凡纳滨对虾抗菌肽的筛选及与DNA的结合机制

探究凡纳滨对虾中一种新型抗菌肽PV13对副溶血性弧菌的抑菌活性及与DNA的结合机制。采用超高效液相色谱-质谱联用技术鉴定凡纳滨对虾体内小分子多肽序列,并采用生物信息学从序列库中分析、筛选得到阳离子抗菌肽PV13(ALPWVLPWALPRALPRVLPR)。通过最低抑菌浓度(MIC)和时间杀伤曲线(Time-kill)测定抗菌肽PV13对副溶血性弧菌的MIC为62.5 μg/mL,可在2 h内将副溶血性弧菌全部杀灭。采用透射电子显微镜观察、细胞内膜通透性测定、DNA凝胶阻滞和圆二色谱仪等评价抗菌肽对副溶血性弧菌的抑菌机制。结果表明,抗菌肽PV13能增加副溶血性弧菌细胞膜内膜的通透性,使得细胞膜变薄,从而进入细胞,与基因组DNA结合来体现其抑菌活性,二者结合程度与肽浓度呈正相关。抗菌肽PV13在PBS和SDS溶液中均呈无规则卷曲结构,与副溶血性弧菌基因组DNA结合后,色谱吸收峰发生明显变化。推测序列中4个重复的亮氨酸-脯氨酸区域可能是其抑菌活性功能域。上述结果对凡纳滨对虾中抗菌肽的筛选及其分子设计具有指导意义,同时也为抗菌肽PV13作为食品新型防腐剂的应用提供理论支持。     

青刺果抗菌肽组分的分离及其稳定性分析

旨在高值化利用青刺果榨油后副产物青刺果粕中的蛋白质，以青刺果粕为原料，提取青刺果蛋白并制备蛋白酶解物，采用活菌吸附法联合反相高效液相色谱（RP-HPLC）从蛋白酶解物中筛选出抗菌肽组分，评价其抑菌活性，并对抑菌活性最好的组分进行稳定性分析。结果表明：筛选出的3个抗菌肽组分（F1、F2和F3）中，F2组分抑菌活性最好，当其质量浓度为10 mg/mL时对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性分别达到45.5%和39.1%；抗菌肽组分F2抑菌活性随温度升高和盐溶液浓度增加均降低，最适pH为6.0，在酸性环境中极不稳定，对酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性均较差，对中性蛋白酶耐受性较好。综上，青刺果粕中的蛋白酶解物具有抑菌活性，具有开发青刺果抗菌肽的潜力。     

抗菌肽Met-Ala-Lys对铜绿假单胞菌细胞膜的作用机制

以抗菌肽Met-Ala-Lys(MAK)和铜绿假单胞菌为研究对象,采用NPN荧光探针法,圆二色谱法以及原子吸收光谱测定测定铜绿假单胞菌细胞膜结构的变化,探讨MAK对目标菌生长的影响作用机制。结果表明:随着MAK对铜绿假单胞菌作用时间的增加,MAK的二级结构尤其是无规则卷曲结构发生变化明显,细胞内膜(吸附速率从54.03%降至27.33%)和外膜(荧光强度在前30 min持续增强,30 min后基本稳定在45左右)受到影响,通透性明显增强,导致钾离子(从处理10 min时迅速增加)和蛋白质泄漏量(从4.65μg/m L到10.25μg/m L)以及细胞膜的疏水性随之增加,细胞表面膜电位发生变化。表明MAK能改变铜绿假单胞菌的表面特性,抑制其生长,进而起到抗菌作用。本研究为抗菌肽MAK的抗菌机理制研究奠定一定的理论基础。     

Bacillus pumilus HN-10抗菌肽P-1对粉红单端孢的抑菌机理

Bacillus pumilus HN-10抗菌肽P-1是一种对粉红单端孢（Trichothecium roseum）具有很强抑菌作用的肽,但其抑菌机理尚不明确。本研究从细胞膜通透性、蛋白合成和核酸合成3 方面研究其抑菌机理。通过大分子释放量和电导率研究抗菌肽P-1对粉红单端孢细胞膜通透性的影响;经胞内蛋白含量测定及胞内蛋白十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析研究抗菌肽P-1对蛋白合成的影响;采用琼脂糖凝胶电泳和荧光光谱分析抗菌肽P-1对粉红单端孢DNA的凝胶阻滞作用及与溴化乙锭（ethidium bromide,EB）竞争性结合作用,并通过DNA和RNA相对含量来研究粉红单端孢核酸合成是否受到抑制。结果表明：抗菌肽P-1可引起粉红单端孢细胞膜通透性增加,胞内电解质和大分子物质外泄;同时,菌体蛋白合成受到抑制,尤其对分子质量在43.0～97.4 kDa之间的蛋白最为明显;抗菌肽P-1对DNA没有明显阻滞作用,但其能与EB竞争性结合DNA,使核酸合成受到抑制,导致菌体代谢紊乱,影响蛋白质的正常表达,进而起到抑菌作用。     

