海洋壳聚糖酶高产菌株的筛选和鉴定

从采自连云港连岛海域的海泥中通过透明圈平板筛选法（以胶体壳聚糖为唯一碳源）筛出28株壳聚糖酶产生菌,经过复筛,选取了其中产酶能力最高的菌株为目的菌株,其酶活力达到3.89U/mL。经过形态观察、生理生化和16S rDNA鉴定,将该菌初步鉴定为交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）。     

应用固定化里氏木霉在螺旋纤维床生物反应器中连续降解壳聚糖的研究

Continuous hydrolysis of chitosan was performed in a convoluted fibrous bed bioreactor (CFBB) with immobilized T. reesei. At dilution rate of 0.4d^-1 and substrate concentration of 2% (mass vs. volume), the average degree of polymerization of hydrolysate can be kept at 1.25-1.35, which can be easily regulated by changing dilution rate or inlet chitosan concentration.     

细菌BK2产壳聚糖酶的发酵条件及壳寡糖的制备

优化了菌株BK2发酵产壳聚糖酶的条件：葡萄糖20g／L，壳聚糖0．3g／L，硝酸铵15g／L．接种量1，5％（10^7 cell／mL），发酵起始pH6．0．发酵温度30℃．培养时间48h．BK2发酵液中的壳聚糖酶活力可达到1．29U／mL．用酶液降解壳聚糖，分离提取粗产品，采用薄板层析法进行组分分析．分析结果表明．壳聚糖已被降解成含有不同分子质量的壳寡糖混合物，     

Optimization of chitosanase production from Bacillus sp. RKY3 using statistical experimental designs

BACKGROUND: The culture medium and fermentation conditions for the production of constitutive chitosanase from a newly isolated Bacillus sp. RKY3 were optimized statistically. RESULTS: The variables significantly influencing both chitosanase production and cell growth were screened through the Plackett–Burman design, by which maltose, beef extract, MgSO₄, and incubation time were identified as the most significant variables. The optimum values of the selected variables and their mutual interactions were determined through the steepest ascent method and Box–Behnken experimental design. The results demonstrated that 62.30 U mL^?1 chitosanase activity was predicted with optimum conditions of maltose (30.18 g L^?1), beef extract (15.25 g L^?1), MgSO₄ (0.26 g L^?1), and incubation time (50.02 h). The predicted response was verified by the validation experiments, and the optimum conditions resulted in a maximum chitosanase activity of 63.53 ± 1.22 U mL^?1. CONCLUSION: The optimization of fermentation variables resulted in an approximately 11.3‐fold increase in chitosanase activity compared with that observed under unoptimized conditions (from 5.63 U mL^?1 to 63.53 U mL^?1). Copyright © 2009 Society of Chemical Industry     

一株产壳聚糖酶芽孢杆菌的分离及鉴定

采用透明圈法,从黄河三角洲地区的腐败落叶分离出9株产壳聚糖酶的菌株。再经菌株分离纯化、液体发酵复筛及酶活研究,确定其中1株为壳聚糖酶高产菌株,命名为XHT-0903。通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定,确定XHT-0903为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。其液体发酵酶活力达20 U/mL,具有较好的开发及应用价值。     

复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化

以具有产壳聚糖酶能力的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）G10为出发菌,利用紫外和微波对菌株G10进行复合诱变,选育壳聚糖酶高产菌株,并采用正交试验设计对突变株产酶条件进行优化。结果选育出一株产酶活相对较高的突变株W1-32,优化后的产酶条件为果糖1.3%,胶体壳聚糖0.5%,酵母粉2.0%,MgSO4·7H2O 0.3%,初始pH 7.2,温度28 ℃,转速200 r/min。在此优化条件下,菌株W1-32产壳聚糖酶活为11.82 U/mL,是出发菌株G10的6.9倍。该研究为菌种的选育和进一步研究应用提供理论依据。     

新食品原料壳寡糖的酶法生产研究

目的针对高分子原料壳聚糖在食品工业应用中的两大难题——清洁生产与安全食用,研究了内切壳聚糖酶EC.3.2.1.132在新食品原料壳寡糖工业生产中的应用。方法通过广泛筛查,选育产酶活性高、性能稳定、具有单一内切模式的野生菌种。综合应用生物工程技术构建高效表达的基因重组工程菌,经优化发酵条件、建立简易纯化方法,获得了专一性内切壳聚糖酶。采用循环型清洁生产工艺用于新食品原料壳寡糖的工业化生产。结果从产酶量10 U/mL左右的野生型曲霉菌株Jxsd-01获得成熟基因,构建重组毕赤酵母工程菌表达体系,内切壳聚糖酶蛋白产量达到0.95 g/L。采用循环型清洁生产工艺酶法生产的壳寡糖含量高达98%,聚合度n=2~10,原料转化率95%以上,生产过程中无废水、废渣产生。结论内切壳聚糖酶应用于食品工业,实现新食品原料壳寡糖的工业化酶法生产,达到清洁、安全、高效的效果,具有应用推广的价值。     

Bacillus sp.LS 壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以 Bacillus sp IS 产生的壳聚糖酶粗酶液出发,经 (NH4)2SO4盐析、DEAE-Sephadex A25 阴离子交换、Sephadex G-100 凝胶过滤分离纯化后,SDS-PAGE 显示为一条带,测得其分子量为 30.9k u.同时对其酶学性质进行了初步研究,发现该酶在低于 40℃、pH6.0～7.5 范围内较稳定.最适反应温度和pH值分别为55℃和 5.0;Zn2 、Ag 、Ca2 、Co2 、Mn2 对该酶有明显的促进作用,而 Fe3 、Hg2 对该酶有强烈的抑制作用;该酶的米氏常数为2.50 mg/mL,最大反应速度为 4.19μmol/mL·min.     

通过酶促反应制备壳寡糖

用酶降解法对壳聚糖进行降解 ,研究了温度、pH值、金属离子等对酶促反应的影响 ,降解的最佳温度和pH值分别为 5 0℃和 5 0 ,Mg2 + 和Ca2 + 对酶降解具有一定的促进作用 ,而重金属离子Cu2 + ,Ni2 + 和Zn2 + 对酶降解有强烈的抑制作用。通过降解过程中壳聚糖溶液粘度的变化可以得出 ,该壳聚糖酶是以内切方式作用于壳聚糖。采用离子交换色谱柱对降解产物进行分离 ,得到了聚合度为 2～ 9的壳寡聚糖。该酶促反应符合米氏动力学方程 ,米氏常数Km 值为 2 60 1g/L ,Vmax 值为 3 5 79× 10 - 2 g/min·L。     

聚合度4～6壳寡糖的制备及其活性研究

制备高活性壳寡糖并对其生物活性进行研究。专一性壳聚糖酶酶解壳聚糖制备壳寡糖,采用乙酰丙酮法测定壳寡糖的数均分子量;不同剂量壳寡糖灌喂小鼠,探讨壳寡糖对小鼠免疫功能的影响以及对小鼠肝脏的保护作用。所得壳寡糖的数均分子量为1246.38,聚合度为4～6;该壳寡糖对小鼠免疫器官具有明显的保护和促进生长作用,显著提高了小鼠的抗疲劳能力以及抗菌活力,对小鼠肝脏具有显著的保护作用。专一性壳聚糖酶酶解所得聚合度4～6的壳寡糖具有较高的生物活性,壳寡糖在保健食品开发及医药等领域的应用前景广阔。