米曲霉不同培养方式的发酵探究

利用10L发酵罐在摇瓶实验基础上进行了米曲霉(Aspergillusoryzae)放大实验。根据不同菌体形态对代谢产物的影响,在米曲霉菌丝生长到絮状前,终止发酵。指数补料实验结果表明,分批发酵在第14小时菌体干质量达到最大值15.06g/L,比摇瓶发酵提高了33%;指数补料在第16小时菌体干质量达到20.43g/L,比分批发酵提高26%。     

米曲霉优良菌株的筛选及在制曲发酵西瓜黄豆酱中的应用

为获得蛋白酶、淀粉酶活性优良的米曲霉菌株,采用牛津杯双层平板法初筛、制曲分析酶活性复筛的方法,从制酱用成品曲中获得1?株淀粉酶活性优良菌株CS3.04和1?株蛋白酶活性优良菌株CS3.22,结合形态特征,ITS?rRNA序列分析鉴定为米曲霉。将2?株米曲霉分别进行单一菌种制曲及混合菌种制曲发酵西瓜黄豆酱,与商业米曲霉菌株制曲发酵进行对比,结果显示：不同制曲方式发酵西瓜黄豆酱的理化指标变化趋势保持一致,混合菌种制曲发酵样品的还原糖及氨态氮含量最高,分别为107.37、6.76?g/kg,比接种商业米曲霉菌株制曲发酵的样品分别提高了11.02%、5.56%;采用液液萃取-气相色谱-质谱联用技术定性及定量分析西瓜黄豆酱的挥发性风味物质,发现混合菌种制曲发酵具有产醛类、醇类、酮类及短链酯类物质的优势,而接种CS3.04单一菌种制曲发酵更有利于产酸类及酚类物质;混合菌种制曲发酵样品整体感官评分优于单一菌种制曲发酵,且在香气与滋味上占有优势。混合菌种制曲发酵工艺因CS3.04和CS3.22的酶系互补作用,有效地提升了西瓜黄豆酱的品质。     

米曲霉Y6产中性蛋白酶和内切葡聚糖酶的研究

以提高中性蛋白酶和内切葡聚糖酶酶活为目的,优化了米曲霉Y6的制曲工艺。在单因素的试验基础上,采用正交试验优化的米曲霉Y6中性蛋白酶的最佳制曲工艺参数为温度30℃,接种量1.0×107个孢子/g干基,培养时间42h,含水量80%,其酶活达到3637U/g;内切葡聚糖酶的最佳制曲工艺参数为温度为30℃,接种量0.25×107个孢子/g干基,培养时间48h,含水量100%,其酶活达到810U/g。     

从酱油生产用菌粉中选诱优良米曲霉菌种的研究

以酱油酿造用菌粉为出发菌S,经分离、纯化后再经紫外线诱变(30W、25cm、30min)及控温培养处理后,获得1株变异菌株,进行生产试验。结果表明,该变异菌株能在42℃环境中旺盛生长;酶活力可达7263.5U/g(干曲),较出发菌株S酶活力提高了108.3%;遗传稳定性较好;发酵的酱油经测定,其指标可达“GB18186-2000低盐固态发酵酱油”特级品,明显优于出发菌株酿造的酱油。     

酱油酿造米曲霉AS 3.951(沪酿3.042)种曲胞外蛋白谱鉴定与分析

分析米曲霉AS 3.951 (沪酿3.042)种曲培养过程中不同培养时间的胞外蛋白谱,确定培养时间为48h 时种曲达到蛋白鉴定要求;采用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)技术检测鉴定出SDS-PAGE胶图上11 个蛋白条带,通过比对数据库鉴定得到8 个蛋白,其中包括α - 淀粉酶、淀粉糖化酶B、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶等,与已在2009 年Biosci Biotechnol Biochem 期刊发表的《Analysis of extracellular proteins of Aspergillusoryzae grown on soy sauce koji》米曲霉AS 3.951 大曲的分泌蛋白谱共同提供了米曲霉沪酿AS 3.951 在酱油制曲过程中较完整的胞外分泌蛋白谱。     

