连续肌注恩诺沙星对中华草龟的急性和慢性毒理研究

为研究恩诺沙星对人工养殖中华草龟Chinemys reevesiis的药物毒性影响,在急性毒性试验中,将60只体质量约20 g的中华草龟随机分为6组,分别注射剂量为649.9、484.1、360.5、268.5、200.0、0(对照)mg/kg(体质量)的恩诺沙星,在慢性毒性试验中,将16只体质量约为100 g的中华草龟随机分为4组,分别注射剂量为0(对照)、10、30、50 mg/kg(体质量)的恩诺沙星,连续注射30 d,停药30 d,并在第0、2、13、28、40、50、60 d各抽取0.4 m L血液进行生化检测。结果表明:急性毒性试验中,观察两周后用Bliss法计算出半数致死浓度(LD50)为434.45 mg/kg,对死亡龟进行组织学检查显示,龟肝组织的肝细胞索结构混乱,有较严重淤血,大量嗜酸性粒细胞浸润,胃肠壁有水肿;慢性毒性试验中,注射过程中高剂量组(50 mg/kg)3只龟死亡,中剂量组(30 mg/kg)1只龟死亡,龟血清谷草转氨酶(AST)活性随时间呈先上升后下降的趋势,中剂量组显著高于低剂量组(10 mg/kg)和对照组(P<0.05),在停止注射后,中、高剂量组总胆红素(T-bil)含量均迅速上升,剖检和组织学检查可见高剂量组肝脏密度减小,肝组织出现大小不一的空泡变性,肝小叶和肝细胞索无法辨识,肺组织结构混乱,胃肠道内有黄色黏稠液体,胃肠壁变薄、水肿,而肾组织无严重病变,注射部位肌肉出现较严重的水肿和炎症。研究表明,连续肌注恩诺沙星对中华草龟具有明显的肝毒性,且对肺、胃、肠道和肌肉组织也有一定的毒性,无肾毒性。     

液相色谱串联质谱检测鳗鱼中四种氟喹诺酮残留

建立了液相色谱/串联质谱法测定鳗鱼中恩诺沙星,环丙沙星,诺氟沙星,氧氟沙星的方法.对分离和检测这四种兽药残留的液相色谱条件、质谱条件、样品前处理方法等作了详细的研究.用乙腈萃取样品中的残留物,在氮气保护下将萃取液浓缩干,加流动相1.0 mL溶解残渣,正己烷液液萃取,弃上层液,下层溶液用作液相色谱分析荧光检测或质谱检测.在鳗鱼样品中添加四种残留物,添加浓度分别为0.01,0.050和0.100mg/kg,平均回收率(n=6)在70～84.3%之间,相对标准偏差为3.0%～6.3%.     

厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附规律

废水中恩诺沙星浓度为2~200 mg/L,采用灭活和活性厌氧颗粒污泥进行吸附,研究了吸附平衡时间和p H值对吸附的影响,以及在20、30、40℃条件下,厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附等温曲线。结果表明,活性厌氧颗粒污泥与失活厌氧颗粒污泥的吸附规律基本一致。失活厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附基本在6 h内达到吸附平衡,去除率维持在95.0%~97.0%;p H值在3~9范围内,吸附效果基本没有变化,去除率为93.6%~97.4%,当p H值大于9时,吸附效果明显减低,去除率仅为60.7%;在20~40℃条件下,失活厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附量会随温度的升高而降低,且失活厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附都符合Freundlich方程和Langmuir方程,其中Langmuir方程能更好的拟合失活厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附,说明失活厌氧颗粒污泥对恩诺沙星的吸附为单分子层吸附,不存在复杂的螯合以及络合作用。     

恩诺沙星单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

采用抗恩诺沙星单克隆抗体建立酶联免疫吸附法（ELISA）用以检测恩诺沙星在动物源性食品中的残留。经方法学鉴定,本方法的检测范围为0．5～50μg／L,灵敏度为0．2μg／L,批内变异系数〈10％,批间变异系数〈20％。鸡肉、鱼肉、虾和蜂蜜样品的回收率分别为95．5％～107．5％、80．0％～101．3％、105．7％～122．7％和93．3％～111．3％。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

磁性多壁碳纳米管的制备及对恩诺沙星的吸附性能

利用混酸H_2SO_4-HNO_3对多壁碳纳米管(MWCNTs)进行羧化处理,再经化学共沉淀法制备磁性MWCNTs。采用FT-IR和SEM对制备的样品进行表征。FT-IR表明羧化后有效引入羧基、羟基等含氧官能团,磁化后引入了磁性Fe—O基团。SEM表明磁化后MWCNTs表面粗糙,包覆铁的氧化物。以HPLC/UV为检测手段,研究了制备的磁性MWCNTs对恩诺沙星的吸附性能。结果表明50 mg磁性MWCNTs对5 mg/L恩诺沙星在30℃、30 min时吸附率达到了97.27%。对磁性MWCNTs吸附恩诺沙星进行等温吸附线性拟合,Langmuir方程的拟合系数r=0.861 2。吸附恩诺沙星达平衡的磁性MWCNTs被10 mL 10%氨水-甲醇洗脱,解吸率达到89.23%。50 mg磁性MWCNTs SPE柱对5 mg/L恩诺沙星的穿漏体积为20 mL,磁性MWCNTs对恩诺沙星吸附容量为2 mg/g。     

