辅助能量物质柠檬酸促进ε-聚赖氨酸的合成

为提高ε-聚赖氨酸(ε-PL)合成能力,考察了柠檬酸对Streptomyces sp.M-Z18菌体生长和ε-PL合成的影响。研究发现,柠檬酸作为辅助能量物质,对ε-PL发酵过程影响显著。通过对柠檬酸添加时间、添加量和pH值的优化,确定了最佳柠檬酸添加方式,结合补料-分批发酵工艺,显著提高了ε-PL的产量。实验结果表明,在5L发酵罐中,维持pH为3.8,初始柠檬酸添加量为20 g/L时,分批发酵ε-PL的产量达到9.50 g/L,产率达到4.40 g/(L.d),较未添加柠檬酸发酵分别提高了46.4%和48.1%。采用添加柠檬酸的补料-分批发酵工艺,发酵168 h后ε-PL的产量达到22.89 g/L,是分批发酵的2.41倍。     

50L自控式发酵罐中ε-聚赖氨酸发酵条件的优化

在50L自控式发酵罐上进行了ε-聚赖氨酸(ε-PL)发酵条件的优化研究,主要考察了分批发酵和补料分批发酵过程中pH、搅拌转速对ε-PL发酵和菌体生长的影响。结果表明,当控制pH在5.0以上时有利于菌体的生长,但ε-PL基本不合成,甚至出现降解现象;当维持pH在4.0左右时,能促进ε-PL的合成。搅拌转速为300 r/min时,有利于溶氧和传质,400r/min时,由于剪切力过大,导致菌丝断裂,ε-PL产量下降。通过控制发酵中后期pH4.0和搅拌转速300r/min的pH反馈控制自动流加补料培养,可获得最大的ε-PL产量7.36g/L,产率0.072g/g,产量较优化前提高近10倍,产率提高2倍。     

微生物转谷氨酰胺酶生产菌的“神舟四号”飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(I)

结合“神舟四号”无人飞船的试验条件和具体搭载要求 ,对转谷氨酰胺酶生产菌株Streptomycessp .WZFF .L -M 1(酶活 1.74U/mL)的孢子和菌丝体以 1 甲基 3硝基 1 亚硝基胍 (NTG)分别进行多种地面模拟比较性的诱变育种试验 ,发现诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力相关 ,经初筛和复筛的菌种驯化选育 ,获得具优异性能的突变菌株 ,酶活得到了明显提高     

色褐链霉菌磷脂酶D基因pld的克隆与表达

利用表达载体pET-22b( ),实现了色褐链霉菌磷脂酶D基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,将纯化后的重组磷脂酶D作用于底物卵磷脂和丝氨酸定向合成磷脂酰丝氨酸,并用HPLC法检测酶活力.结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达.转酯反应6 h后卵磷脂的转化率达到31%,重组磷脂酶D活力达到39 U·(mg蛋白)-1.     

去甲基金霉素发酵培养基优化研究

为提高金霉素链霉菌生产去甲基金霉素的效价，通过正交试验研究了发酵培养基中的碳源、氮源、无机离子的影响，求得较优的培养基为淀粉６％、蛋白胨１％、黄豆饼粉５％、玉米粉２％、酵母粉０．４％、ＮＨ４Ｃｌ０．１６％、ＣａＣＯ３１％、豆油１％、α－淀粉酶０．０３％，其效价达到３４９３，比原培养基提高３９％。     

蓝莓溃疡病生防链霉菌CX3的抑菌效果及其鉴定

[目的]为了明确从吉林省长白山保护区池西保护站马鞍山云杉人工林林下土壤分离,所获得1株拮抗菌株(编号记为CX3)的生防效果及分类地位。[方法]分别采用平板对峙法和杯碟法测定该菌株活菌及其发酵液的抑菌活性和抑菌谱;并通过形态学、生理生化特征、16S rRNA序列分析等方法研究了其分类地位。[结果]该菌株对13种供试植物病原菌均有抑制作用,抑菌谱广,其中对蓝莓溃疡病菌有极强的抑制作用,抑菌带达25.91 mm,发酵液的抑菌圈直径达31.73 mm;根据其菌株形态、生理生化特性、16S rRNA序列比对,最终鉴定菌株为链霉菌属Streptomyces sp.。[结论]该菌株对蓝莓溃疡病菌有显著的抑制效果,应用开发前景良好,此次是国内首次报道该菌株杀真菌活性。     

亚油酸对Lipstatin发酵生产的影响研究

亚油酸作为一种前体物质,对Lipstatin的生物合成有重要的影响。通过研究发酵培养基中亚油酸浓度对毒三素链霉菌发酵的影响,表明合适的亚油酸浓度能显著促进Lipstatin的生物合成。在此基础上,进一步研究了不同补料时间和补料速率对毒三素链霉菌发酵生产Lipstatin的影响,最终确定了最佳的补料时间和补料速率。在亚油酸浓度为20g·L^-1的发酵培养基中,接种后发酵36h时开始补料、补料速率为0．35g·L^-1·h^-1时,Lipstatin的发酵效价最高,为6．8g·L^-1。     

一株链霉菌的杀虫活性及分类鉴定初步研究

菌株Streptomyces SN336是以小菜蛾为筛选靶标,从辽宁省沈阳采集的土壤样品中分离得到的具有杀虫活性的菌株。采用叶片夹毒法和玻片浸渍法分别检测其对小菜蛾和二斑叶螨的杀虫活性,48h后校正死亡率分别为72.7%和59%。根据其形态学特征、生理生化特性初步鉴定认为,该菌株属于链霉菌属的金色链霉菌类群,值得深入研究。     

金色链霉菌连续培养特性及其动力学研究

研究了以碳源为限制性底物时金色链霉菌连续培养特性和动力学。实验结果表明,Streptomycesaureofaciens的比生长速率与限制性底物浓度的关系符合Monod方程,并得到动力学参数max=0.0649h-1和Ks=8.47gL-1。菌体和产物金霉素chlortetracycline的得率系数分别为1.866gg-1和2.580gg-1,维持系数为0.0051g(gh)-1。菌体和产物的最大产率为0.859g(Lh)-1和0.0299g(Lh)-1。菌体和产物对氧的得率系数分别为60.81gmol-1和64.33gmol-1,对氧的维持系数为0.3390mmol(gh)-1。磷氧比P/O等于2.77。呼吸商RQ与m呈线性正比关系,随着m的减小,碳源代谢流从酵解途径逐渐向戊糖途径增强。代谢流的这种迁移有利于产物金霉素chlortetracycline的合成。     

藤黄灰链霉菌099生产麦拓莱霉素与脂肪酸酯的关系

为确定藤黄灰链霉菌099经聚酮途径合成麦拓莱霉素与初级代谢产物脂肪酸酯间的关系,利用柱层析,对发酵液中的脂肪酸酯加以分离纯化,用核磁共振谱、电喷雾电离质谱鉴定其结构,构建该菌株合理的代谢关系,并通过添加脂肪酸的发酵实验加以验证. 结果表明该菌株中不仅存在聚酮合成途径,而且存在脂肪酸酯代谢途径.