乙型肝炎基因工程疫苗的反应及效果观察

应用重组痘苗病毒表达的乙肝基因疫苗接种了100名7～9岁儿童。采用0、1、2月免疫程序,3个不同剂量组(20,10及5μg)均产生较高的抗体阳转率:3个月时大于96％、9个月时均达100％,免后2年仍在85％以上。9月时抗体水平达高峰,其抗体GMT分别为540.4(20μg),556.8 (10μg)及392.3m(?)u/ml(5μg)。没有观察到严重的副反应。与酵母重组疫苗(Merck产品)和血源疫苗的免疫效果比较无明显区别。表明重组痘苗病毒表达的乙肝疫苗是安全、有效的。     

鼠疫组分疫苗F1抗原、rV抗原含量的检测及其质量控制

目的采用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫组分疫苗中F1和rV的抗原含量。方法利用F1、rV抗原单克隆抗体,对鼠疫组分疫苗原液进行抗原鉴别试验;分别应用F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法对疫苗原液进行抗原定量检测;验证A(l OH)3佐剂吸附抗原的完全性;将疫苗成品于4℃放置18个月,分别于1和18个月时取样,用建立的双抗体夹心ELISA法检测F1和rV抗原含量,分析抗原的稳定性;对3批鼠疫菌rV抗原原液3步纯化工艺进行验证。结果鼠疫组分疫苗原液中的F1和rV抗原具有良好的反应原性;用建立的双抗体夹心ELISA法检测4批F1和rV抗原原液中F1和rV抗原的含量与Lowry法检测结果的误差均在±20%以内;4批鼠疫组分疫苗离心后的上清液中均未检测到F1和rV抗原,表明A(lOH)3佐剂吸附抗原完全;4℃保存18个月,疫苗中的F1和rV抗原含量稳定;3批鼠疫菌rV抗原原液经阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析3步纯化,rV抗原在纯度增加的同时,抗原含量也增加。结论已建立的F1、rV抗原双抗体夹心ELISA法可用于鼠疫组分疫苗中F1和rV抗原的定量检测。     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定W135群和Y群脑膜炎球菌多糖中半乳糖和葡萄糖含量

目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法(High-performance anion-exchange chromatography with pulsedamperometric detection,HPAEC-PAD)测定W135群和Y群脑膜炎球菌荚膜多糖中半乳糖和葡萄糖的含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法多糖蛋白结合物原液的混合液经HCl水解处理后,进样CarboPac PA10柱,以氢氧化钠-醋酸钠梯度流洗,脉冲积分安培检测器检测。筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密性及准确性验证,并进行初步应用。结果确定的样品水解条件为以2 mol/L HCl于85℃处理1 h。载体蛋白破伤风类毒素对检测结果无干扰;重复性、日内精密性和不同操作者之间精密性试验结果的RSD均小于5%;准确性试验中葡萄糖和半乳糖的回收率在90%～110%之间。HPAEC-PAD法测定多糖蛋白结合物原液的多糖含量与传统间苯二酚比色法测定结果相当;成品疫苗中的W135群和Y群多糖含量测定结果符合《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》的规定(均≥4μg/剂)。结论 HPAEC-PAD法专属性、精密性和准确性良好,可用于A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗中W135群和Y群多糖含量的测定。     

新型脂质体吸附乙肝疫苗的稳定性及其抗病毒作用

目的 研究新型脂质体及其与乙肝疫苗结合物的稳定性以及结合物抗病毒作用。方法 通过外观观察、粒径检测及诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平考察稳定性;免疫HBV转基因小鼠,检测其血清中HBsAg和抗-HBs的滴度。结果 4℃存放1年,脂质体有少量沉淀产生,粒径变大;而脂质体与乙肝疫苗结合物全部沉淀,粒径变大,但均易摇匀,无结块;结合物4℃存放1年,诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平没有下降;HBV转基因小鼠于免疫后2、3、4个月,体内的HBsAg的A值较免疫前有显著下降。抗-HBs在初次免疫2个月后的阳转率为100％。结论 脂质体吸附乙肝疫苗稳定性好,且有一定的抗病毒作用。     

治疗性乙型肝炎病毒载体疫苗的构建

目的研制治疗慢性乙型肝炎的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)载体疫苗。方法将HBV的表面抗原基因克隆到MVA病毒的重组载体pSC11上,重组质粒与空MVA病毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。经过10轮筛选,挑选出阳性的重组MVA病毒。经PCR鉴定,感染不同细胞系,确定病毒表达量。结果获得目的重组MVA病毒,ELISA检测到表面抗原在不同细胞系中的表达。结论已成功地构建了表达HBV表面抗原的重组MVA病毒。     

