树莓超氧化物歧化酶的提纯方法比较

利用凝胶层析初步纯化树莓SOD,纯化条件:柱体1.6cm×60cm,磷酸盐缓冲液pH7.8、2.5mmol/L,流速O.3mL/min,每管收集3mL.经过SephadexG-100层析分离纯化,得到三种SOD同工酶.分别通过金属螯合亲和层析和DEAE-52层析进一步对树莓SOD纯化,并比较两者纯化效果.金属螯合亲和层析纯化得到SOD的回收率和纯化倍数均高于DEAE-52层析,因此金属螯合亲和层析更有利于SOD的进一步纯化.     

Bacillus amyloliquefaciens中性植酸酶基因的原核表达及蛋白纯化和性质

淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens是一种嗜热细菌，其产生的中性植酸酶具有很好的应用前景．通过TD-PCR技术将Bacillus amyloliquefaciens编码的中性植酸酶基因克隆至原核表达栽体pET-30a( )上，在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达，表达量占大肠杆菌可溶性蛋白的33．5％．采用金属Ni^2 亲和层析对基因表达产物进行纯化，表达产物具有正常的生物学功能．     

壳聚糖固定化金属离子亲和层析法对重组乙醛脱氢酶的纯化

以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2＋固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。结果表明,制备的壳聚糖Zn2＋固定化亲和层析填料,能够用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。该方法对重组ALDH的纯化倍数和回收率均高于目前的其他分离纯化方法。     

抗水牛乳β-乳球蛋白兔lgG的亲和纯化

为得到兔血清中纯度较高的特异性抗体，通过将纯化的水牛乳β-乳球蛋白耦联到免疫亲和梓上，用3mol／L氯化镁将特异性的IgG洗脱，得到了SDS-PAGE纯的IgG，其蛋白含量为5．8mg／ml，经ELISA榆测滴度为1：109。本实验所建立的方法可用于纯化兔血清中特异性的IgG。     

李斯特菌噬菌体裂解酶CBD蛋白的克隆与表达

单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域（CBD）能够特异识别李斯特菌细胞。本研究将CBDP40基因扩增后插入p ET32a（+）载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）表明,经0.1 mmol/L IPTG诱导的重组大肠杆菌BL21（DE3）在38 ku处有明显诱导条带,与预期蛋白分子量相符。经过超声细胞破碎,重组蛋白CBDP40分布在上清液中,通过镍离子螯合亲和层析纯化重组蛋白,洗脱后的蛋白浓度为0.908 mg/m L。经菌体结合和间接ELISA验证,重组蛋白CBDP40具有生物学活性,即对李斯特菌具有识别功能。CBD蛋白的重组表达、纯化及其活性验证,为深入研究裂解酶的理化性质和作用机制奠定了基础。      

重组ETI亲和树脂的制备及其纯化瑞替普酶的研究

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性地抑制溶栓药物瑞替普酶(r -PA)的活性。利用基因工程方法制备重组ETI蛋白,对其生化性质进行测定,并将rETI与CNBr活化的Sepharose 4B相偶联,制成ETI亲和树脂,用于纯化r-PA ,取得较好效果。     

母乳蛋白质组学研究

建立并评价一种去除母乳中高丰度蛋白的方法,富集低丰度蛋白,通过蛋白质组学技术探索母乳中的重要活性蛋白.选取了30个不同等电点及分子量区域的孤立蛋白点进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定,通过Mascot搜索引擎检索UniProt数据库,确定蛋白质信息.结果表明,母乳中的4种高丰度蛋白均得到一定程度的去除,并通过蛋白质组学技术鉴定出29个蛋白.发现母乳中低丰度的蛋白如:补体C3的片段,维生素D结合蛋白A,NDRG家族等.     

葡聚糖多克隆抗体制备与纯化

以DextranT40和BSA的交联物为抗原,多次免疫新西兰白兔,收集血清,并用rProteinA亲和层析柱纯化抗体,成功获得较高纯度的兔抗葡聚糖多克隆抗体。用ELISA法测定其效价,抗体效价为1∶32000以上。     

Clostridium cellulolyticum D-塔格糖3-差向异构酶基因的克隆、表达及酶活性

D-塔格糖3-差向异构酶是生物法生产新型功能性因子D-阿洛酮糖最为有效的酶。作者克隆到一种新型的D-塔格糖3-差向异构酶基因,来源于微生物Clostridium cellulolyticumH10。以pET-22b(+)为载体质粒,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌,IPTG可诱导目的蛋白质的过量表达;经亲和层析纯化的重组蛋白质样品进行SDS-PAGE分析,在约31 000处出现显著的特征蛋白质条带;活性检测结果表明:该重组酶具有较高的转化活性。     

产磷酸甘油氧化酶菌株的鉴定及其酶学性质研究

对筛选到的1株产磷酸甘油氧化酶的菌株进行了生理生化测定和16S rDNA序列分析,初步鉴定该菌株为粪肠球菌(Enrerococcus faecalis).菌株经发酵培养,超声波破碎后,依次经过双水相萃取、阴离子交换层析和金属离子亲和层析,得到的磷酸甘油氧化酶活力达到54.3U/mg.还原和非还原SDS-PAGE显示该酶为单一条带并测得其表观分子质量为6.7×104Da,HPLC显示其天然酶的相对分子质量为1.2×105Da,据此推测该酶由2个分子质量相同的亚基组成.酶促反应动力学研究结果表明,该酶的最适pH值和酸碱稳定范围分别为8.0和5.0～7.5,最适温度为35℃,以磷酸甘油二钠为底物时,其Km值为3.2×10-2mol/L.将酶在-20℃保存12个月后仍具有60%的酶活力;4℃保存1个月,酶活力仍保持21%.