过敏原肌质钙结合蛋白在毕赤酵母中的表达、优化及免疫反应性研究

目的 探究天然肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein, SCP)的可替代物,为蟹类过敏原的检测提供基础材料,本研究首次利用毕赤酵母(Pichia pastoris, P. pastoris)高效表达表达三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)重要过敏原SCP,并检验其免疫反应性。方法 根据毕赤酵母的密码子偏好性优化SCP基因并构建重组质粒。将其热激转化至P. pastoris GS115菌株后经遗传霉素(Geneticin, G418)筛选获得阳性高拷贝子。最后通过甲醇诱导表达重组SCP并结合免疫印记(Western blotting, WB)和间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)验证其免疫反应性。结果 SCP在P. pastoris GS115中实现了可溶性高效表达,其表观分子量约为28 kDa。在摇瓶水平下,最佳诱导条件为pH为6.0、每24 h添加1.0%(v/v)甲醇,于28℃发酵144 h,在此条件下,纯度为91.6%的SCP产量可达15 mg/L。WB和间接ELISA结果表明,重组SCP具有IgG结合能力。结论 毕赤酵母表达系统可以得到纯度较高且免疫反应性良好的重组SCP。本研究为SCP的理化研究及产业化应用奠定了基础,并有望促进特异性甲壳类过敏原检测的发展。     

滋润干裂肌肤药膳两款

寒冷的季节,各种皮肤问题也随之而来。其中最常见的是全身瘙痒难忍、手足干裂出血,医学上称之皲裂症。这种情况的出现是因为冬春季空气比较干燥,气温较低,皮肤血液供给减少,皮脂腺分泌减弱,皮肤缺少濡养。此时,多吃一些具有养阴润燥作用的佳肴,常会收到意想不到的效果。     

电脑族润眼良方

夏日炎炎,许多人喜欢躲在空调房间里图个清凉。时间长了,不仅皮肤得干燥缺水,眼睛也可能出现干涩、异物感、     

氦氖激光对人胚腱细胞生长分泌的影响

目的 阐明氦氖激光促进人胚腱细胞增殖及分泌胶原的机制。方法 将传代培养的人胚腱细胞分为对照组、照射1日组、照射3日组及照射5日组。在氦氖激光照射的不同时相点，分别测定细胞DNA含量，cAMP水平及胶原分泌量。结果 在氦氖激光作用早期（1－3日），细胞cAMP水平与DNA合成均呈明显升高（P＜0.05)，细胞内信使物质合成及细胞增殖加快，但胶原分泌无变化，而在氦氖激光作用晚期（3－5日），当cAMP水平及DNA合成都不再改变时，腱细胞分泌胶原量显著增加（P＜0.01)。结论 氦氖激光可能通过作用于cAMP蛋白激酶A信号转导系统，从而调控人胚腱细胞增殖及胶原分泌。提示临床应用氛氖激光促进肌腱愈合宜从早期开始，并且需要照射足够长的时间。     

低强度激光血管内照射对脑梗塞患者内皮分泌功能的影响

[目的]为了探讨低强度激光血管内照射的作用机理。[方法]我们采用放射免疫法和比色法观察了40例脑梗塞患者低强度激光血管内照射前后血浆ET-1、NO含量的变化。[结果]血浆EF-1含量由照射前82.26±8.15ng/降为62.7±8.08ng/ml,血浆NO含量由照射前的15.80±2.08μmol/L,差异均具有非常显著性(P<0.01)。[结论]低强度激光血管内照射抑制了ET-1的合成和释放,促进NO的分泌,这可能是其发挥生物学效应的机理之一。     

内分泌细胞溶酶体的超微结构研究

用电镜细胞化学方法研究内分泌细胞溶酶体的结构与功能。研究结果表明，所有内分泌细胞都存在丰富的溶酶体，分泌自噬作用普通存在于分泌肽类激素的细胞中，自体吞噬活动跃是分泌类固醇素细胞的重要特点。溶酶体通过分泌自噬和自体吞噬分别在两类内分泌细胞中参与激素分泌的调节。     

信号肽优化在枯草芽孢杆菌体系中对脂肪酶LipS分泌表达的影响

枯草芽孢杆菌具有良好的安全性和优异的外分泌能力,是目前常用的脂肪酶异源分泌表达体系。在枯草体系中如何提高脂肪酶分泌量是目前的研究热点。该体系中信号肽与目的基因不匹配和目标蛋白总表达量不高是导致脂肪酶LipS分泌表达效果较差的重要原因。针对这些问题,依据信号肽结构特征的不同(正电荷与疏水氨基酸个数的差异)对枯草芽孢杆菌体系中Sec和Tat这两个主要分泌途径的信号肽进行了筛选,结果显示Tat途径中的phoD信号肽分泌效果明显优于其他信号肽。在此基础上,通过替换使用诱导型表达载体、突变优化phoD信号肽,并考察了表达条件的影响,显著提高了脂肪酶LipS的分泌表达量,发酵液中转酯酶活达到62.07U/L,占总酶活的62.30%,较原始分泌表达体系的分泌量提高了13.7倍。     

