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991.
992.
993.
994.
《Planning》2013,(8):1-2
目的:构建前手性酮类化合物的重组全细胞催化体系,并研究CbFDH C-端无序的11个氨基酸与酶活性的关系。方法:利用基因工程方法构建野生型LbADH,CbFDH及C-端11个氨基酸缺失的CbFDH截短突变体的表达菌株;SDS-PAGE分析其表达方式及表达量,利用分光光度计法测定全菌破碎上清中的酶活性;将含野生型LbADH及CbFDH的菌株与底物混合孵育,考察双菌全细胞体系的催化效果;并将含野生型CbFDH及CbFDHΔ354-364的菌液分别与含野生型LbADH的菌株混合催化苯乙酮的转化,比较两种菌的协助转化效率。结果:构建了重组表达载体pETDuet-1-adh,pETDuet-1-fdh及pETDuet-1-fdhΔ354-364,并实现了在大肠杆菌中的异源表达,含野生型LbADH及CbFDH的两种菌株能够实现苯乙酮的协同转化,转化率为24.4%,产物对映体纯度为96.79%;CbFDH及CbFDHΔ354-364分别占上清总蛋白的28.54%及37.72%,C-端的缺失未影响CbFDH的可溶性表达,但CbFDHΔ354-364全菌上清催化NAD+转化为还原型NADH的效率降低,为CbFDH粗酶液的29.82%;且重组菌株Rossetta(DE3)-pETDuet-1-fdhΔ354-364与Rossetta(DE3)-pETDuet-1-adh协同转化苯乙酮的转化率降低至8%。结论:重组菌株Rossetta(DE3)-pETDuet-1-adh与Rossetta(DE3)-pETDuet-1-fdh能够协同催化苯乙酮转化,转化效率为24.4%,产物对映体纯度为96.79%;重组菌株Rossetta(DE3)-pETDuet-1-fdhΔ354-364与Rossetta(DE3)-pETDuet-1-adh协同转化苯乙酮的效率为Rossetta(DE3)-pETDuet-1-fdh与Rossetta(DE3)-pETDuet-1-adh协同转化效率的32.79%,且Rossetta(DE3)-pETDuet-1-fdhΔ354-364全菌上清催化还原型辅酶再生的效率降低,提示C-端无序的11个氨基酸残基对CbFDH酶活性的发挥起着重要的作用。 相似文献
995.
《Planning》2017,(8):1479-1482
目的:探讨蛇床子素(osthole,Ost)预处理对大鼠心脏缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法:建立大鼠心脏缺血再灌注损伤模型。30只雄性SD大鼠随机平均分为Ost组、模型组和假手术组。假手术组和模型组手术前1 h给予生理盐水(50 mg·kg~(-1),腹腔注射),Ost组缺血前1 h给予Ost(50 mg·kg~(-1),腹腔注射),模型组和Ost组血管夹夹闭左冠状动脉前降支,置于32℃温箱30 min后松开血管夹,4 h后收集各组大鼠心脏和血清。HE染色后观察心脏病理学形态学变化,Western blotting检测P38,p-P38和p-NF-κB;RT-PCR检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的心脏表达和分泌;ELISA检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、心肌型肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。结果:与假手术组比较,模型组病理改变,p-P38、p-NF-κB、LDH、CK-MB、CK、IL-6、IL-1β和TNF-α表达均明显增加(P<0.05),但P38和NF-κB表达无明显差异。与模型组比较,Ost组病理改变,p-NF-κB、LDH、CK-MB、CK、IL-6、IL-1β和TNF-α表达明显减少(P<0.05),但p-P38表达进一步增加,而P38和NF-κB表达仍无明显变化。结论:Ost预处理可通过抑制炎症反应发挥对大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护作用,其作用机制与促进P38信号通路激活相关。 相似文献
996.
高压静电场对酿酒酵母菌的作用研究 总被引:14,自引:3,他引:14
利用高压静电场对甘蔗糖蜜工业生产用酿酒酵母菌进行处理,把酵母菌糖蜜进行酒精发酵,再利用气相色谱仪对产生的乙醇含量进行分析。结果表明,高压静电场对酿酒酵母菌具有明显的生物刺激作用。并找到乙醇含量具有较大变化的高压静电作用变异菌株,将高压静电作用变异菌株的乙醇脱氢酶同工酶的比较,证实高压静电场对酿酒酵母菌具有诱变作用。 相似文献
997.
998.
研究了以均匀设计的方法,在水相中制备不同取代度的辛烯基琥珀酸酸淀粉酯,以取代度为衡量指标,得到的最优组合为:温度31.4 ℃、OSA用量8.91%,淀粉乳浓度29%,pH值8.7,反应时间8.4 h,并对其糊化性质进行研究. 相似文献
999.
探究淡豆豉对急性酒精性肝损伤大鼠的肝保护作用;用低、高剂量[ 5 g/(kg·bw)、10 g/(kg·bw) ]的淡豆豉对大鼠进行为期一周的预处理,再用12 mg/(kg·bw) 52°红星二锅头一次性灌胃造成大鼠急性酒精性肝损伤,分别测定大鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等指标和肝脏中乙醇脱氢酶(ADH)、细胞色素P4502E1(CYP2E1)、超氧化物歧化酶(SOD)等指标,并采用H&E染色观察肝组织形态。结果表明,不同剂量的淡豆豉能够抑制血清中AST、ALT、和ALP水平的升高,抑制率最高为47.18%;不同剂量淡豆豉和阳性对照均能显著降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的水平,其中高剂量淡豆豉对IL-1β水平的抑制率达到了72.03%;高剂量淡豆豉预处理使肝组织中CAT的酶活升高到312.80 U/mg prot,SOD和GSH-Px的水平也显著高于模型组(p<0.01);肝组织切片结果表明淡豆豉能改善大鼠肝细胞损伤程度。因此,自制淡豆豉对ALD具有保护作用,主要是通过降低炎症反应和提高抗氧化能力实现的。 相似文献
1000.