应用免疫印迹法分析丙型肝炎相关性抗体

应用两种免疫印迹法对二代ELISA测试的69份血清进行了追加试验。结果表明:8份ELISA阴性血清免疫印迹均阴性,61份ELISA阳性血清有1份免疫印迹阴性。ELISA假阳性率为1.67％。在60份免疫印迹阳性血清中,抗结构区(capsid),非结构区NS_3和NS_4抗体的阳性率分别为83％、93.3％和70％。其中丙型肝炎相关性抗体的分布,以抗capsid、NS_3、NS_4抗体都阳性为主(58.7％)。在输血后急性肝炎和肝细胞癌患者中。丙型肝炎相关性抗体的分布没有统计学上的差异。     

绿色木霉合成几丁质酶条件的研究

绿色木霉ＺＵ０１１在以０．５％几丁质为唯一碳源的培养基中几丁质酶活达到０．１２４ＩＵ／ｍＬ。几丁质酶合成的最佳碳源和诱导物为几丁质。在一定范围内啬２基中几丁质浓度,葡萄糖浓度,微量元素盐浓度和碳氮比都能提高几丁质酶活。胆汁酸和吐温８０作为表面活性剂能显著提高几丁质酶活。     

RT-PCR法检测庚型肝炎病毒C(GBV-C)RNA

应用RT－PCR法在非甲～非戊型肝炎患者血清及单采浆站供血员血浆中检测到GBV－CRNA，扩增产物经序列测定进一步确证，在30例非甲～非戊型肝炎患者中阳性率为6．6％；在600例单采浆供血者血浆中阳性率为0．33％。提示GBV－C可能不是非甲～非戊型肝炎的主要致病因子，可能存在GBV－C健康携带者。     

漆酶氧化还原介质系统的作用机理及其应用

对漆酶-氧化还原介质系统作用机理及其应用的研究进展进行了综述。漆酶的催化反应发生在铜离子形成的活性中心,当介质存在时通过介质中间体传导电子使得反应的速度加快,效率提高,氧化底物范围可进一步扩大。这种漆酶介质系统作为新型的生物制剂在纸浆漂白、纺织品生物整理、环保等方面具有重要的应用价值。     

酶/酸水解毛叶木姜子中键合态香味成分的比较

采用AmberliteXAD-2树脂吸附洗脱分离毛叶木姜子中的键合态香气物质前体,将分离得到的键合态香气物质前体在AR2000酶、果胶酶和酸3种条件下分别进行水解释放,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对水解后的键合态香气物质进行分离分析。结果表明:3种水解条件得到的键合态香气物质共有90种,主要为萜烯类和含氧萜类物质。其中,香叶醇在2种酶水解条件下均含量高,果胶酶水解条件下含量最高达21798.79μg/L;共34种香气物质具有明显香气特征,2种酶水解下最显著的香气特征为花香和甜香;酸水解条件下最显著的香气特征为花香。酶水解与酸水解条件下得到的键合态香气物质存在明显差异,果胶酶水解条件下所检出的香气物质种类多且含量较高。因此,果胶酶处理更有利于毛叶木姜子键合态香气成分的释放。     

链霉菌LD048硫化物氧化酶的催化机理及酶学特征

对硫化物氧化新菌株链霉菌LD048硫化物氧化酶的催化机理研究表明S2-在硫化物氧化酶的作用下首先被氧化为S2O2-3,然后生成SO2-3,最后产生末端产物SO2-4;O2对细胞生长是必须的,同时是反应过程中的电子受体.酶学特征研究说明酶的最适反应温度为大于35℃,在80℃维持4 h酶活仍能完全保留;酶的最适反应pH为8.0;金属Mn2+是酶活性的有效促进剂,在实验浓度范围内酶活提高达35.6%;酶促反应的最适底物浓度为6.0 mmol/L.     

幽门螺杆菌过氧化氢酶基因克隆及表达

目的 克隆幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)过氧化氢酶(katA)基因并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用PCR扩增幽门螺杆菌katA全长基因,将其克隆入pET-11c载体中,经测序证实后,在大肠杆菌中进行表达,产物用Western blot检测其抗原性并进行N末端氨基酸的测序。结果 幽门螺杆菌katA基因全长1 518bp,编码氨基酸505个。在BL21(DE3)中的表达量约占细菌总蛋白的24.9％,表达产物经SDS-PAGE显示其相对分子质量与软件预测结果 58 000相符,N末端5个氨基酸测序结果与Hp中天然的katA完全一致,经Western blot检测可被 Hp全菌抗血清识别。结论 katA能在大肠杆菌中进行高效表达,具有良好的免疫反应性,可望为研究 Hp的致病机理、实验诊断及亚单位疫苗等提供充足的katA原材料。     

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位

目的 建立一种有效的方法，从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位（rUreB）。方法重组大肠杆菌发酵后，表达的rUreB包涵体经洗涤、变性、复性，采用Q Sepharose Performance阴离子交换层析和Pheny1 Sepharose High Performance疏水层析分离纯化。使用 SDS－PAGE和HPLC检测纯度，选用 ELISA和 Western－bloning对纯化蛋白的生物学活性进行鉴定。结果 rUreB包涵体经洗涤和溶解后，rUreB的纯度＞70％。包涵体溶解液经阴离子交换层析和疏水层析后纯度超过95％。rUreB纯品具有良好的生物学活性。结论 建立了从包涵体中获得高纯度的rUreB的工艺，为进一步的研究打下了基础。     

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位特异性抗体检测方法的建立与评价

目的建立并评价幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)特异性抗体的检测方法。方法应用纯化的重组HpUreB作为包被抗原,建立检测HpUreB特异性抗体的ELISA间接法。以Hp抗体Western blot检测作为“金标准”,评价所建立方法的真实性和可靠性。结果检测血清特异性IgG的灵敏度为100·0%,特异度为97·7%,阳性预测值为97·2%,阴性预测值为100·0%,约登指数为0·977,符合率为98·7%,试验的一致率为98·5%;检测血清中总的特异性Ig灵敏度为97·1%,特异度为95·3%,阳性预测值为94·4%,阴性预测值为97·6%,约登指数为0·925,符合率为96·2%,试验的一致率为97·8%;检测唾液中特异性sIgA的灵敏度为96·2%,特异度为94·5%,阳性预测值为89·3%,阴性预测值为98·1%,约登指数为0·907,符合率为95·1%,试验的一致率为97·5%;检测粪便标本中的特异性sIgA的灵敏度为92·0%,特异度为90·2%,阳性预测值为85·2%,阴性预测值为94·9%,约登指数为0·822,符合率为90·9%,试验的一致率为98·6%,CV值均小于15%。结论该检测方法真实性、可靠性、重复性良好,能满足临床标本检测的要求。