信号肽及发酵条件优化促进胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中分泌表达

胶原蛋白独特的三股螺旋结构,使其具有良好的力学性能和生物相容性,在生物医学材料等方面有广泛应用。利用微生物表达重组胶原蛋白,具有发酵周期短、成本低、便于遗传操作等优点,近些年发展迅速,但分泌带有三股螺旋结构的重组胶原蛋白仍是研究的难点。该研究以来源于化脓性链球菌的胶原蛋白V-B为对象,搭建了谷氨酸棒杆菌分泌表达重组胶原蛋白的平台。在重组胶原蛋白V-B前端引入6种不同信号肽(CspB、PorB、Cg1514、CgR0949、Cg2052或TorA),构建重组表达载体,并转入食品级表达宿主谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum ATCC 13032中,结果显示PorB信号肽介导的分泌效果最好。此外,对PorB信号肽介导的分泌表达进行培养基、起始诱导菌浓度、诱导时长、IPTG浓度、溶氧的优化,最终胶原域B在摇瓶水平产量达到30 mg/L,是优化前的3倍,并通过圆二色谱表征,验证其正确折叠为三股螺旋。该研究为重组胶原蛋白在谷氨酸棒杆菌中的高效分泌表达奠定了基础。     

食源性生物活性肽调控胃肠激素分泌研究进展

胃肠激素是肠内分泌细胞(EECs)分泌的一大类多肽和胺类物质,在机体食欲调控、胃肠运动、消化酶分泌、血压和血糖控制等诸多方面发挥重要作用。胃肠激素的分泌受膳食因素调控,而食源性生物活性肽(FBPs)是调控胃肠激素分泌的重要膳食因子之一。本文综述近年来FBPs调控胃肠激素分泌的作用机制及研究进展,并对未来研究方向进行展望,以期为FBPs在调控胃肠激素分泌及促进机体健康方面的研究和应用提供参考。     

增强ESAT6-CFP10融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答佐剂的筛选

目的筛选能增强特异性抗原早期分泌抗原靶6蛋白(Early secretory antigenic target 6,ESAT6)-培养滤出液蛋白-10(Culture filtrate protein 10,CFP-10)融合蛋白(E1C0)诱导小鼠细胞免疫应答的佐剂,建立基于细胞免疫应答的小鼠模型,以评价基于体外干扰素γ释放分析(IFNγrelease assay,IGRA)结核诊断方法中特异性刺激抗原E1C0的活性。方法建立小鼠IFNγ双抗体夹心SABC-ELISA检测系统,并验证系统的线性、灵敏度、重复性和特异性。将BALB/c小鼠随机分为7组:E1C0+单磷酸类脂A(Monophosphoryl lipid A,MPL)+双十八烷基二甲基溴化铵(Dimethyl dioctadecylammonium bromide,DDA)组、E1C0+DDA组、E1C0+MPL组、E1C0+弗氏不完全佐剂(IFA)组、E1C0组、生理盐水组和MPL+DDA联合组,每组6只,经小鼠后肢内侧皮下免疫3次,间隔2周,免疫剂量为:E1C0 100μg/只,MPL 25μg/只,DDA 250μg/只,IFA 100μl/只。末次免疫4周后处死小鼠,无菌取脾,分离脾淋巴细胞,加入E1C0进行培养,MTT法检测特异性淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测培养上清中IFNγ水平。采用筛选出的最佳佐剂与抗原组合免疫3批BALB/c小鼠,进行IFNγ诱生测定。结果检测系统的线性范围为:40～2 560 pg/ml(R>0.98);灵敏度为40 pg/ml;变异系数(CV)<15%,检测大鼠、豚鼠和兔血清IFNγ均为阴性;E1C0+MPL+DDA组、E1C0+IFA组和E1C0+DDA组小鼠特异性淋巴细胞增殖刺激指数均明显高于生理盐水组(P<0.01);E1C0+MPL+DDA组小鼠的脾淋巴细胞经E1C0体外刺激后,产生的IFNγ水平明显高于其他组(P<0.001);重复试验结果显示,E1C0+MPL+DDA组3批小鼠免疫后,脾淋巴细胞诱生的IFNγ水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 E1C0与MPL和DDA联合免疫所诱导的小鼠Th1型细胞免疫应答最强,成功建立了用于评价刺激抗原E1C0活性的小鼠模型。