脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金检测试纸的研制及应用

采用合成脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Dexynivalenol,DON)人工抗原,制备抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体(mAb),并以此为基础建立胶体金免疫层析检测试纸,于胶体金读数仪配合使用,用于进行玉米和小麦样品中DON的快速定量检测。通过检测玉米和小麦样品,脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金试纸方法检测限为87μg/kg,定量限为290μg/kg,线性范围400~5 000μg/kg,相关系数r=0.998。以国家标准(GB/T23503—2009)免疫亲和柱-高效液相色谱法检测样品的结果为认定值,胶体金检测法的准确度在80.7%~143.6%,变异系数范围4.7%~16.4%。采用配对t-检验分析,胶体金检测法与国标液相方法无显著性差异。     

苯甲酸人工抗原的合成与免疫效价的测定

通过苯甲酸的衍生物邻苯二甲酸酐(PA)的氨解法将苯甲酸(BA)偶联到载体蛋白上合成苯甲酸的人工抗原:免疫原苯甲酸-鸡卵清蛋白(BA-OVA)和包被原苯甲酸-牛血清白蛋白(BA-BSA).通过紫外光谱扫描、红外光谱扫描及SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法检测鉴定人工抗原,并用免疫原(BA-OVA)免疫BALB/c小鼠,检测抗体的生成.结果表明,苯甲酸人工抗原的合成成功.根据邻苯二甲酸酐、人工抗原和载体蛋白的紫外吸收值,计算出免疫原中苯甲酸(BA)与载体鸡卵清蛋白(OVA)的偶联比约为174:1.免疫小鼠血清中的抗体通过ELISA法检测为阳性(血清效价达到了1:3.2×10<'5>),表明合成的抗原已诱导出针对苯甲酸的特异性抗体生成,为进一步的苯甲酸单克隆抗体制各和免疫检测提供可靠的免疫原.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原和多克隆抗体的制备

对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的两种半抗原合成方法进行对比研究,合成半抗原,并采用活化酯法将半抗原与牛血清白蛋白偶联制备得到免疫原,通过特定程序免疫日本大耳白兔获得了多克隆抗体.抗血清效价为1∶32 000,proteinA-sepharose 4B 亲和层析纯化的DON抗体与DON、3-AC-DON(3-乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、15-AC-DON(15-乙酰氧基脱氧雪腐镰刀菌烯醇)、T-2毒素、OTA(赭曲霉A)、ZEN (玉米赤霉烯酮)的交叉反应率分别为:100%、500%、2.50%、0.10%、0.01%、0.01%,表明了所制备DON抗体的高特异性.     

番茄红素纳米分散体抗小鼠肝移植瘤的作用

为了研究番茄红素纳米分散体对肿瘤生长的影响及其机制,采用乳化-蒸发工艺(超声乳化)制备了番茄红素纳米分散体并用小鼠移植型肝癌模型研究了番茄红素纳米分散体的体内抗肿瘤作用和对机体抗氧化、抗增殖能力的影响。采用乳化-蒸发工艺(超声乳化)可获得纳米级别的番茄红素分散体系;番茄红素纳米分散体以1.95mg/kg,3.9mg/kg剂量给移植型肝癌H22小鼠用药10d后,移植瘤生长抑制率分别为32.37%,54.34%;同时可提高小鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量;可提高小鼠肝组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低过氧化氢(H2O2)、MDA含量;下调增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。研究表明,番茄红素纳米分散体在体内能明显抑制移植瘤的生长,其机制可能与提高机体的抗氧化活性、抑制肿瘤细胞增殖有关。     

土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立

为制备土霉素(Oxytetracycline,OTC)完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清(pAb)并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法。结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC_(50))为32.92ng/mL,检测限(LOD)为1.3ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70%～87.45%,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27%,4.10%,与其他竞争物交叉反应率0.4%。该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法。     

黄曲霉毒素G1人工抗原的合成

以间氯过氧苯甲酸(m-chloroperbenzoie acid,MCPBA)为氧化剂,使黄曲霉毒素G1(Aflatoxin G1,AFG1)转化为其8,9.环氧化物,与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)在两相反应体系中实现偶联,得到复合物AFG1-BSA.复合物紫外扫描结果显示其扫描图谱与BSA和黄曲霉毒素G1的图谱有明显差异,同时复合物与BSA荧光强度的差异,这表明BSA与黄曲霉毒素G1偶联.AFG1-BSA中AFGl与BSA的摩尔比为4.29:1.以合成人工抗原免疫小鼠,制备了特异性的鼠抗AFG1多克隆抗血清.用间接ELISA法测得抗体血清的最高效价可达1:16000,并测定了抗体的敏感度以及特异性.     

