T-DNA在丝状真菌中的插入突变及其应用前景

利用根癌农杆菌介导的转化系统已经在酵母菌和多个属种的丝状真菌成功建立起相应的T—DNA插入突变体系,使之有可能成为真菌生理学、生物化学以及发育生物学相关理论研究的潜在工具．综述了丝状真菌质粒DNA转化和T—DNA转化的差别、T—DNA插入突变的主要特点和优点、T—DNA转化丝状真菌的方法以及T—DNA已转化的丝状真菌种类,并对T—DNA插入突变在丝状真菌中的应用前景进行了分析．     

衣康酸生产菌的激光诱变育种及其产酸条件

本文利用纯铜蒸气激光对土曲霉ＡＴ１进行诱变育种。获得突变株ＡＴ８９－４的遗传性状稳定。在初始葡萄糖为１０ｇ／１００ｍｌ的摇瓶培养条件下，产衣康酸大于５ｇ／１００ｍｌ，糖转化率达６０％左右。     

CO_2激光辐照酿酒酵母菌的诱变作用

CO_2激光对甘蔗糖密工业性生产用酿酒酵母菌（SaccharomycescerevisiaeAS2．1189）进行辐照处理,经酵母菌糖密酒精发酵试验,对产乙醇含量进行了气相色谱分析,发现CO2激光对酿酒酵母菌具有明显的生物刺激效应,并初步筛选到乙醇含量有较大变化的辐照变异菌株;通过对这些辐照变异菌珠的乙醇脱氢酶同工酶的比较分析,证实了CO2激光对酿酒酵母菌的诱变作用。     

激光诱变滇"三角大香糯"的遗传效应研究

2 0 0 1年我们用He -Ne激光辐照加电场、磁场激发对滇“三角大香糯”进行了育种研究〔1〕,并得到了五株有较优变异的稻种 (第 1代M1 )。 2 0 0 2年我们种植了这五株稻种 ,并进行了各生育期的田间试验观测。分析了诱变滇三角香糯育出稻种的遗传性质     

Biomemory device composed of mutant azurin thin films modified by site-directed mutagenesis

A bioelectronic device composed of self-assembled mutant azurin thin films with memory function has been developed for molecular electronics. Azurin was recombined with a cysteine residue to enhance the stability of self-assembled protein on gold surface. The thin films of protein on gold substrate were investigated by surface plasmon resonance spectroscopy, scanning tunneling microscopy and Raman spectroscopy, respectively. The memory characteristics, including the “read”, “write” and “erase” functions of self-assembled azurin layer, were obtained with three distinct electrical states of azurin layers by cyclic voltammetry. These results show the proposed biomemory device as a step towards the protein based nanobiochip.     

CD59活性位点相关性基因突变的构建与表达

构建了野生型和突变型CD59重组质粒,建立了高效真核表达系统,探讨了W40位点的生物学活性。采用基因点突变技术使CD59W40基因位置缺失（突变1,M1）及C39W40K41→W39W40W41（突变2,M2）,重叠延伸PCR（overlap extension PCR）定点诱变扩增突变基因,重组入真核表达质粒pIRES,利用阳离子脂质体（Lipfectamine2000）将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO）进行表达。酶切鉴定及序列测定证实成功构建了pIRES-MICD59、pIRES—M2CD59和pIRES-WTCD59,突变基因约500bp。G418筛选出了CHO转染细胞的稳定细胞克隆,免疫荧光、ELISA检测筛选MICD59、M2CD59和WTCD59蛋白高表达株,连续传代30代有高表达;补体溶细胞反应显示与野生型CD59相比,突变型M1CD59失去对补体的抑制功能,而M2CD59抗补体活性略增高。证实CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭此位点可提高补体活性,有望用于肿瘤治疗。     

抗真菌蛋白Rs-AFP2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响

为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm.序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成.突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA).重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株.IPTG诱导后,二者均得到了表达.软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3%,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8%;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量.     

激光诱变遗传的共振激发及非线性作用机理分析

用量子力学及非线性科学理论，研究了激光与脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）分子相互作用的共振吸收效应及混沌性质，进而对激光的生物诱变效应予以解释。