机械搅拌生物反应器的CFD 模拟及其在发酵生产乳酸中的应用

用计算流体力学(CFD)方法中的Mixsim 模拟3L 机械搅拌生物反应器中不同搅拌转速对搅拌流场的影响,结果显示Mixsim 软件可以很好的模拟机械搅拌生物反应器工作过程中的流场变化。在高转速下,剪切速率较大,菌丝体98% 以上为菌丝体小球,直径在0.1～0.3mm,菌体生长速度慢,产乳酸质量浓度较低;低转速下产生的剪切速率较小,菌体大部分为菌丝形态,产乳酸质量浓度较高,但是大量菌丝不利于后期发酵的进行。在400r/min下米根霉发酵产乳酸质量浓度最高,为106.7g/L,菌体80% 以上为1.0～1.5mm 左右的菌丝球,通过CFD 模拟得到该条件下的剪切速率最大值为1.58m/s。     

两种生产用米曲霉的形状及蛋白酶性质研究

研究对比了两株米曲霉的形态特征以及成曲的蛋白酶酶学性质。结果显示,两株米曲霉的形态差异明显:米曲霉1号菌落较大、发芽和产孢子较快,种曲及成曲颜色偏黄,菌丝较短,孢子较多;而米曲霉2号菌落较小,孢子发芽时间及产孢子时间比1号晚,成曲孢子较1号少,但菌丝长且粗壮,种曲颜色偏绿,成曲颜色偏白,米曲霉2号的产酶能力强。蛋白酶性质的研究结果显示,两株米曲霉成曲的蛋白酶性质有差异,1号和2号的最适反应温度分别为45℃和50℃,最适反应pH分别为6.0和9.0。此外,两株米曲霉的成曲蛋白酶的耐盐性相当,随着盐浓度的增大,酶活力均逐渐降低,在20%氯化钠条件下,酶活力均降至无盐条件下的20%~30%。     

特色紫菜酱的发酵工艺

目的探究紫菜酱得最佳发酵工艺。方法以干制坛紫菜为原料,参照国标测定紫菜中的基本成分与营养成分,用乳酸菌和米曲霉对坛紫菜进行发酵制备紫菜酱,以发酵产物中的游离氨基酸含量和感官检验结果作为指标,通过正交实验对紫菜酱的发酵条件进行优化。结果干制坛紫菜中粗蛋白质为34.13%,粗脂肪为3.89%,灰分为9.32%,水分含量为11.80%。紫菜含有17种氨基酸,包含7种人体所必需的氨基酸。四因素三水平的正交实验确定发酵紫菜酱的最佳发酵条件为米曲霉接种量是1.0%,乳酸菌的接种量是1.0%,发酵时间是5 d,发酵温度是25℃。在此基础上,经过调配得到原味、香菇味、香辣味、牛肉味4种不同风味的紫菜酱配比。结论最佳的发酵工艺条件制备的紫菜酱味道鲜美,口感极佳,为高营养、高品质的酱料产品。     

聚氨酯泡沫固定化米根霉发酵L-乳酸的研究

对软质聚氨酯泡沫吸附固定化米根霉发酵生产L-乳酸进行了研究，确定了种子培养方式。与单纯固定化发酵相比，采用游离茵丝方式进行种子培养，然后在发酵培养基中添加适量软质聚氨酯泡沫的固定化发酵方式，发挥了固定化发酵和自聚集形成小茵球发酵的双重优点，产酸量得到提高。     

利用米曲霉制作腊八豆的研究

以酿造酱油用的米曲霉经紫外线诱变选育后，人工接种于煮熟的黄豆制作腊八豆。结果表明，接种量为熟豆重量的0．5％(孢了含量10^10个／g菌剂)，经32～35℃、48h前发酵便可得优质霉豆胚，加适量食盐、食用白酒及生姜等拌匀入坛进行10～15d的后发酵，便可获得品质极鲜美，食后余味甘甜的腊八豆，优于毛霉型腊八豆，更优于传统方法制作的腊八豆。比传统腊八豆的制作周期缩短近1个月，便于工业化生产。