产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性

目的观察产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)基因工程疫苗在SD大鼠中的免疫原性。方法将含ETEC抗原成分热不稳定肠毒素B亚单位(Heat-labile enterotoxin Bsubunit,LTB)的双歧杆菌疫苗给SD大鼠灌胃4次,同时设对照组,以PBS平行灌胃。采用ELISA法检测大鼠粪便上清液IgA及血清IgG抗体水平;免疫组化法检测大鼠空肠中sIgA抗体的表达;肠绊试验检测肠毒素的活性。结果免疫疫苗的SD大鼠粪便上清液中产生了IgA抗体,血清中产生了特异性的IgG抗体,肠道内产生了特异性分泌型sIgA抗体;免疫组化结果显示,随着免疫次数的增加,抗体分泌量明显增加;双歧杆菌疫苗免疫的大鼠能够抵抗LT抗原的侵袭,而对照组大鼠则出现明显的肠道积液现象。结论构建的双歧杆菌疫苗具有良好的免疫效果,可保护SD大鼠免受ETEC的感染。     

流感疫苗血凝素含量测定替代方法的建立及验证

目的建立测定流感疫苗血凝素(Haemagglutinin,HA)含量的替代方法 ,并进行验证,以解决大流行流感发生初期疫苗原液中HA定量的难题。方法优化糖苷酶处理条件,将流感疫苗原液经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE方法分离样品,以灰度扫描法确定HA蛋白百分比,结合样品总蛋白数值,计算样品中HA含量。以该方法和传统的单向免疫扩散(SRID)法分别测定7批流感疫苗原液中HA含量,并进行比较。结果优化的糖苷酶处理条件为:总蛋白400μg/ml,PNGaseF加入比例为1:50。样品经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE法可以清晰区分各蛋白条带,经测序后确定HA两个亚基,与预期相对分子质量一致。该方法测定7批流感疫苗原液中HA含量的结果与SRID法测定结果的符合率在87.90%~122.20%之间。结论初步建立了测定流感疫苗中HA含量的替代方法 ,在WHO参考品供应不到位时,可用于大流感发生时疫苗原液中HA之定量。     

轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体。RV疫苗的研制工作已取得了很大进展,但仍存在较大缺陷。目前投入使用的3种RV疫苗虽然能够对重症腹泻起到良好的保护作用,但却不能很好地预防RV感染,因此继续研制新的RV疫苗十分重要。本文对RV及RV疫苗的研究进展作一综述。     

我国钢丝绳的行业竞争结构及企业战略抉择

介绍行业竞争结构的概念,通过研究钢丝绳的企业数量和产量,指出我国钢丝绳的行业竞争结构属于分散竞争;对钢丝绳行业进行5因素竞争结构分析,结合5因素图提出改善钢丝绳行业竞争结构的措施建议;用波士顿矩阵的分析方法举例说明钢丝绳企业如何识别自己的企业地位和产品地位,从而对不同的产品或业务采用不同的投资对策。     

Protective Immunity against Listeria monocytogenes in Rats,Provided by HCl- and NaOH-Induced Listeria monocytogenes Bacterial Ghosts (LMGs) as Vaccine Candidates

Listeria monocytogenes (Lm) bacterial ghosts (LMGs) were produced by the minimum inhibitory concentration (MIC) of HCl, H₂SO₄, and NaOH. Acid and alkali effects on the LMGs were compared by in vitro and in vivo analyses. Scanning electron microscope showed that all chemicals form lysis pores on the Lm cell envelopes. Real-time qPCR revealed a complete absence of genomic DNA in HCl- and H₂SO₄-induced LMGs but not in NaOH-induced LMGs. HCl-, H₂SO₄- and NaOH-induced LMGs showed weaker or missing protein bands on SDS-PAGE gel when compared to wild-type Lm. Murine macrophages exposed to the HCl-induced LMGs showed higher cell viability than those exposed to NaOH-induced LMGs or wild-type Lm. The maximum level of cytokine expression (TNF-α, iNOS, IFN-γ, and IL-10 mRNA) was observed in the macrophages exposed to NaOH-induced LMGs, while that of IL-1β mRNA was observed in the macrophages exposed to HCl-induced LMGs. To investigate LMGs as a vaccine candidate, mice were divided into PBS buffer-injected, HCl- and NaOH-induced LMGs immunized groups. Mice vaccinated with HCl- and NOH-induced LMGs, respectively, significantly increased in specific IgG antibodies, bactericidal activities of serum, and CD4⁺ and CD8⁺ T-cell population. Antigenic Lm proteins reacted with antisera against HCl- and NOH-induced LMGs, respectively. Bacterial loads in HCl- and NaOH-induced LMGs immunized mice were significantly lower than PBS-injected mice after virulent Lm challenges. It suggested that vaccination with LMGs induces both humoral and cell-mediated immune responses and protects against virulent challenges.