牛胎盘提取物促进淋巴细胞增殖活性的研究

探讨牛胎盘中提高机体免疫力活性成分的分离纯化及其活性验证。分别采用离子交换层析色谱、凝胶层析色谱和反相层析色谱对活性成分进行分离纯化：采用体外检测脾脏淋巴细胞增殖活性，筛选活性成分；采用反相层析图谱和毛细管电泳验证活性成分达到一定纯度。     

牛免疫球蛋白G的体外人源唾液酸化及Fc片段的制备

建立将牛免疫球蛋白G (bovine immunoglobulin G,bIgG)糖链末端N-羟乙酰神经氨酸酶切并连接人源N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)的方法,在实现bIgG转化为人源IgG (human IgG,hIgG)的基础上,研究hIgG可结晶(Fc)片段的制备...     

超声波处理对绿原酸与牛血清白蛋白结合作用的影响

采用荧光光谱法和紫外-可见吸收光谱法研究超声处理(40 kHz/30 min和50 kHz/30 min)对绿原酸(CGA)与牛血清白蛋白(BSA)作用的影响。通过荧光发射光谱来分析CGA对BSA的荧光猝灭作用;通过同步荧光光谱分析结合CGA后BSA酪氨酸(Tyr)残基与色氨酸(Trp)残基微环境的变化来确定CGA对BSA构象的影响;运用Stern-Volmer方程、Acharya方程等数学方程计算其猝灭常数、结合常数,以及结合位点数;通过焓变与熵变分析分子间作用力。利用华法林(WARF)、布洛芬(IBU)两种蛋白标记物来判断结合位点;利用紫外光谱测定BSA构象变化对比不同超声频率的影响。结果表明:在超声频率53 kHz时,CGA对BSA的荧光猝灭效果最为显著,超声处理使CGA-BSA复合物的构象发生一定改变,并对CGA与BSA的结合有增强作用,而不会改变反应的作用力类型。研究结果为超声处理对蛋白质与配体结合的影响研究提供参考。     

CdS-BSA-CTMAB荧光光度法测定食品中蛋白质的含量

实验以六偏磷酸钠为稳定剂,巯基乙酸为修饰剂水相合成了荧光试剂CdS量子点。结果表明,牛血清白蛋白(BSA)可使CdS的荧光峰增强,而阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)的加入,可使体系荧光峰显著增敏,并且荧光强度与BSA浓度在8.0×10-5～1.3mg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程为F=1486.94793+937.70328C,相关系数R=0.9957,检出限为7.4×10-5mg/mL。方法已用于食品中蛋白质的测定,与考马斯亮蓝法对照,结果满意。     

应用ELISA竞争法检测疫苗制品中残余的牛血清白蛋白

目的 应用ELISA 竞争（cELISA）法检测残余牛血清白蛋白（ESA）。方法 以BSA免疫家兔，获得高滴度的抗BSA血清；以BSA包被酶标板作为固相抗原，以梯度稀释的BSA为游离抗原，二者竞争结合抗体，以游离抗原浓度对数作为横坐标，相应吸收值为纵坐标作标准曲线，由对应样品的吸收值，可以求得样品中BSA含量。结果 当检测200、50、20和5ng/ml样品时，其试验内变异系数分别为4．5％、7．8％、5．8％和 14％，试验间变异系数分别为3．4％、8．8％、3.3％和30％。本试验还证明人血清白蛋白与牛血清白蛋白的交叉反应较低。结论cELISA可初步用于疫苗中残余BSA含量的检测。     

壳聚糖磁性微球的制备及其对牛血清白蛋白的吸附性能研究

以Fe/C为磁性内核、液体石蜡为分散介质、Span-80为乳化剂、环氧氯丙烷为交联剂,采用反相悬浮包埋法制备了壳聚糖磁性微球.对微球表面的活性基团含量进行了测定.研究了用戊二醛活化、Cibacron Blue 3G-A修饰后的微球对牛血清白蛋白的吸附性能.结果表明,小粒径壳聚糖磁性微球经戊二醛活化后对牛血清白蛋白的饱和吸附量为46.3 mg·g-1,经Cibacron Blue 3G-A修饰后对牛血清白蛋白的饱和吸附量为66.2 mg·g-1.     

牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备

目的提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体。方法采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度;SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA法检测其反应特性。将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水。结果纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml;相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02%和93.77%;纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合。共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10 240。结论已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础。     

氟碳化合物与环糊精包合物的制备及其对牛血清白蛋白的影响

以氟碳化合物FC-77作为模型药物,制备FC-77与β-环糊精（卢一cD）包合物。考察包合物与牛血清白蛋白（BSA）的相互作用。通过紫外-可见光谱、红外光谱、热重分析等方法研究包合物的物理化学性能。通过荧光光谱法研究包合物对BSA的荧光猝灭作用。结果为Fc-77与β-cD之间存在强烈的相互作用,从而增加了FC-77的稳定性和水中的溶解性。荧光猝灭结果显示FC-77分子能进入BSA的疏水区域。结论是以β-CD为介质,能显著改善FC-77的理化性能,使FC-77粉末化,便于制成多种剂型,扩大给药方式。     

牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化牛Ⅱ型链球菌(Streptococcus bovis biotypeⅡ)van B2蛋白。方法采用PCR法从牛Ⅱ型链球菌基因组DNA中扩增van B2基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-van B2,转化大肠杆菌Rossata(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Westernblot分析。结果 PCR扩增获得597 bp的van B2基因片段;重组表达质粒pET-28a-van B2经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组van B2蛋白相对分子质量约为29 000,主要以可溶性形式表达;纯化的重组蛋白纯度为70%,可被小鼠抗牛链球菌血清Ⅱ型多克隆抗体特异性识别。结论原核表达并纯化了牛Ⅱ型链球菌van B2蛋白,为van B2基因的耐药性研究奠定了物质基础。     

一种复合二氧化钛大孔共聚物的合成及其在扩张床吸附中的应用(Ⅱ)扩张和流体混合性能以及吸附性能

利用GET共聚物骨架结构中的环氧基与二乙胺反应得到的阴离子交换层析介质DEAE-GET,考察了该介质在扩张床STREAMLINE 25中不同黏度和流速对扩张性能和流体混合性能的影响,结果表明DEAE-GET在STREAMLINE 25中的扩张行为服从Richardson-Zaki方程.在研究的范围内,随着流体黏度和流速（100～500 cm•h^-1）的增加,理论塔板数和Bodenstein数逐渐减小,轴向混合系数逐渐增加;扩张床中的轴向混合系数很小（10^-6～10^-5 m²•s^-1）,表明柱内流体以近似平推流流动.在静态条件下DEAE-GET对牛血清白蛋白（BSA）的饱和吸附量为43.0 mg•ml^-1.同时比较了DEAE-GET与STREAMLINE DEAE分别在固定床和扩张床中对BSA的穿透曲线,发现都比较接近,DEAE-GET在固定床和扩张床中对BSA的最大吸附量分别为28.0 mg•ml^-1和26.2 mg•ml^-1.