酪蛋白糖巨肽通过树突细胞发挥免疫调节作用的初步研究

研究用酪蛋白糖巨肽(CGMP)刺激体外培养的小鼠骨髓源树突细胞,观察CGMP对树突细胞成熟的影响,初步探讨CGMP作为功能性食品对免疫的调节作用。实验选用6～8周雄性C57BL/6小鼠,分离培养小鼠骨髓细胞,用重组小鼠白细胞介素-4 (rmIL-4)、重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导其分化,在培养的第6天,分别加入RPMI1640完全培养基作为空白对照, 脂多糖(LPS)为阳性对照和0.1、1、10μg/mL的CGMP 3个实验剂量。培养至第8天收集细胞,进行三色荧光标记,用流式细胞仪检测细胞表面标志：CD11c、CD80、CD86、MHC-Ⅱ。另一方面将第8天的树突状细胞(DCs)和T淋巴细胞共孵育进行混合淋巴细胞反应,96h后用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)检测T淋巴细胞的增殖。结果表明：3个剂量的CGMP均具有刺激DCs成熟的作用,其中CGMP为1μg/mL时,DCs的各种成熟标志均达到最高水平,其中,CGMP对MHC-Ⅱ的刺激作用最为强烈,而MHC-Ⅱ在DCs对外源抗原的提呈中发挥重要作用;混合淋巴细胞反应结果显示各个不同浓度CGMP作用的DCs均具有不同程度的刺激T淋巴细胞增殖的能力,并且DCs:T为1:10时T淋巴细胞的增殖作用最明显。     

碱性蛋白酶水解对豆粕中大豆抗原蛋白的影响

大豆是八大食物过敏源之一,其中主要蛋白成分7S和11S球蛋白也是致敏性较强的抗原蛋白。本试验研究了豆粕在Alcalase酶水解过程中7S和11S两种大豆抗原蛋白的变化。结果表明,酶解10 min时7S伴球蛋白的α’、α和β亚基、酶解60 min时11S球蛋白的酸性亚基等主要抗原蛋白成分即被完全水解,同时新产生了23 ku和大量14 ku以下组分;酶解豆粕中95.1%的蛋白可溶于水,其中68.1%蛋白质可溶于三氯乙酸。     

链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定

通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。     

膜抗原荧光抗体法与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒血清抗体的比较

目的比较膜免疫荧光抗体法(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)与ELISA法检测水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)血清抗体的效果。方法以FAMA法为"金标准",同时用德国Serion定量ELISA试剂盒检测184份血清样本(水痘疫苗免前92份、免后92份)的VZV Ig G抗体滴度,并对两种方法的测定结果进行比较。结果 FAMA法检测的阳性率为64.7%,抗体几何平均滴度(GMT)为1∶6.34,ELISA法检测的阳性率为47.8%,平均抗体活性值为492.33 m IU/ml。ELISA法的特异性为100%,阳性符合率(灵敏度)为69.7%,阳性符合率随着抗体滴度的增加而升高(z=-6.03,P0.001)。Fisher精确概率法分析结果显示,抗体滴度1∶8、1∶16和1∶32组与≥1∶64组阳性符合率差异均有统计学意义(P0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P0.05)。ELISA抗体活性值与抗体滴度呈明显正相关,相关系数R2=0.656,P0.001;Kappa值为0.707,两种方法具有较高的吻合度。结论德国Serion定量ELISA试剂盒在检测低抗体滴度VZV抗体时易出现假阴性,在检测高滴度VZV抗体时,两种方法敏感性相当;ELISA试剂盒检测的滴度临界值为1∶8~1∶32。该试剂盒可用于疫苗免疫效果评价和人群VZV抗体水平监测。