免疫亲和层析净化高效液相色谱法和胶体金快速定量法测定小麦中呕吐毒素含量的比较

采用免疫亲和层析净化高效液相色谱法和胶体金快速定量法测定小麦中呕吐毒素含量。结果表明:用这两种方法测定添加不同浓度呕吐毒素的小麦,测定结果的相对标准偏差分别为1.59%~3.08%和7.28%~11.50%,且两种方法测定呕吐毒素呈阳性的小麦样品的测定结果相对偏差小,相关系数为0.995,相关性好。这两种方法各有优缺点,免疫亲和层析净化高效液相色谱法精密度好,能够对呕吐毒素进行精准定量,但试验步骤较为复杂,耗时长;胶体金快速定量法检测简便快速,能用于大量样品的快速筛查,预期在粮食中真菌毒素检测方面具有很好的应用前景。     

甲基对硫磷水解酶纯化与保存

对带有重组表达质粒E.coli菌种进行了扩大培养,在IPTG的诱导下大量表达,获得了C-末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶。经Ni-NTA亲和层析获得了具有较高生物活性的甲基对硫磷水解酶。本文对该酶纯化的梯度洗脱条件和酶动力学进行了考察,并通过环境对酶活性的影响检测,确定了将酶制备成冻干粉,更利于保存。     

花生过敏患者血清中抗Ara h1的IgG与IgE分离纯化研究

Ara h1是花生的一种主要致敏原蛋白,能够使花生过敏患者产生特异的IgG与IgE,从而导致花生过敏症状。Ara h1与其特异IgG和IgE的结合是导致花生致敏的一个重要原因。本研究利用Protein A亲和层析柱与Ara h1作为配体的亲和层析柱纯化抗Ara h1的IgG与IgE。高纯度的抗Ara h1特异IgG与IgE对探讨研究其与Ara h1之间相互作用具有重要意义。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和层析柱的研制

利用本实验室研制的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单克隆抗体研制了DON单克隆抗体免疫亲和柱,柱容量为1μg。小麦样品添加DON标品(1～3μg/g),用蒸馏水提取样品中DON,经免疫亲和柱净化、甲醇洗脱,HPLC检测,回收率大于88%,变异系数4.6%～7.4%。      

相分离联合层析去除类人胶原蛋白中的内毒素

研究类人胶原蛋白(HLC)中内毒素的去除方法,为规模化制备医用生物材料提供参考。采用Triton X-114双水相分离法作为内毒素去除工艺的第1步,亲和层析法作为工艺的第2步,二者偶联操作从类人胶原蛋白中除去内毒素,并对除去内毒素后的HLC进行了理化性能检测。结果表明:采用Triton X-114双水相分离法,在蛋白质量浓度2.06 mg/m L,作用温度44.71℃,作用时间3 h,溶液pH值为7时双水相分离系数K=9.58,蛋白中内毒素含量由10 000—25 000 EU/mg下降为1.5—2.0 EU/mg,蛋白回收率为95.6%;偶联了多聚赖氨酸亲和配基的亲和层析后,HLC中内毒素含量由1.5—2.0 EU/mg降至0.025—0.25 EU/mg,蛋白回收率可达81.9%;2步操作均不会使蛋白发生相对分子质量及化学结构的改变。此工艺操作简便,可显著降低生产成本。     

四种金属离子亲和层析纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的效果比较

目的 选择固相金属亲和层析柱的金属离子,以优化分离纯化重组戊型肝炎病毒包涵体的条件。方法 在同一试验条件下用4种金属离子柱分离纯化目的蛋白。结果 包涵体经不同离子柱层析时目的蛋白的收获率、纯度、洗脱条件各异。结论 镍离子柱纯化效果最佳。     

免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定澳洲坚果中黄曲霉毒素B_1

建立了一种测定澳洲坚果中黄曲霉毒素B1的免疫亲和层析净化高效液相色谱法。采用甲醇-水提取,提取液经过滤、水稀释、净化,甲醇洗脱溶解,柱后衍生液相色谱仪荧光检测器测定。实验结果表明,澳洲坚果中黄曲霉毒素B1的检出限为0.2μg/kg,在添加水平为5、10、20μg/kg的回收率实验中,平均回收率为81%~96%,相对标准偏差为0.8%~3.7%。     

壳聚糖涂层亲和层析在超氧化物歧化酶纯化中的应用

1前言亲和层析是蛋白质纯化中分离效率最高的技术之一。亲和配基有多种形式如单机、底物、活性染料、金属离子等。固定化金属离子亲和层析（Immobilizedmetalionaffinitychromatog’“PhyIMAC）是Porath在1975年首先研究的一种高效分离技术［‘3。IMAC和普通的亲和层析相比,具有一些优点,如亲和配基Cu’”、Zn’“价廉;可在高盐浓度下操作;稳定,容易再生。Sulkowke曾用IMAC技术分离纯化干扰素,一步可纯化产品几十倍【“,收率达90％。目前IMAC介质制备是先在软基质SePharose或SePhadex上用化学交联法弓卜螫合剂IDA（Imino…     

大鼠骨粘连蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

将编码骨粘连蛋白(osteonectin, ON)全长的cDNA亚克隆入含tac启动子的表达质粒pGEX-KG中,构建了tac启动子控制的原核表达载体pGEX-KG/ON.转化大肠杆菌BL21 (DE3) pLysS,IPTG诱导3 h后表达量达到最高水平,约占菌体总蛋白10%,表达产物以可溶形式存在.通过硫酸铵分级沉淀、超滤膜分离、亲和层析得到骨粘连蛋白.实验证实蛋白有较强的Ca2 结合活性.     

蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化

将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性.