高效液相色谱法定量分析竹节参中人参皂苷Rb1的含量

用RP-HPLC测定竹节参中人参皂苷Rb1的含量,采用Venusil ABS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm5,μm),以乙腈-水(35∶65)为流动相,流速1 mL/min,检测波长203 nm。结果表明,人参皂苷Rb1在25～500μg/mL间线性关系良好(r=0.999 4),平均加样回收率为99.64%,RSD=1.52%。该方法快速、准确、重现性好,可用于竹节参中人参皂苷Rb1的含量测定。     

竹节参总皂苷改善高脂高糖饮食小鼠的神经炎症及可能的机制

探索了竹节参总皂苷(saponins of Panax Japonicus,SPJ)对高脂高糖饮食诱导小鼠脑组织炎症反应的改善效果。Balb/c小鼠随机分为四组:正常对照组、模型对照组、SPJ低剂量组(16.7 mg/kg),SPJ高剂量组(50 mg/kg),分别给予普通饲料、高脂高糖饲料及添加不同剂量SPJ的高脂高糖饲料,喂养4个月。与正常对照组比较,模型对照组的皮层形态结构异常,细胞凋亡增多,小胶质细胞激活增加,炎症相关因子表达升高。给予竹节参总皂苷干预,可明显改善脑组织形态结构,减少细胞凋亡和小胶质细胞活化,减轻炎症相关因子iNOS、COX-2和IL-1β的蛋白表达,并抑制NLRP3炎症小体包括NLRP3、ASC、Caspase-1的表达。可见,竹节参总皂苷可具有改善高脂高糖饮食小鼠的脑组织炎症反应的效果,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体的激活从而减少炎症因子表达有关。     

竹节参总皂苷通过激活自噬抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡

观察竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonica,TSPJ)对自然衰老大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并从自噬角度探讨其作用机制。取18月龄SD雄性大鼠随机分为模型组、TSPJ低、高剂量组,每组10只;TSPJ低、高剂量组分别投食给予TSPJ 10、30 mg/kg,模型组每天投食等量正常饲料,持续给药至24月龄;同时取10只6月龄大鼠作为对照组。与青年对照组相比,自然衰老组心肌细胞排列紊乱,肌纤维断裂,心肌细胞凋亡指数增加3倍。TSPJ能有效改善衰老大鼠心脏组织的形态结构和心肌细胞凋亡下降55%;衰老模型组Bax、Caspase-3、Caspase-9、p62蛋白表达分别升高了9.5,1.8,4.1,3.4倍,Bcl-2、Bcl-2/Bax及、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1分别下降了98%,99%,70%,48%;TSPJ组中Bax,Caspase-3,Caspase-9和p62分别下调87%、65%,70%和65%,Bcl-2,Bcl-2/Bax比值,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1表达分别升高了12.75,138.5,5.68和2.6倍。结果表明,竹节参总皂苷能有效地改善衰老大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与TSPJ激活衰老大鼠心肌细胞自噬相关。     

鄂产竹节参的HPLC-DAD特征图谱研究

通过结合TLC、UV及三维图谱法,对从竹节参中提取出的总皂苷类化合物进行定性分析。在波长为203 nm的检测条件下,以流动相水(0.5‰磷酸)和乙腈在流速为1.0 mL下梯度洗脱。利用该法,可鉴别竹节参总皂苷,方法简便、快捷。同时为竹节参总皂苷指纹图谱的建立提供充分依据。     

竹节参皂苷IVa甲酯对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞增殖影响及机制研究

目的: 探讨竹节参皂苷IVa甲酯（chikusetsu saponin iva methyl,CSIM）对血管紧张素II（angiotensin,Ang-II）刺激的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖的影响及机制研究。方法: 以大鼠血管平滑肌细胞为实验对象,建立Ang-II刺激的VSMCs增殖模型。MTT法检测CSIM对VSMCs的毒性;CCK-8法、BrdU法检测CSIM对VSMCs增殖的影响,划痕实验检测CSIM对VSMCs迁移力的影响,免疫蛋白印迹法检测PTEN、NF-κB蛋白表达水平。结果: 3 μmol/L的CSIM可显著抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖(P<0.05)与迁移(P<0.05),并伴随着PTEN蛋白的明显上调(P<0.05)及NF-κB蛋白表达的显著性降低(P<0.05)。结论: CSIM抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖与迁移,其机制可能与上调PTEN蛋白,降低NF-κB蛋白表达有关。     

3,5-二硝基水杨酸比色法测定竹节参中多糖的含量

建立了竹节参中多糖的含量测定方法,采用3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法),测定竹节参中的还原糖和总糖的含量,并计算出总多糖的含量.得出以葡萄糖为对照品,线性范围为80～320μg/mL(r=0.999 6),加样回收率为97.42%～103.00%;竹节参中总多糖含量9.66～10.86mg/g.该方法灵敏、稳定、重复性好,有助于竹节参质量控制方法的研究.     

