发酵用鲜辣椒中乳酸菌抗生素耐药性与耐药基因

以四川泡菜发酵用的新鲜二荆条辣椒表面上附着的乳酸菌为研究对象,分析其对四环素(TET)、链霉素(STR)和红霉素(ERY)的耐药性与耐药基因。研究表明:用于发酵的鲜辣椒中,乳酸菌的含量约为2.18×104CFU/g,属于Weissella cibaria(61.93%)、Lactococcus lactis(16.06%)、Enterococcus mundtii(5.50%)、Enterococcus faecalis(3.67%)、Enterococcus hirae(3.67%)、Leuconostoc mesenteroides(6.88%)和Leuconostoc holzapfelii(2.29%)。所有218株分离株均无ERY耐药,但其中30株(13.76%)表现出TET和STR耐药,包括10株W.cibaria(4.59%)、2株Lac.lactis(0.92%)、1株E.mundtii(0.46%)、2株Leu.mesenteroide(0.92%)和1株Leu.holzapfelii(0.46%)STR耐药菌株,9株W.cibaria(4.12%)、2株Lac.lactis(0.92%)、1株E.faecalis(0.46%)和2株E.hirae(0.92%)TET和STR二重耐药菌株;除TET和STR二重耐药菌株W.cibaria CT024中未检出任何TET被检基因外,其它耐药株都有相应1个或多个被检基因被检出。其中,在5种STR被检耐药基因中,str B的检出率最高,达60.00%;aad6的检出率最低,为16.67%。11种TET被检耐药基因中,tet B和tet C的检出率最高,达到85.71%;tet Z的检出率最低,为7.14%。同时,同种内的不同菌株对STR或TET的耐药性高低与耐药基因的种类和数量多少无相关性。     

熟肉及速冻米面食品中变形杆菌污染状况及耐药特征分析

目的了解石家庄市市售熟肉制品和速冻米面食品中变形杆菌的污染状况,进一步研究菌株产超广谱β-内酰胺酶和对抗生素的耐药性。方法采取石家庄市市售熟肉制品和速冻米面食品进行变形杆菌分离培养,用BD Phoenix专家系统对所分离出的菌株进行鉴定和药敏试验。结果 377份样品中共有83份检出变形杆菌,总污染率为22.0%。其中熟肉制品、生制速冻米面食品和熟制速冻米面食品变形杆菌污染率分别为20.8%(32/154)、28.7%(43/150)和11.0%(8/73);变形杆菌计数范围为10~3~10~9cfu/g。药敏结果显示,80株奇异变形杆菌除对四环素和多粘菌素存在天然耐药外,对氨苄西林耐药率最高(36.3%,26/80),其次是头孢唑林(27.5%,22/80);3株普通变形杆菌除对四环素、多粘菌素、氨苄西林和头孢唑林存在天然耐药外,且均对氯霉素耐药。所有菌株均对阿米卡星、美罗培南、哌拉西林敏感。所分离的奇异变形杆菌中,有25.0%~33.3%产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);多重耐药(MDR)菌株占12.5%~33.3%。结论石家庄市市售熟肉及速冻米面食品中变形杆菌污染较严重,分离株产ESBLs和MDR水平较高,有潜在引起食源性疾病的风险。     

一起食物中毒病原菌斯坦利沙门菌的分子分型及耐药性分析

目的对引起跨区域食物中毒的斯坦利沙门菌分离株进行耐药性检测和分子分型分析,追溯并明确病因食品,为该菌防控工作提供科学依据。方法采用微量肉汤稀释法对15株斯坦利沙门菌进行18种抗生素敏感性试验,同时对菌株基因组DNA经限制性内切酶Xba I酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,并与数据库中其他沙门菌比较。结果此次疫情分离菌株中食品分离株和腹泻患者分离株血清型一致,耐药谱基本一致。经PFGE溯源分析后具有100%同源的PFGE带型,数据库中无相同带型的菌株。结论本起跨区域食物中毒是由斯坦利沙门菌污染的煮花生引起,分离菌株对红霉素耐药,对氯霉素处于中介,对其他抗生素敏感。     