响应面法优化副干酪乳杆菌HD1.7产Paracin1.7发酵培养基

目的:优化副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1.7发酵产抗菌肤Paracin 1.7培养基.方法:采用Plackett-Burman设计,从8个因素中筛选显著的影响因素,然后通过最陡爬坡和Box-Behnken设计进行优化,并用JMP 7.01软件分析.结果:用Plackett-Burman设计筛选出影响显著的3个因素——葡萄糖、MgSO4、MnSO4,其最佳质量浓度分别为6.5685、0.454、0.01052 g/L.在优化后的培养基下,抗菌肤效价达141.648 IU/mL,产量比优化前(74.13 IU/mL)提高了1.91倍.结论:副干酪乳杆菌HD1.7产生的抗菌肽Paracin1.7对多种革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌及酵母菌都有抑制作用,可作为新型食品防腐剂.本研究结果为抗菌肤Paracin1.7的工业化生产奠定了基础.     

天然食品防腐剂--抗菌肽

TheNaturalFoodPreservartive－AntimicrobialPeptideLuiYiNingZhengxiang具有抗菌作用的多肽简称抗菌肽,它们在自然界中广泛存在。已确定一些抗菌肪的基因编码,可以利用基因工程使生产简单化,加宽抗菌谱,提高产量［1,2,3］。本文介绍了来自植物、昆虫、微生物和脊椎动物的抗菌肽,比较了它们的分子结构和作用方式,并讨论了应用前景。1微生物中的抗菌肽1．l细菌素和细菌素类似物工．1．五小菌素小菌素主要由肠杆菌科细菌产生,分子量通常低于SKDa。它们结构紧密、热稳定性好,对链霉蛋白酶或枯草溶菌素有抗性。所有的小菌素都…     

牛血抗菌肽的制备及应用

以新鲜黄牛血为原料,利用离心、裂解等方法提取抗菌肽,在单因素试验的基础上通过正交试验研究牛血离心转速、NH4Cl溶液与样品体积比、超声波功率和超声时间对粗抗菌肽得率的影响。结果表明：最佳提取条件为牛血离心转速3 500 r/min、NH4Cl溶液与样品体积比3∶1、超声功率600 W、超声时间8 min,验证得粗抗菌肽得率可达0.008 5%;进一步采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法确定抗菌肽的分子量,并通过电洗脱分离纯化的抗菌肽,结果表明抗菌肽的分子量在14 kDa左右,电洗脱回收率为82%。     

带鱼蛋白抗菌肽抑菌效果的影响因素

以舟山带鱼为原料,采用复合酶解法制备带鱼蛋白抗菌肽,探究温度、pH值、胰蛋白酶、β-内酰胺酶、反复冻融和金属离子对带鱼蛋白抗菌肽抑菌效果的影响。结果表明：带鱼蛋白抗菌肽具有较强的热稳定性;在pH值为4.8时,带鱼蛋白抗菌肽的抑菌活性最高,达到45.12%,在pH值为8.8时出现最低值40.08%;此抗菌肽在胰蛋白酶和β-内酰胺酶的作用下,依然保持了原有的抑菌活性;随着冻融次数的增多,抗菌肽的抗菌效力呈下降的趋势,但在冻融6次之后,也只下降到90.28%,;带鱼蛋白抗菌肽对Na+、K+、Ca2+、Mg2+具有较强的稳定性,抑菌活性基本不受影响;但是对Zn2+、Fe2+和Fe3+表现出较低的耐受性,其相对抗菌效力分别降低至86.25%、76.38%和74.97%,应当避免带鱼蛋白抗菌肽与这些离子的接触。该抗菌肽在各因素条件下稳定性较好,在作为天然抗菌剂上有一定的应用前景。     

ε-聚赖氨酸作为天然防腐剂在食品中的应用研究进展

ε-聚赖氨酸是由25～35个赖氨酸残基通过分子间羧基与氨基缩合形成酰胺键连接而成的L-赖氨酸同型聚合物,作为一种高效、安全、环保的天然生物防腐剂受到了欢迎.ε-聚赖氨酸可以通过影响细胞膜、遗传物质、酶及蛋白质完成抑菌作用,在食品中添加ε-聚赖氨酸不仅可以抑制腐败微生物的生长繁殖,还能延缓食品品质变化,提高食品质量,延长...     

抗菌肽应用于食品中的研究现状及面临的挑战

食品安全问题一直为人们所关注,其中微生物污染是导致食品腐败变质的主要原因。抗菌肽来源广泛,抑菌谱广,杀菌速度快,可以较好地控制食品中腐败微生物的滋生;对pH值、蛋白酶和热处理有较好的稳定性,在成分复杂的食品体系中有一定的适用性;由于其抑菌机理特殊,不易产生耐药性;部分具有抗氧化和提高免疫力等多种功能,对人体具有一定的保健作用。抗菌肽的以上特点满足了人们对新型防腐保鲜剂的多种需求,有望在食品工业上发挥重大作用。因此,在抗菌肽的生物学功能以及抗菌肽保鲜机理简单介绍的基础上,对抗菌肽应用于不同食品中的研究现况进行详细综述,最后对抗菌肽在食品中应用目前存在的问题和发展方向提供了思考。