利用CpG DNA甲基化酶M.SssⅠ共表达载体制备限制性内切酶NotⅠ

限制性核酸内切酶是DNA重组的重要分子生物学工具。由于其本身对DNA有切割作用导致其重组表达在技术上十分困难,产率低、提纯程序复杂。而商业化生产所采用的利用专一型甲基化酶保护宿主DNA的限制酶表达技术流程繁琐、实用性有限。为表达NotⅠ限制酶,采用来源于Spiroplasma sp.MQ1的DNA甲基化酶M.SssⅠ特异性甲基化CpG序列,甲基化后的DNA会免受识别位点中包含CpG序列的限制酶NotⅠ的切割。将甲基化酶M.SssⅠ导入大肠杆菌表达宿主ER2566后,M.SssⅠ基因在宿主中持续表达并甲基化宿主DNA成CpG甲基化样式;利用此表达体系制备限制性内切酶NotⅠ获得成功。并借助引入纯化标签经过简便的Ni亲和层析和阴离子交换层析2步层析洗脱纯化,制备了高活力高纯度的重组限制酶NotⅠ。此表达体系可应用于一系列识别位点中包含CpG序列的限制酶的表达。     

β-1,4-葡聚糖内切酶egl3基因在乳酸乳球菌中分泌表达的研究

研究采用重叠延伸PCR合成技术将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)分泌蛋白基因序列usp45(81bp)和瑞氏木霉(Trichoderma reesei)β-1,4-葡聚糖内切酶成熟蛋白序列egl3(657bp)连接成融合基因usp45-egl3,构建了分泌型重组质粒pMG36eusp45-egl3及重组乳酸乳球菌L.lactis subsp.lactis MG1363/pMG36e-usp45-egl3,分析了重组乳酸乳球菌表达β-1,4-葡聚糖内切酶的效果及其降解滤纸和小麦秸秆的能力。结果表明,重组乳酸乳球菌L.lactis subsp.lactis MG1363/pMG36e-usp45-egl3经28h培养能胞外分泌酶活为1 016U/L的β-1,4-葡聚糖内切酶,有效地降解了羧甲基纤维素钠。在30℃恒温培养10d时,重组乳酸乳球菌L.lactis subsp.lactis MG1363/pMG36e-usp45-egl3降解滤纸和小麦秸秆为其提供发酵底物,分别产生乳酸2.55g/L和6.95g/L,pH分别降至5.10和4.84,干物质降解率分别为4.22%和29.36%。     

HOLD不住的炼油——《石化和化学工业“十二五”发展规划》解读系列之一

＂十二五＂是我国国民经济发展的重要战略机遇期,也是石化和化学工业发展的关键时期。为适应国内外形势新变化,深入贯彻落实科学发展观,加快转变发展方式,促进石化和化学工业转型升级,提高行业整体质量和效益,增强国际竞争力和可持续发展能力,工信部发布了《石化和化学工业＂十二五＂发展规划》以及《烯烃工业＂十二五＂发展规划》、《危险化学品＂十二五＂发展布局规划》、《化肥工业＂十二五＂发展规划》和《农药工业＂十二五＂发展规划》四个子规划。本刊从本期开始对《规划》将做一个系列解读,以飨读者。     

350MW超临界中压缸启动机组切缸关键控制要点分析

本文以北京北重汽轮机厂首台NC350-24.2/566/566型超临界凝汽式汽轮机为例,介绍了该汽轮机中压缸启动的流程和控制要点,基于高压缸保护逻辑、切缸条件及动态过程分析,结合机组多次启动切缸成功的经验,重点剖析了中压缸启动过程中切缸关键控制要点,实现了该类型机组平稳快速切缸操作,缩短启动时间和减少启动消耗,从而提高机组的安全与经济效益。     

齿切滚切两用机简介

1　概述在条形茶的精制加工过程,有一定数量的头子茶需经过剖切才能达到样品的拼配要求。目前使用的切茶机有齿切机、滚切机和螺旋切茶机三种,以齿切机、滚切机使用较为普遍。由于切茶机是一种高效率的生产设备,且头子茶的数量相对又较少,一般规模的茶叶精制厂只需配备1台...     

岩基破坏模式的划分及其极限承载力的确定方法

以岩体结构控制论的观点为基础，将岩基破坏形态的研究作为突破口，综合考虑岩基承载力的诸多影响因素，划分了岩基可能破坏模式，并建议了各模式下极限承载力理论计算公式。     

同江堤防工程堤基清理的施工方法

介绍同江堤防工程堤基清理施工的几种方法及其特点和施工注意事项。     

机开票据在给业财务管理中的应用

介绍了目前在徐州矿务集团有限公司开发使用的处理庞大内部财务划拨业务实现机开票据的情况，并介绍了程序的组成及主要功能。     

钢丝切丸在横梁抛丸线上的应用

从铜丸丸粒的种类、铜丸粒径的最佳值、铜丸粒径的最佳比例等多角度阐述了卡车横梁抛丸线磨料由钢丝切丸替代铸钢丸方案试验及实施后的效果。     

马丽散在松软煤层切眼掘进及刷大中的应用

运用马丽散注浆对松软煤层切眼掘进及刷大顶板进行超前加固，能及时控制顶板事故发生。该技术在三河尖矿7317切眼掘进及刷大成功应用，提高了应力集中、松软煤层断面再次刷大的安全性，加快了掘进速度，同时大大降低了职工的劳动强度，取得了明显的经济效益和安全效益。