体外沉默血管内皮生长因子对D-(-)-MTX/A549耐药细胞株迁移侵袭能力的影响

目的: 研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因沉默对D-(-)-MTX /A549耐药细胞株迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法: 采用siRNA技术沉默D-(-)-MTX/A549耐药细胞株VEGF基因, 细胞划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测VEGF、MMP-2 mRNA,Western blot检测p-ERK1/2蛋白的表达。结果: VEGF siRNA序列及阴性对照成功转染至D-(-)-MTX/A549后,VEGF mRNA表达水平明显下降, 与阴性对照相比下降了2.29倍,差异具有统计学意义（P=0.002）,表明转染成功。阴性对照组与空白组差异无统计学意义（P>0.05）。转染后,D-(-)-MTX/A549迁移和侵袭能力明显下降（P值均<0.05）,D-(-)-MTX/A549耐药细胞 MMP-2 mRNA、p-ERK1/2的蛋白达也较阴性对照水平明显下降（P值均<0.05）。结论: 抑制VEGF基因表达可以抑制D-(-)-MTX/A549细胞的迁移和侵袭能力,这一过程可能涉及到MMP-2和p-ERK1/2信号通路。     

市售酸奶中乳酸菌耐药性及耐药基因的检测

为探讨酸奶中乳酸菌所携带耐药基因对人类健康的潜在影响,对市售酸奶中的乳酸菌进行分离和鉴定,并通过药物敏感性实验确定菌株的耐药谱,同时利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增技术调查链霉素、庆大霉素、磺胺类和四环素等耐药基因的分布情况。结果表明：25 份市售酸奶样品中共分离得到56 株乳酸菌,包括26 株德氏乳杆菌保加利亚亚种、3 株植物乳杆菌、2 株嗜酸乳杆菌以及25 株嗜热链球菌。药敏结果显示,31 株乳杆菌对链霉素（87.1%）、庆大霉素（80.6%）、环丙沙星（74.2%）和四环素（61.3%）的耐药率较高,对头孢菌素类则较为敏感;而25 株嗜热链球菌同样对链霉素的耐药率最高,达76.0%;其次分别为万古霉素（32.0%）、环丙沙星（32.0%）和四环素（20.0%）。56 株乳酸菌中共检出5 种不同的耐药基因,分别为链霉素耐药基因ant(6)（检出率1.8%）、庆大霉素耐药基因aac(6')-aph(2')（检出率7.1%）、四环素耐药基因tetM（检出率5.4%）以及磺胺类耐药基因sulⅠ（检出率14.3%）和sulⅡ（检出率1.8%）。受试的乳酸菌中共有13 株检出耐药基因,其中有4 株携带两种不同的耐药基因。长期以来被认为安全并广泛应用于发酵食品领域的乳酸菌可能成为潜在的耐药基因贮存库。     

肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌Ⅰ类整合子与磺胺类耐药基因（sul1、sul2和sul3）的检测

目的：了解肉鸡屠宰场多重耐药沙门氏菌Ⅰ类整合子及磺胺类耐药基因携带情况。方法：采用纸片扩散法对肉鸡屠宰场84 株沙门氏菌分离株进行10 种抗生素敏感性实验;应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）方法检测多重耐药沙门氏菌sul1、sul2、sul3和int1基因。结果：84 株沙门氏菌对氨苄西林和萘啶酸耐药率高达100%,对环丙沙星、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、大观霉素、氟苯尼考、庆大霉素耐药率分别为39.29%、35.71%、35.71%、35.71%、22.62%、14.29%。38 株沙门氏菌对3 种及以上抗生素耐药,属于多重耐药菌株。38 株多重耐药菌株中,有20 株携带Ⅰ类整合子。30 株对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药的菌株中,均能检测到sul1或sul2或sul3基因,与表型耐药100%符合,其检出率分别为40%、100%、63.3%。结论：肉鸡屠宰场中沙门氏菌耐药现象已不容乐观,沙门氏菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的携带之间关系密切,且Ⅰ类整合子在磺胺类耐药菌株的产生中起到重要作用。     

顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究

目的: 探讨ERCC1、Bcl-2表达与顺铂作用的关系,进而推测ERCC1、Bcl-2在顺铂耐药中的作用。方法: 选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP作为研究对象,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数;免疫细胞化学方法、RT-PCR方法检测不同浓度、不同作用时间干预后细胞中ERCC1、Bcl-2的表达。结果: 10 μg/mL DDP作用 12 h,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1、Bcl-2 mRNA的表达逐渐增高,在 72 h 表达最强。浓度为 5 μg/mL 的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达水平上升,随着DDP浓度的增加,其表达水平逐渐上升,ERCC1民mRNA表达水平在 20 μg/mL 组达到高峰。与亲本细胞相比,A549/DDP中ERCC1、Bcl-2表达明显增高。结论: 随着顺铂作用时间的延长和浓度的增加,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1、Bcl-2 可能参与了顺铂继发耐药的形成。     

黑色素瘤BRAF抑制剂耐药机制的研究进展

黑色素瘤是一种源于黑色素细胞的恶性肿瘤,临床上约50%的黑色素瘤患者发生了BRAF突变。BRAF抑制剂能够作用于突变的BRAF位点,从而迅速对肿瘤细胞发挥增殖抑制和促进凋亡作用,但此后迅速发生的耐药事件严重制约了该类药物的连续使用,所以对于BRAF抑制剂耐药机制的探究非常重要。本文介绍了近年来有关黑色素瘤BRAF抑制剂耐药的相关研究进展,以期为后续的相关研究和临床应用提供一定的参考。     

肠道杆菌耐药基因的研究

目的检测肠道杆菌对抗菌药物的敏感性及其耐药基因。方法选取16株临床分离的肠道杆菌,用纸片扩散法检测其对14种抗菌药物的敏感性。PCR法检测TEM型β-内酰胺酶基因、DHA和ACT-1型AmpC酶基因、aac（6’）-Ib型氨基糖苷类修饰酶基因、qacE△I-sull耐消毒剂和磺胺基因。结果多重耐药菌对氨苄西林、哌拉西林、头孢噻吩全部耐药,其余药物显示不同程度的耐药。TEM型β-内酰胺酶基因检测均为阳性。对卡那霉素耐药的志贺菌和大肠埃希菌aac（6’）-Ib基因检测阳性,大肠埃希菌qacE△-sull基因检测均为阳性而志贺菌均为阴性。AmpC酶基因检测结果有2株菌ACT-1阳性而DHA全阴。结论多重耐药细菌存在多种耐药基因。     

小檗碱和绿原酸对质粒介导的耐药基因接合转移的影响

目的 研究小檗碱和绿原酸对质粒介导的耐药基因接合转移的影响及其可能的机制。方法 采用微量稀释法测定小檗碱和绿原酸对供试菌株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations,MICs),使用临床实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institution,CLSI)发布的微量肉汤稀释法测定抗生素的MICs,膜接合法测定耐药基因转移水平,S1核酸酶脉冲场凝胶电泳(S1 nuclease pulsed-field gel electrophoresis,S1-PFGE)确定质粒谱,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测接合转移相关基因的表达水平。结果 小檗碱对供试的6株多重耐药沙门氏菌和1株大肠杆菌的MICs均为1.25 mg/mL,绿原酸对其的MICs均为6.25 mg/mL,小檗碱的抑菌效果强于绿原酸。小檗碱和绿原酸分别连续诱导供试菌后,16种抗生素对原始株和诱导株的MICs变化程度不同,对庆大霉素...