三七总皂苷对体外培养人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的探讨三七总皂苷对体外培养的人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cell,hPDLC)增殖、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性及表达的影响。方法采用组织块法原代培养hPDLC,并经免疫组化鉴定;分别用10、1.0、0.1和0.01 mg/L浓度的三七总皂苷处理体外培养的hPDLC,设只加含10%FBS的DMEM培养基为空白对照,分别于1、3、5、7 d后,MTT法检测其对hPDLC增殖活性的影响,酶标仪上检测细胞中ALP活性,Western blot法检测细胞中ALP蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,细胞来源于外胚间充质;MTT结果显示,0.1 mg/L浓度组在第5天和1.0、10 mg/L浓度组在第3、5天hPDLC增殖活性明显高于空白对照组(P<0.01);0.1、1.0、10 mg/L浓度组在第3、5天ALP活性明显高于空白对照组(P<0.01),1.0 mg/L浓度组APL活性明显高于其他各组(P<0.01);0.01、0.1、1.0、10 mg/L浓度组ALP蛋白表达量均明显高于空白对照组(P<0.01),以1.0 mg/L浓度组ALP表达量最高。结论三七总皂苷有促进hPDLC增殖的作用,并能增加ALP活性及其表达水平。     

酸性磷酸酶在大鼠脉络丛上皮细胞内的亚细胞定位

研究大鼠脑室脉络丛上皮细胞内酸性磷酸酶(Acid phosphatase,AcPase)的超微结构分布.取成年SD大鼠侧脑室、第三脑室和第四脑室的脉络丛组织,按硝酸铅法进行酸性磷酸酶电镜酶细胞化学染色显示.透射电镜下ACPase阳性反应物仅见于脉络丛上皮细胞内的初级和次级溶酶体上.通过延长孵育时间和改变固定条件(戊二醛浓度为0.5%)在脉络丛上皮细胞内的高尔基复合体扁囊和囊泡中也观察到了ACPase阳性反应物.各脑室脉络丛上皮细胞酸性磷酸酶的分布未见明显差异.文中讨论了脉络丛上皮细胞内ACPase的分布特征及其功能.     

移植用供体肺Ⅱ型肺泡上皮细胞碱性磷酸酶的研究

用敏感的指标选择优良的保存液，最大可能地延长肺脏保存时间，可缓解肺移植手术时供体肺不足的状况。酶细胞化学反应敏感性强．可出现在供体肺的病理变化之前。因此，研究保存后供体肺的碱性磷酸酶（ALP）的超微结构变化．探讨ALP是否作为一种敏感的检测指标，具有一定的意义。     

前列腺酸性磷酸酶在胃癌中的表达及其体外诱导抗胃癌免疫应答

目的检测前列腺酸性磷酸酶(PAP)在胃癌中的表达水平,探讨PAP作为胃癌主动免疫治疗新靶点的可能性。方法分别用RT-PCR和Western blot方法检测胃癌细胞系中PAP mRNA和PAP蛋白的表达;用免疫组织化学方法检测胃癌组织中PAP的表达。利用PAP表位肽对胃癌患者的PBMCs进行体外诱导,ELISA法检测PAP特异性IFN-γ分泌水平;51Cr释放法检测CTLs的细胞毒活性。结果3种胃癌细胞(MKN-7、MKN-28和MKN-45)表达PAP mRNA,其中MKN-28和MKN-45表达PAP蛋白,胃癌组织中PAP呈阳性表达。从2/4胃癌患者PBMCs中诱导出的PAP多肽特异性CTLs可特异性杀伤HLA-A24+/PAP+的胃癌细胞MKN-45,CTLs的细胞毒活性依赖于CD8+T淋巴细胞。结论PAP有可能成为胃癌特异性免疫治疗的新靶点。     

骨特异性碱性磷酸酶在慢性肾脏病患者中的水平及与钙磷代谢的相关性分析

目的:探讨慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD) 3～5期患者的血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)水平及与钙磷代谢的相关性.方法:收集120例CKD 3～5期患者及40例健康者血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、甲状旁腺激素(iPTH)、钙(Ca),磷(P)等指标,并对其进行相关性研究.结果...     

