国产碱性脂肪酶的测定方法及特性研究

对几种国产脂肪酶的酶学特性进行了研究,并以酸碱滴定法对碱性脂肪酶的测定方法进行了探讨。结果表明:底物的乳化均匀程度对酶活力的测定有一定的影响,在α为0.05、经T检验得到:乳化、非乳化条件下及乳化液和缓冲液分开吸取和混合液乳化后吸取存在显著差异。SZ酶、SZX酶、SH酶在相同底物浓度下的最佳作用pH分别为9.0、8.9、9.1;最佳作用温度为35℃、35℃和45℃;达到最高活性所用的反应时间分别为15、10和10min。     

柿单宁的体外降胆固醇作用

采用分光光度法和气相色谱法研究了柿单宁对胰脂酶活性和胆固醇酯酶活性的抑制作用,以及柿单宁与胆汁酸、胆固醇的结合能力。结果表明：柿单宁对胰脂酶具有显著的抑制效果,其半数抑制浓度（half inhibitoryconcentration,IC50）为（0.445±0.021） mg/mL;抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数Ki为0.406 mg/mL;柿单宁对胆固醇酯酶也具有显著的抑制作用,其半数抑制浓度IC50为（0.442±0.017）mg/mL,抑制类型为非竞争性抑制,抑制常数Ki为0.488 mg/mL。不同质量浓度的柿单宁对胆酸（cholic acid,CA）、脱氧胆酸（deoxycholic acid,DCA）都有一定的结合能力,10 mg/mL的单宁与CA、DCA的结合率分别为58%和94%;柿单宁对胆固醇胶束化溶液有较强的结合能力,0.20 mg/mL的单宁对其抑制率达到了67%。另外,在不同的pH值下,柿单宁对胆固醇都有一定的结合作用,其中pH 7.0时的结合能力明显强于pH 2.0时的结合能力。总之,柿单宁可抑制胰脂酶活性和胆固醇酯酶活性,并与胆固醇和胆汁酸结合,减少胃肠道对脂肪的吸收,这可能是柿单宁在体内发挥强降胆固醇作用的原因之一。     

高效产脂肪酶菌株Burkholderia cepacia C1产酶条件优化

从油菜地土壤中分离到一株高效产脂肪酶菌株C1,经鉴定为Burkholderia cepacia。为了进一步提高C1 脂肪酶的产量,对其产酶的发酵条件进行优化。首先采用单因子试验筛选出最佳碳源为麸皮,最佳氮源为蛋白胨。通过Plackett-Burman 设计对发酵产酶的11 个相关因子进行试验,筛选出3 个主效因子,即蛋白胨质量浓度、橄榄油质量浓度及装液量。利用Box-Behnken 试验设计和响应曲面法分析确定主效因子的最优水平,得出产脂肪酶菌株C1 的最优产酶条件：1.50g/100mL 麸皮、1.05g/100mL 蛋白胨、1.63g/100mL 橄榄油、0.2g/100mL K2HPO4、0.05g/100mL MgSO4、初始pH 值为7.0、装液量为30mL。在优化条件下30℃,180r/min 培养72h,脂肪酶活力达到89.65U/mL,比未优化前的28.50U/mL 提高了2.15 倍。     

响应面法优化酶催化酯交换反应研究

为了利用植物油生产可再生的绿色能源——生物柴油,文章利用Novo435固定化脂肪酶,在无有机溶剂存在下催化菜籽油与甲醇酯交换合成生物柴油。利用响应面实验设计和分析方法对菜籽油的酯交换反应条件进行优化,得到了最佳工艺条件:醇油摩尔比1.5∶1,反应温度52℃,搅拌转速200 r/min,脂肪酶与油脂的质量比为10%,反应时间10 h,在此工艺条件下油脂的酯交换率达到48%(理论为50%)。理论甲醇量分3批加入,反应36 h后菜籽油的总酯交换率达到95%(理论酯交换率为100%)。每批试验后利用有机溶剂对脂肪酶进行清洗,然后继续反应,连续使用10个批次,油脂的酯交换率基本未变。     

