黑曲霉脂肪酶合成单月桂酸甘油酯

从黑曲霉中提出了一种具有很高催化活性和选择性的脂肪酶,为证明这种脂肪酶的高选择性,用此酶直接催化甘油和月桂酸反应合成单月桂酸甘油酯,并且优化了反应的工艺参数。实验表明,采用甘油月桂酸摩尔比为1∶1.5,脂肪酶与底物质量比为0.5%,水与底物质量比为3%的条件在50℃下反应12h,可使月桂酸转化率达到91.2%,单酯含量高达70%。     

乙醇溶液中Tweens对猪胰脂酶的修饰作用

采用Tween系列表面活性剂在乙醇-水溶液体系中对猪胰脂酶进行修饰,以它们催化酯交换的交换量为指标评价修饰的效果,并且对修饰酶与未修饰酶的热稳定性进行了研究。结果表明:40℃下30 min即可完成Tweens对猪胰脂酶的修饰,但不同Tween的最佳条件并不相同。Tween 20修饰脂肪酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶2(v/v),Tween 20用量为5%;Tween 40和Tween 65修饰猪胰脂酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶2(v/v),用量均为15%;Tween 60修饰猪胰脂酶的最佳条件为无水乙醇与水的比例为1∶2(v/v),用量为20%;Tween 80修饰脂肪酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶3(v/v),用量为5%;Tween 85修饰脂肪酶的最佳条件是无水乙醇与水的比例为1∶3(v/v),用量为15%。修饰后酶的热稳定性实验研究表明,在40～80℃间,修饰酶的催化反活性都高于未修饰酶。Tweens修饰猪胰脂酶能有效提高酶的活性及其热稳定性。     

重组华根霉脂肪酶协同转谷氨酰胺酶提高冷冻面团抗冻发酵特性的研究

采用差示扫描量热仪和F3流变发酵仪研究重组华根霉脂肪酶(RCL)和转谷氨酰胺酶(TG)共同作用对冷冻面团抗冻发酵特性的影响。将面团于-18℃冻藏0、7、21、35d,结果发现:随着冻藏时间的延长,甘油含量有所降低,可冻结水含量增加;引入RCL和TG到冷冻面团中可以显著增加面团中的甘油含量,显著降低面团中可冻结水的含量,减少冰晶体的形成,并且可以提高酵母的存活数。F3流变发酵仪测定面团的发酵流变学特性,结果表明:RCL和TG同时作用可以显著降低冻藏对面团发酵高度的削弱作用,改善酵母的发酵性能和增加面团的持气率。     

Isolation and identification of lipase producing thermophilic Geobacillus sp. SBS-4S: cloning and characterization of the lipase

A thermophilic microorganism, SBS-4S, was isolated from a hot spring located in Gilgit, Northern Areas of Pakistan. It was found to be an aerobic, gram-positive, rod-shaped, thermophilic bacterium that grew on various sugars, carboxylic acids and hydrocarbons at temperatures between 45°C and 75°C. Complete 16S rRNA gene sequence of the microorganism exhibited homology to various species of genus Geobacillus. A highest homology of 99.8% was found with Geobacillus kaustophilus. A partial (0.7 kbp) chaperonin gene sequence also showed a highest homology of 99.4% to that of G. kaustophilus whereas biochemical characteristics of the microorganism were similar to Geobacillus uzenensis. Based on biochemical characterization, 16S rRNA and chaperonin gene sequences, we identified SBS-4S as a strain of genus Geobacillus. Strain SBS-4S produced several extracellular enzymes including amylase, protease and lipase. The lipase encoding gene was cloned, expressed in Escherichia coli and the gene product was characterized. The recombinant lipase was optimally active at 60°C with stability at wide pH range (6-12). The enzyme activity was enhanced remarkably in the presence of Ca(+2). The K(m) and the V(max) for the hydrolysis of p-nitrophenyl acetate were 3.8mM and 2273 μmol min(-1)mg(-1), respectively. The ability of the recombinant enzyme to be stable at a wide pH range makes it a potential candidate for use in industry.     

