞超氧化物歧化酶活性。此外,山药多糖对生物大分子也具有良好的保护作用。山药多糖可以通过提高细胞抗氧化能力,抑制细胞的氧化应激,抑制生物大分子氧化损伤,从而有效保护丙烯酰胺诱导的巨噬细胞氧化损伤。该研究为控制丙烯酰胺毒性及山药多糖的开发利用提供理论依据。     

虫草素对脂多糖诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用研究

目的:研究虫草素对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用。方法:培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用LPS（1μg/m L）激活巨噬细胞,同时给予0.1¹0μmol/L的虫草素处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞存活率,Griess法检测细胞一氧化氮（NO）释放量,酶联免疫吸附分析实验（ELISA）分别检测三种细胞炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和白介素-6（IL-6）的释放水平,采用Fluo-3/AM染色法以流式细胞仪测定胞浆游离钙离子浓度([Ca²⁺]i)的变化,采用水杨酸法考察虫草素对羟自由基（·OH）清除作用,L-酪氨酸法检测其对过氧亚硝酸根离子自由基（ONOO-）清除作用,邻苯三酚自氧化法检测其对超氧阴离子自由基（O₂^-·）清除作用。结果:虫草素在0.1¹0μmol/L浓度范围内可显著抑制LPS激活的RAW264.7巨噬细胞释放NO及3种炎症因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）,同时对细胞存活率无显著影响;虫草素（10μmol/L）可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞内[Ca²⁺]i水平异常升高;此外,虫草素对·OH、ONOO-和O₂^-·自由基具有显著清除作用。结论:虫草素可抑制LPS激活的RAW264.7巨噬细胞释放NO及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6,这可能与其抑制了细胞内[Ca²⁺]i的增高及清除·OH、ONOO-和O₂^-·自由基有关。虫草素可能对巨噬细胞过度激活引起的炎症相关疾病具有一定的防治作用。      

低分子量透明质酸对小鼠巨噬细胞和T细胞的免疫调节作用

低分子量透明质酸（LMWHA）由自由基氧化降解方法制备,通过体内动物实验和体外细胞实验研究了LMWHA对小鼠巨噬细胞和T细胞的免疫调节活性。在体内免疫抑制鼠实验中,察看了LMWHA对2,4-二硝基氟苯（DNFB）诱导的迟发型超敏反应（DTH）的影响,测定了血清溶菌酶含量、脾脏以及胸腺指数。结果表明:LMWHA（20¹20 mg/kg·d）能够促进免疫抑制小鼠的DTH反应,改变血清溶菌酶含量、提高脾脏和胸腺指数,并呈作用剂量依赖关系。在体外细胞实验中,LMWHA（25²00μg/m L）加强了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性以及一氧化氮合酶（i NOS）活性,提高了一氧化氮（NO）的生成量,促进了脾脏T淋巴细胞的增殖。由此可见LMWHA能够调节小鼠的细胞免疫和非特异性免疫功能。      

卵转铁蛋白体外免疫活性研究

研究卵转铁蛋白(OVT)的体外免疫活性。分别采用中性红吞噬法测定卵转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;MTT法测定卵转铁蛋白对小鼠腹腔巨噬和脾淋巴细胞增殖作用的影响;双抗体夹心ELISA法测定卵转铁蛋白对脾淋巴细胞IL-2分泌水平的影响。结果表明,OVT能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对中性红吞噬能力(P<0.01),协同LPS促进腹腔巨噬细胞的增殖(P<0.05),并显著改善由CsA引起的对小鼠腹腔巨噬细胞增殖活性的抑制作用(P<0.05);OVT能显著促进脾淋巴细胞的增殖(P<0.01),协同LPS和ConA促进小鼠脾淋巴细胞的增值(P<0.05),并能显著促进小鼠正常脾淋巴细胞IL-2的分泌(P<0.01)。在体外培养的条件下,卵转铁蛋白对正常小鼠免疫细胞的免疫能力有促进作用。     

甘草多糖对腹腔巨噬细胞分泌TNF-α及mRNA表达的影响

研究了甘草多糖(GP)对巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌及mRNA表达的影响.结果表明:GP能剂量依赖性地增加活化的巨噬细胞TNF-α的分泌量,当GP的添加量为200μg/mL时,TNF-a的分泌量和TNF-α mRNA表达达到峰值.在GP添加量为100μg/mL,培养时间为12 h时,TNF-α的分泌量和TNF-α mRNA表达量最大.     

富硒酒色着色菌增强小鼠免疫功能的评价

光合细菌作为一种新的食品资源越来越受到人们的重视。本文以小鼠为对象,采用巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数、溶血素、足跖厚度、胸腺重等指标的变化为依据,系统评价了富硒酒色着色菌增强小鼠免疫功能的效应。结果表明,富硒酒色着色菌对小鼠巨噬细胞吞噬指数、巨噬细胞吞噬率、溶血素、足跖厚度、胸腺重都有显著的增强作用。指示富硒酒色着色菌对小鼠的非特异性免疫(巨噬细胞吞噬功能)、特异性细胞免疫(迟发型过敏反应)和体液免疫(溶血素含量)都有显著的增强作用。     

滑子菇多糖的免疫活性及抗肿瘤作用

本文选用豚鼠血清为补体的模型进行体外抗补体实验的检测、采用体外对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7的毒性试验、腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性能以及刺激巨噬细胞产生NO和H2O2的能力来研究滑子菇多糖的免疫活性;通过对人体前列腺癌22Rv.1细胞和人体肝癌Hep 2B细胞增殖的抑制作用试验对滑子菇多糖的抗肿瘤活性进行研究。实验显示,滑子菇多糖具有较好的抗补体活性,并且活性随多糖浓度增大而增强,多糖浓度达到12.5 mg/mL活性变化不大,多糖浓度在0.005-0.5 mg/mL范围在一定程度上能够促进巨噬细胞的增殖,能增强腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性能,并且促进巨噬细胞分泌NO和H2O2能力,表明滑子菇多糖具有较好的免疫活性;对人体前列腺癌细胞和人体肝癌细胞这两种癌细胞具有较强的抑制作用,并且活性与浓度呈现量效关系。     

野生亚侧耳多糖的提取和对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用研究

本研究从亚侧耳子实体中分离出水溶性亚侧耳多糖(HSP),通过体外实验评估其对Raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用。采用WST-1法检测HSP对巨噬细胞增殖作用的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)浓度,ELISA法检测HSP对淋巴细胞中一肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE₂)等细胞因子分泌量的影响,反转录聚合酶链式反应分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、TNF-α和IL-1β的转录水平表达量。结果表明,HSP可显著提高Raw264.7细胞内NO的浓度,在HSP浓度为100.00 μg/mL时,NO的分泌量达到最大值(29.94 mmol/L)。与空白组相比,HSP可以显著提高TNF-α、IL-1β、PGE₂等免疫因子(P<0.05)的分泌量,其中IL-1β、PGE₂的25 μg/mL剂量组中各因子分泌量(31.9524 pg/mL,1.8174 ng/mL)均与LPS(脂多糖)阳性对照组相接近。反转录聚合酶链式反应分析结果表明,HSP能够提高iNOS和COX-2的蛋白表达量。HSP具有免疫调节的功能,可以作为免疫调节剂添加到功能性食品和药品中。