脂肪酶改良猪油制备功能性脂的研究

我国有丰富廉价的动植物油资源，但这一资源并末得到有效的利用，为了充分利用这些资源，开展了脂肪酶催化猪油与辛酸酸解制备功能性脂的研究工作。脂肪酶筛选实验表明，在所选用的五种脂肪酶中，来自T.languginosa的同定化脂肪酶Liopzyme TL IM的催化效果最好。以Lipozyme TL IM为催化剂，进一步研究了酶量、有机溶剂、底物比率、反心时间和反应温度对猪油中辛酸插入率的影响。反应产物通过高效液相色谱法（HPLC）进行分析。研究结果表明，在正己烷介质中，脂肪酶量为15％（底物重量厅分比），底物比率为1：2（猪油：辛酸）反应时间24h，反应温度为55～60℃时，辛酸插入率最高。     

重组脂肪酶X12-5的大规模发酵及其酶学性质研究

实验室保藏的一株产脂肪酶基因工程菌X12-5,经过摇瓶发酵,测得酶活力为65U/mL。为进一步提高酶活力,应用于工业生产,将其进行上罐(180L)发酵。大规模发酵后,酶活高达220000U/g,实现了脂肪酶的高效表达。对其酶学性质研究表明,最适温度和pH分别为45℃和7.0;pH在4.0～7.0,温度在50℃以下酶活相对稳定;Mg2+、Mn2+、Ca2+对酶活有明显促进作用。由该脂肪酶的酶学性质初步判断其在制革工业上具有潜在的应用价值。     

不同底物的红茶菌发酵液对消化酶活性的影响

对从红茶菌中分离出的菌株(Gluconacetobacter sp.A4)进行研究,分别以红茶、荷叶、荷叶与山楂、荷叶与决明子为底物进行发酵,以传统红茶菌混合发酵为对照,通过对其产物D-葡萄糖二酸-1,4-内酯含量等指标的测定来评价发酵效果,同时研究了不同底物红茶菌发酵液对消化酶活性的影响。结果表明:在30℃、发酵8 d的情况下,以荷叶山楂A4发酵液发酵最为充分,其次为红茶A4发酵液。红茶A4发酵液的D-葡萄糖二酸-1,4-内酯(DSL)生成量最高。各发酵液对脂肪酶的抑制作用以红茶A4发酵液抑制作用最强,荷叶A4发酵液次之;对α-淀粉酶的抑制作用,以荷叶决明子A4发酵液的抑制率最高,红茶A4发酵液次之。不同红茶菌发酵液对消化酶的活性具有抑制作用,为其减肥机理的研究以及功能饮料的开发奠定基础。     

微波辐照稳定化处理小麦籽粒及其品质变化的研究

以河北优质白麦为原料,研究了微波辐照功率、辐照时间、润麦水分、润麦时间等参数对全麦粉脂肪酶活动度、湿面筋含量的影响,考察了适度微波辐照对面粉粉质特性和糊化特性的影响。结果表明微波辐照能够显著降低(p<0.05)全麦粉的脂肪酶活动度和湿面筋含量。适度的微波辐照(微波功率420 W,辐照时间90 s,润麦水分14%,润麦时间25 min)能够大幅降低全麦粉脂肪酶活动度,同时对其湿面筋含量损伤较小,并提高面粉粉质稳定时间,降低弱化度,增加了面糊峰值粘度和回生值,改善了面筋强度和面糊稳定性,延缓了全麦粉脂肪酸值的升高。     

壳聚糖涂层法固定化脂肪酶的研究

研究了壳聚糖涂层在纤维素滤纸上成膜后再固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当戊二醛浓度为５％,活化１２ｈ,与ｐＨ７．６的酶的磷酸盐缓冲溶液于室温（１５℃）交联１２ｈ,获得的固定化酶活最高,为０．２６Ｕ／ｃｍ２。固定化酶最适温度４０℃,比游离酶提高了５℃;最适ｐＨ８．５,与游离酶相比,向碱性偏移了０．５个ｐＨ     

超声酶促合成维生素A棕榈酸酯

研究了超声辐照下,在有机溶剂中以固定化脂肪酶Novozym435催化合成维生素A棕榈酸酯。考察了影响合成维生素A棕榈酸酯反应的诸因素(溶剂、底物摩尔比、底物浓度、反应时间、酶量和超声功率),并优化了反应条件:在10mL的正己烷溶剂中,0.164g维生素A醋酸酯和0.32g棕榈酸,在酶与维生素A醋酸酯的质量比为1∶4的固定化脂肪酶Novozym435催化下,超声功率为90W,反应6h,酯化率可达82%。