产碱性脂肪酶热带假丝酵母LYSC-3的筛选、鉴定及发酵条件的优化

以橄榄油为唯一碳源,以溴钾酚紫为显色剂,采用琼脂平板法从富含油脂的土壤中筛选到一株产碱性脂肪酶野生型菌株LYSC-3。经形态学、生理生化和分子生物学的鉴定,确定菌株LYSC-3为热带假丝酵母(Candida tropicalis)。经发酵条件优化,菌株LYSC-3的最佳产碱性脂肪酶的发酵条件为:橄榄油10g·L-1、蛋白胨5g·L-1、蔗糖20g·L-1、(NH4)2SO40.5g·L-1、MgSO4·7H2O0.2g·L-1,K2HPO40.2g·L-1,pH8.0,35℃,150r·min-1摇床振荡培养3d,获得碱性脂肪酶最高酶活力达38.6U·mL-1。     

两种常见固定化脂肪酶的酶学性质和微观结构比较

分别对游离脂肪酶、大孔树脂吸附-交联固定化脂肪酶和海藻酸钠固定化脂肪酶的热稳定性、pH稳定性和操作稳定性等方面进行研究。结果显示,固定化脂肪酶在热稳定性、pH稳定性和重复利用次数上均有明显提高。对大孔树脂吸附-交联和海藻酸钠固定化微球进行了表观结构的考察。从SEM图片可以看出:海藻酸钠固定化微球表面和内部为均匀的蜂窝状多孔性结构,孔径较大,约0.1mm;而大孔树脂吸附-交联固定化微球内部具有规则蜂窝状通孔结构,孔径都在几微米以下。说明大孔树脂吸附-交联固定化脂肪酶效果比较理想。     

脂肪酶固定化研究及应用初探

以不同的廉价国产大孔树脂为载体,吸附法固定化脂肪酶。重点考察了以大孔树脂b为载体时,酶液浓度、吸附温度和时间、缓冲液pH及离子强度对脂肪酶固定化效果的影响。结果表明,以pH8.5,0.1mol/L的磷酸盐缓冲液为介质,在酶液浓度20mg/mL,固定化温度35℃的条件下,吸附4h,得固定化酶水解活力为137.39u/g,固定化酶的最适pH和温度都比游离酶高。该固定化脂肪酶催化合成结构脂质,连续使用4批催化活力没有任何改变,具有一定的开发潜力。     

Sn-2位富含棕榈酸甘油三酯的酶法制备研究

以棕榈硬脂为原料,以非专一性脂肪酶Novozym 435作催化剂,将棕榈酸作为酰基供体与棕榈硬脂进行酸解反应,制备Sn-2位富含棕榈酸的甘油三酯,为下一步制备母乳脂肪替代油脂提供原料。首先,通过单因素实验确定了各因素的范围,再应用Box-Behnken中心组合实验设计建立二次多项数学模型,进行响应面分析。结果表明,当棕榈酸与棕榈硬脂质量比1.09∶1,反应时间9.9h,反应温度54.7℃,加酶量21.9%时,反应所得甘油三酯中Sn-2位棕榈酸可达到60.59%,可满足下一步制备母乳脂肪替代油脂的要求。     

粗状假丝酵母(Candida valida T2)生产脂肪酶的发酵条件

对粗状假丝酵母产生脂肪酶的培养条件进行了研究。结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜培养基组成为:桐油15mL/L,黄豆粉30g/L,糊精10g/L,硝酸铵10g/L,MgSO4·7H2O1g/L,K2HPO42g/L,Tween800.5g/L;最佳培养为温度30℃、发酵液起始pH6,摇瓶发酵脂肪酶活力达到1467U/mL。     

响应面法优化以纯棉浴巾为载体的脂肪酶固定化工艺

本文系统研究了以纯棉浴巾为载体的脂肪酶固定化条件,通过单因素实验确定了吸附剂聚乙烯亚胺(PEI)浓度及其pH、交联剂戊二醛(GA)浓度及其pH、交联时间和交联温度的优化范围,进而以PEI浓度、GA浓度和交联时间作为优化因素,通过三因素三水平响应面设计,得到固定化酶制备优化条件为:PEI浓度3.37 mg/mL、GA浓度...