调控肿瘤糖代谢重编程改善肿瘤耐药的小分子抑制剂研究进展

肿瘤耐药是目前临床药物治疗较为棘手的问题,机制众多,其中肿瘤细胞代谢重编程是重要的学说之一。肿瘤细胞通过代谢重编程以满足快速增殖的能量需求,而糖代谢方式和途径的改变对肿瘤细胞至关重要。本文就参与肿瘤耐药的糖代谢重编程相关酶及其小分子抑制剂进行综述。     

三叶青总黄酮逆转吉非替尼耐药肺腺癌细胞的耐药性

目的：探讨三叶青总黄酮（FTH）逆转吉非替尼（GEF）耐药肺腺癌细胞的耐药性及其初步机制。方法：采用MTT法,检测FTH对GEF耐药A549/GR细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测FTH对A549/GR细胞凋亡及周期的影响;建立A549/GR细胞荷瘤小鼠模型,观察两药联用后的体内抑瘤效果;采用Western blot法检测瘤组织PI3K/Akt信号通路关键蛋白（PTEN、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT）的表达情况。结果：与单用GEF相比,FTH联合GEF给药可显著抑制A549/GR细胞增殖（P<0.05）,诱导A549/GR细胞凋亡（P<0.05）,使细胞停滞在G0/G1期。体内实验结果表明,两者联合可显著抑制裸鼠A549/GR移植瘤的生长（P<0.05）,并显著降低瘤组织p-PI3K和p-AKT表达（P<0.05）,升高PTEN蛋白表达（P<0.05）。 结论：FTH可逆转A549/GR细胞对GEF的耐药性,其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/AKT通路有关。     

产超广谱β-内酰胺酶霍乱弧菌耐药表型和基因型初步研究

目的S 对北京市朝阳区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)霍乱弧菌耐药表型和基因型进行初步的研究。方法S 复苏2012-2019年北京市朝阳区保存的37株霍乱弧菌,应用肉汤微量稀释法进行产ESBLs菌株的鉴定及21种药物敏感实验,应用荧光 PCR 检测菌株的10种耐药基因：SHV、TEM-1/TEM-2、TCX-M1、TCX-M2、TCX-M8、TCX-M9、TCX-M25、OXA1,OXA2和OXA10。结果 试验菌株中,产ESBLs菌株检出率8.11%(3/37),这3株菌10种耐药基因均为阴性;ESBLs耐药基因携带率为16.22%(6/37),这6株菌均为非产ESBLs霍乱弧菌,其中TEM1/ TEM2携带率为16.22%(6/37),OXA2携带率为16.81%(4/37)。37株霍乱弧菌对21种抗生素耐药率为2.70%~94.59%,对多西环素不耐药;多重耐药率为35.13%(13/37),最多耐11种药。结论 霍乱弧菌中产ESBLs菌株与ESBLs耐药基因菌株一致性差;北京地区霍乱弧菌耐药严重且多重耐药趋势明显;应加强霍乱弧菌耐药机制、耐药表型与基因型关系的研究。     

荧光PCR法检测原料乳中大肠埃希氏菌喹诺酮类的耐药基因

目的 建立喹诺酮类抗生素主要耐药基因的TaqMan荧光PCR检测方法,为原料乳中耐药大肠埃希氏菌的监测提供技术方案。方法 利用Chelex 100法快速获取细菌基因组DNA,通过对aac(6’)-Ib-cr和qepA基因的序列分析,利用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,建立单重和双重TaqMan荧光PCR方法。通过耐药基因阳性菌株和原料乳中分离大肠埃希氏菌菌株,对方法进行评估。结果 以Chelex 100法快速提取耐药基因阳性菌株细菌基因组DNA为模板,建立的aac(6’)-Ib-cr和qepA基因的单重和双重荧光PCR反应均有特异性曲线扩增,方法灵敏度为菌液浓度10_^-4 CFU/mL。北京地区52份原料乳中共分离出32株大肠埃希氏菌,利用建立的双重荧光PCR方法检测aac(6’)-Ib-cr和qepA基因结果为阴性,和环丙沙星肉汤稀释法药敏结果一致。结论 本方法的建立为原料乳中大肠埃希氏菌常见喹诺酮类耐药基因的快速检测提供了新的技术手段。     