恩诺沙星免疫亲和柱的制备与应用研究

将制备获得的恩诺沙星(Enrofloxacin,ENR)多克隆抗体与Sepharose 4B进行偶联,获得恩诺沙星免疫亲和柱(immunoaffinity column,IAC),并对IAC柱的性能和应用前景进行评价。结果表明:恩诺沙星多克隆抗体效价为1.28×105、半抑制浓度为5.47 ng/m L;制备的IAC柱的柱容量为2.54 g/m L凝胶,IAC柱的平均回收率为98.9%,柱与柱之间的变异系数为3.0%;牛奶中ENR的加标回收率分别为96.5%~99.8%。     

适配体增强金纳米粒子类过氧化物酶活性快速检测鸡蛋中的恩诺沙星

目的 利用核酸适配体增强金纳米粒子类过氧化物酶(peroxidase,POD)活性,建立了一种快速检测鸡蛋中恩诺沙星的方法。方法 金纳米粒子具有类POD活性,能催化H₂O₂氧化3,3’-5,5’四甲基联苯胺(3,3’-5,5’tetramethylbenzidine, TMB)反应,加入核酸适配体后,适配体通过Au-N键吸附于金纳米粒子表面,使催化活性增强;进一步加入靶标物恩诺沙星后,核酸适配体与靶标物特异性结合而脱离金纳米粒子表面,使催化活性减弱。基于此建立了恩诺沙星比色检测方法,优化了反应条件,并将其用于鸡蛋样品检测中。结果 在核酸适配体浓度为10 nmol/L, TMB浓度为0.3 mmol/L,显色反应时间为20 min时,反应体系的吸光度变化随恩诺沙星浓度在5～150μmol/L范围内具有良好的线性关系,检出限为1.98μmol/L。该方法具有良好的选择性和抗干扰能力,将此法用于鸡蛋中的恩诺沙星的检测,加标回收率为92.67%～109.04%。结论 该方法简便快速,为鸡蛋中恩诺沙星检测提供了一种新的尝试方法。     

一种新型定量检测恩诺沙星量子点免疫层析方法的建立

恩诺沙星作为一种应用较为广泛的抗生素,因在实际抽检中出阳率较高引起了广泛的重视。本研究建立了一种可以快速定量检测恩诺沙星,采用量子点进行标记和示踪的免疫层析方法。通过对新型的纳米荧光材料量子点结合抗原抗体等活性材料的技术研究、样本前处理试剂的研发、浓度的筛选优化等技术实现量子点材料与食品基质的配适,建立定量检测恩诺沙星免疫层析的平台。通过对试剂盒整体的相关优化,本检测方法线性范围为2~1000 ng/mL,最低检测限为1.80 ng/mL,精密度可控在10%以内,热加速稳定性为37 ℃可稳定放置10 d,性能优越。与传统液相色谱方法比较,简便快捷,整体检测时间可控在20 min内,检测结果相关性较好,相关系数为0.98。本研究弥补国内对量子点与免疫层析技术相结合定量检测食品类抗生素残留方面研究的空缺,可实现大批量现场原材料的快速筛查,推动食品快检技术的发展。     

不同水温条件下恩诺沙星及其代谢物在俄罗斯鲟体内的代谢及消除规律

目的探究12～15℃低水温及18～21℃高水温条件下,恩诺沙星在俄罗斯锝体内的代谢及消除规律。方法以60 mg/(kg·bw)剂量连续5 d对体重为(750±50) g的健康俄罗斯锝灌服恩诺沙星,并于停药后1～140 d内连续采集血浆、肌肉、肝脏、肾脏、皮肤及鳃样品,经高效液相色谱-串联质谱法测定其中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星含量,研究连续5 d给药后恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在俄罗斯鲟体内的代谢及消除规律,得出不同温度条件下的休药期。结果在2种水温条件下,恩诺沙星在俄罗斯锝体内各组织中的达峰时间t_(max)均为1 d;夏季达峰浓度C_(max)小于冬季C_(max);药浓度-时间曲线下总面积AUC随温度升高而增大;药物自体内消除的清除率Cl_(z/f)及消除半衰期T_(1/2z)数据均表明,随温度升高药物清除速度加快。恩诺沙星在俄罗斯锝体内代谢产物为环丙沙星,其消除趋势与恩诺沙星大致相同。结论以皮肤和肌肉作为可食性组织,以恩诺沙星和环丙沙星总量降至0.1 mg/kg为标准,连续5 d以60 mg/(kg·bw)对俄罗斯锝口灌恩诺沙星后,建议冬季低温条件下休药期为124.2 d,夏季高温条件下休药期为112.9 d。     

2018年鸡蛋的国家食品安全监督抽检结果分析

目的 分析2018年我国鸡蛋的食品安全形势。方法 汇总2018年鸡蛋国家食品安全监督抽检结果, 对其不合格项目等信息进行分析。结果 2018年共抽检鸡蛋1310批次, 检出不合格样品77批次, 总体不合格率为5.88%, 不合格原因是检出禁用兽药氟苯尼考、恩诺沙星、氧氟沙星。柴鸡蛋、草鸡蛋、土鸡蛋的不合格率分别为10.53%、8.93%和7.49%, 均高于普通鸡蛋。一季度和三季度抽样的鸡蛋不合格率分别为9.16%和5.74%, 明显高于二季度(2.56%)。结论 鸡蛋中检出氟苯尼考、恩诺沙星、氧氟沙星等禁用兽药的问题应当引起重视。