竹节参总提物对LPS诱导BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用

本文研究了竹节参总提物对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激所致的BV2小胶质细胞炎症反应的保护作用及其机制。MTT筛选不同浓度竹节参总提取对小胶质细胞增殖影响;一氧化氮试剂盒检测NO表达水平;PCR检测IL-1β、TNF-α和iNOS的mRNA表达;免疫荧光检测NF-κB表达及定位。竹节参总提物在3.125~50 mg/L对正常状态及LPS 1 μg/mL诱导的炎症状态下小胶质细胞生长均无明显影响;与正常组比较,模型组NO释放量是其11.82倍,TNF-α、IL-1β和iNOS的mRNA表达量分别是正常组的1.35、1.78和2.50倍,并且NF-κB核移位明显;与模型组比较,竹节参总提物在3.125~50 mg/L均能不同程度抑制NO释放量,并减少IL-1β、TNF-α和iNOS的mRNA表达水平;25、50 mg/L竹节参总提物有效抑制了小胶质细胞中NF-κB的核移位。竹节参总提物可减轻LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症反应,其主要机制为抑制NF-κB的核移位,进而降低了炎症因子的分泌。     

竹节参总皂苷减轻衰老大鼠的神经细胞凋亡

本研究探讨竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)对自然衰老大鼠内质网应激相关蛋白的调节作用以及对神经细胞凋亡的干预作用。雄性SD大鼠随机分为6月龄组、24月龄组、SPJ低剂量组(10mg/kg)和高剂量组(30mg/kg)。Westernblot法检测大鼠皮层和海马内质网应激相关蛋白(GRP78、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、ATF6、p-IRE1、XBP1)以及凋亡相关蛋白(p-JNK、CHOP、Bcl-2、Bax)表达变化。结果显示,与6月龄组相比,24月龄组皮层/海马组织中GRP78、p-PERK、p-EIF2α、ATF4、ATF6、p-IRE1、XBP1和Bcl-2/Bax蛋白表达分别下降了80%/59%、82%/78%、79%/77%、94%/74%、72%/66%、78%/81%、82%/71%和90%/92%,p-JNK/JNK、CHOP蛋白表达分别上升了1/1.72、3.33/1.33倍。给予不同剂量竹节参总皂苷干预后,均能明显上调内质网应激相关蛋白和Bcl-2/Bax的表达水平,下调促凋亡蛋白表达水平。研究结果表明,竹节参总皂苷能通过上调内质网应激相关蛋白以及抗凋亡蛋白的表达水平,下调促凋亡蛋白的表达,从而维持衰老大鼠脑组织的内质网稳态,减少神经细胞凋亡。     

竹节参总皂苷的纯化方法研究

比较了大孔树脂吸附与丙酮沉淀法对竹节参总皂苷的纯化效果。结果表明,大孔吸附树脂对竹节参总皂苷具有较好的纯化能力,D101大孔树脂对竹节参总皂苷的吸附能力最佳。最佳洗脱条件为:60%的乙醇洗脱,洗脱剂用量为3BV(BV为树脂体积倍数),洗脱流速为1 mL/min。该条件下竹节参总皂苷纯度可达88.12%(丙酮沉淀法64.30%)。     

竹节参总皂苷对高脂高糖小鼠脑组织凋亡的保护作用

观察竹节参总皂苷（saponins from Panax japonicas,SPJ）对高脂高糖饮食小鼠脑组织凋亡的保护作用。昆明小鼠随机分成正常对照组、高脂高糖模型组和药物低（100 mg/kg）、高（300 mg/kg）剂量组,分别给予普通饲料、高脂高糖饲料、竹节参总皂苷低、高剂量饲料喂养。Western blot法检测抑凋亡相关蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax、细胞色素C（Cytochrome C）、半胱天冬蛋白酶（Caspase-3和Caspase-12）、炎性因子诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、环氧合酶2（cyclooxygenase,COX-2）、IL-1β和NLRP3炎症小体包括NOD样受体家族3（NOD-like receptors,NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1和抗氧化应激蛋白沉默信息调节因子1（Silence information regulator 1,SIRT1）、腺苷酸活化蛋白激酶（Adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）磷酸化水平。与高脂对照组相比,竹节参总皂苷高剂量组中Bcl-2、SIRT1和p-AMPK分别升高了1.31倍、1.05倍、1.33倍,Bax、Caspase 3、Caspase 12、Cytochrome C、COX-2、iNOS、IL-1β、NLRP3、Caspase 1和ASC分别下降了34%、39%、60%、37%、41%、25%、43%、49%、31%、52%。竹节参总皂苷对高脂高糖小鼠具有抗凋亡作用,其机制与其调节NLRP3炎症小体及炎性因子,增加抗氧化应激相关蛋白有关。