β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测用质粒标准样品研制

目的：研制可作为β-内酰胺类抗生素耐药编码基因检测质控用标准样品。方法：通过检索National Center for Biotechnology Information（NCBI）基因库,获得β-内酰胺类抗生素耐药性编码基因blaTEM、blaPSE、blaCTX-M、blaCMY和blaOXA的DNA序列,构建耐药基因重组质粒和工程菌。将工程菌传代培养15代,同时使用PCR扩增和DNA测序测定确认目标基因的遗传稳定性。大量制备菌悬液,提取重组质粒,真空干燥得到质粒标准样品。使用PCR和RT-qPCR检测质粒标准样品的最低检出限。使用超微量分光光度计测定质粒标准样品的质量,RT-qPCR测定质粒作为模板扩增时的Ct值,以此评价标准样品的均匀性及贮藏稳定性。结果：5种重组质粒DNA可在工程菌中稳定遗传且无突变发生。成功制备5种质粒DNA标准样品,均匀性良好。各质粒DNA经梯度稀释后,PCR最低检出限在2.33×104-2.25×106 拷贝数/μL之间,RT-qPCR最低检出限在1.93-1850 拷贝数/μL之间。样品在37 ℃贮存14 d、4 ℃贮存3个月、-20 ℃贮存12个月稳定 性良好。结论：研究制备得到β-内酰胺类抗生素耐药机制编码基因blaTEM、blaPSE、blaCTX-M、blaCMY、blaOXA质粒DNA标准样品,目的基因遗传稳定性、标准样品的均匀性和贮存稳定性良好。     

2017—2019年绍兴市沙门菌病人分离株的耐药性与分子分型分析

目的 了解绍兴市2017—2019年沙门菌病人分离株的分子分型特征及耐药情况。方法 收集245株分离自绍兴市食源性腹泻病例中的沙门菌,进行血清学分型,采用微量肉汤稀释法进行药敏检测,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对分离株进行分子分型,利用BioNumerics V7.1软件进行聚类分析。结果 245株沙门菌可分为60种血清型,优势血清型为鼠伤寒沙门菌(32.24%)、肠炎沙门菌(10.20%)和伦敦沙门菌(6.94%)。225株分离株对25种抗生素存在不同程度的耐药,其中氨苄西林(77.14%)、四环素(73.88%)和链霉素(66.53%)的耐药率较高,且多重耐药率达76.33%。Xba Ⅰ酶切后的鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌和伦敦沙门菌分别含48种、11种和12种不同PFGE指纹图谱。结论 绍兴市沙门菌血清型种类繁多,PFGE指纹图谱呈多样性,抗生素耐药呈现较集中且主要为氨苄西林-四环素-链霉素(AMP-TET-STR)。     

2008—2018年四川省阿贡纳沙门菌分子分型及耐药分析

目的 了解2008—2018年四川省阿贡纳沙门菌(Salmonella agona)脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别分布和耐药状况,为阿贡纳沙门菌引起的暴发预警、溯源调查及临床治疗提供依据。方法 对经过生化和血清学鉴定的61株阿贡纳沙门菌进行PFGE分子分型分析,采用微量肉汤稀释法测定14种抗生素对菌株的最小抑菌浓度。结果 61株阿贡纳沙门菌分离株共分为41个PFGE型,从不同年份、不同地区临床病例中分离到的部分菌株具有相同的PFGE型别,1株猪肉分离株与部分临床分离株具有相同的PFGE型别。28株阿贡纳沙门菌对14种抗生素均敏感,其余33株菌存在不同程度的耐药,其中四环素耐药率最高,为47.54%(29/61);多重耐药株共16株,占比为26.23%(16/61)。全部分离株均对亚胺培南敏感。结论 2008—2018年四川省阿贡纳沙门菌分离株PFGE型别呈多样性,在四川省为散发流行状态。耐药情况较严重,耐药性存在上升趋势。     