生物信息学方法筛选华支睾吸虫成虫功能基因——钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白

目的本文通过建立华支睾吸虫成虫cDNA文库,筛选其功能基因。方法应用SMART方法构建华支睾吸虫成虫cDNA文库,进行大量EST测序,然后应用生物信息学方法将EST序列与GenBank中登陆的序列进行同源性比对、序列拼接及基因完整性判断;并应用NCBI上的RPSBLAST对所筛选基因的保守域进行搜索比对,利用PredictProtein分析、预测其功能域及二级结构。结果从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选的钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白(CsCBLP)基因,经同源性分析,CsCBLP与褐家鼠钙调神经磷酸酶(CaN)同源性为53%,与尾刺耐格里原虫CaNB同源性为40%,与新小杆线虫属结合蛋白的同源性为51%;保守域的比对及功能域、二级结构的预测显示所筛选的CsCBLP是钙调神经磷酸酶B亚基的的类似物,属于钙结合蛋白家族。结论应用生物信息学方法从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出钙调神经磷酸酶B亚基样蛋白基因。     

Botrytis cinerea蛋白磷酸酶的分离纯化及酶学性质

[目的]植物真菌病害灰霉病是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)侵染引起,它在世界范围内造成了严重的经济损失.B.cinerea易对化学药剂产生抗性,寻找更多对灰霉病有特效的生物农药是目前急需解决的难题.鉴于顺丁烯二酸酐类化合物良好的生物活性,研究此类化合物对蛋白磷酸酶的抑制效果.[方法]将发酵优化后的B.cinerea菌体经超声破碎、硫酸铵分级盐析、透析浓缩、DEAE-Sepharase离子交换层析等步骤分离纯化,并以SDS-PAGE验证酶纯度.考察所得纯酶的酶学性质,研究顺丁烯二酸酐类化合物对B.cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用.[结果]经分离纯化后,该酶SDS-PAGE为单一条带,提纯倍数达30.79倍,酶活回收率为39.26％.酶学特性研究结果表明其最适反应pH值为4.0,最适反应温度为37℃.该酶在pH值3.0～6.0,50℃以下内稳定.考察金属离子对B.cinerea蛋白磷酸酶酶活的影响,发现Mg2+、Fe2+、Ca2+、Ba2+能提高该酶活性,Zn2+、Cu2+、Mn2+对酶活有抑制作用.以p -NPP为底物的酶动力学参数Vmax和Km分别为12.71 mmol/(L·min)与12.84 mmol/L.4种顺丁烯二酸酐类化合物对B.cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用由大到小排名为苯基马来酸酐、4,5-二氯邻苯二甲酸酐、二甲基马来酸酐、顺丁烯二酸酐.[结论]此酶分离纯化步骤少,减少了酶活损失.以纯化的蛋白磷酸酶为靶标,顺丁烯二酸酐类化合物对酶活抑制效果良好,可研究抑制灰霉病机理及作为生物源农药开发.     

哈茨木霉丝/苏氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆表达

为深入研究丝/苏氨酸蛋白磷酸酶的功能,从哈茨木霉cDNA文库中克隆丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2A)基因,并成功构建到原核表达载体pET28a,在大肠杆菌中表达.表达产物经SDS-PAGE电泳分析,在40.5kDa处出现特异性条带.在22℃以0.5mmol/L IPTG诱导时,目的蛋白大部分以可溶形式存在,在37℃以1.0mmol/L IPTG诱导时,目的蛋白则大部分以包涵体存在.全长cDNA序列为1286bp,5′非编码区91bp、3′非编码区237bp,编码327个氨基酸,没有信号肽.本研究为PP2A基因的功能验证奠定基础,以便进一步研究蛋白磷酸酶的功能,从而获得更多关于哈茨木霉蛋白磷酸酶作用机制的信息.     

栉孔扇贝外套膜酸性和碱性磷酸酶电镜细胞化学研究

采用电镜细胞化学技术对栉孔贝（Chlamys farreri）外套膜中的酸性磷酸酶（ACP）和碱性磷酸酶（AKP）进行了定性定位研究。结果表明,外套膜的所有上皮细胞和结缔组织中部分务细胞呈ACP强阳性。上皮细胞中高电子密度阳性颗粒多为圆形,直径300－450mm;内多也呈ACP强阳性;微绒毛等呈弱阳性。血细胞中次级溶酶体内有数目和大小不同的ACP强阳性颗粒;内质网等内膜系统呈ACP弱阳性。外套膜的所有上皮细胞和血细胞均呈AKP强阳性。AKP阳性颗粒常沿着细胞膜分布;内质网等内膜系统呈AKP强阳性;上皮细胞中一种近圆形直径约250－420nm的颗粒也呈AKP强阳性。