基于全基因组测序的阪崎克罗诺杆菌婴幼儿食品分离株分子特征研究

目的 研究婴幼儿食品中分离的阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)分子生物学特征。方法 对婴幼儿食品中C.sakazakii进行分离鉴定、药物敏感性试验和全基因组测序,利用BioNumerics软件对全基因组数据进行拼接组装,对组装基因组开展多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)、毒力基因和耐药基因分析,并与PubMLST数据库中ST型进行比较分析。结果 本研究中分离的9株C.sakazakii共分为5个ST型,ST1和ST64型为主要型别,同时也是PubMLST数据库中C.sakazakii的主要型别。3株C.sakazakii携带mcr-9耐药基因,但药敏结果显示所有菌株对包括多粘菌素B和多粘菌素E在内的12种抗生素均敏感。除携带共同毒力基因谱外,ST1、ST64和ST458型携带脂多糖基因gtrB。cgMLST聚类分析显示,9株C.sakazakii呈高度多样性。结论 与临床分离株相关的ST1和ST64型是本研究食品分离株中的主要型别,提示C.sakazakii具有潜在的致病性,有必要对婴幼儿食品中C.sakazakii开展连续监测,为预防控制由其引起的食源性疾病提供依据。     

适于制备参考菌株用沙门氏菌的鉴定和特性研究

目的:对分离自陕西、广东、福建、上海、北京、河南和四川等7省(市)的118株沙门氏菌进行染色镜检、生化和16S rDNA鉴定,β-内酰胺酶编码基因遗传稳定性和药敏性测定,为制备适于携带β-内酰胺酶类编码基因食源性致病菌检测用参考菌株奠定材料基础。方法:采用革兰氏染色、VITEK生化鉴定、MALDI-TOF-MS鉴定、16S rDNA基因扩增和序列测定分析鉴定菌株;采用临床和实验室标准协会推荐的琼脂稀释法测定沙门氏菌的药敏性;采用传代培养、PCR扩增、基因序列测定和基因库在线比对方法,确定沙门氏菌携带的与β-内酰胺类抗生素耐药相关编码基因的遗传稳定性。结果:118株沙门氏菌的生化特性、16S rDNA、MALDI-TOF-MS鉴定结果均符合沙门氏菌属的典型特征。菌株对氨苄西林、磺胺异噁唑和头孢噻呋(100.00%)耐药最为普遍,对四环素和萘啶酮酸等7种抗生素的耐药率菌均在50%以上。76株(64.41%)菌株携带bla_(TEM-1),其次分别为bla_(CTX-M-55)(60,50.85%)、bla_(OXA-1)(19,16.10%)、bla_(CTX-M-3)(18,15.25%)、bla_(CTX-M-15)(2,1.69%)、bla_(TEM-116)(2,1.69%)、bla_(CTX-M-123)(1,0.85%)和bla_(CTX-M-64)(1,0.85%)。筛选出的12株沙门氏菌,其携带的相关编码基因在传代过程均未丢失或发生突变。结论:4种方法对118株沙门氏菌的鉴定结果均与沙门氏菌属的特性吻合,12株代表性沙门氏菌携带的bla_(TEM-1)、bla_(CTX-M)和bla_(OXA-1)基因可在15代传代过程稳定遗传,具有制备β-内酰胺类抗生素耐药性编码基因检测用参考菌株的潜能。     

北京市顺义区市售生鲜整鸡中弓形杆菌流行状况及耐药特征分析

目的 了解顺义区市售生鲜整鸡中弓形杆菌的污染状况及耐药特征。方法 在顺义区农贸市场、超市随机采集零售生鲜整鸡样品60份,应用滤膜法对样品进行弓形杆菌的分离培养,采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及实时荧光定量PCR进行菌株鉴定,并将菌株的质谱图进行聚类分析。采用琼脂稀释法对弓形杆菌分离株进行11种抗生素的耐药性检测。结果 60份市售生鲜整鸡样品中弓形杆菌的检出率为26.67%（16/60）,且均为布氏弓形杆菌。6月、7月弓形杆菌的检出率明显高于5月。16株弓形杆菌分离株经MALDI-TOF MS聚类,以相对距离1 000为节点分为两个簇群,相对距离与菌株相似性呈负相关,聚类图对样品地域来源有一定的提示作用。弓形杆菌分离株对喹诺酮类抗生素耐药严重,对萘啶酸和环丙沙星的耐药率分别为81.25%和43.75%;对庆大霉素（12.50%）、红霉素（12.50%）、阿奇霉素（12.50%）、泰利霉素（12.50%）、链霉素（6.25%）耐药率相对较低。结论 顺义区零售生鲜整鸡中弓形杆菌的检出率较高,应警惕因未烧熟煮透和交叉污染导致食源性疾病的风险。