葡萄球菌蛋白A的纯化新工艺

目的建立一种高效、简便、实用的分离纯化葡萄球菌蛋白A(SPA)的工艺。方法采用超声波破菌和IgG-Sepharose4B亲和层析分离纯化SPA;以Lowry法检测蛋白含量;双向琼脂免疫扩散法测定效价和特异性;用还原和非还原SDS-PAGE法检测纯度和相对分子质量。结果此法制得的3批SPA的蛋白含量分别为4·7、4·4和5·4mg/ml,收率分别为2·70、2·64和3·78g/100g湿菌。对人IgG的免疫双扩散效价均为1:64;与正常人、豚鼠、家兔和小鼠的血清反应均出现一条沉淀线,而与鸡和羊不出现沉淀线。经非还原SDS-PAGE检测只呈现一条蛋白带,相对分子质量约为160000～180000;经还原SDS-PAGE检测呈现两条蛋白带,相对分子质量分别约为67000和34000。结论已成功建立了分离纯化SPA的新工艺。     

胰岛素放射免疫分析质控血清的研制

介绍了亲和层状法制备胰岛素零值血清和胰岛素放射免疫分析质控血清研制的过程。胰岛素为免疫原对豚鼠进行免疫获得血清，将此抗血清抗直接偶抗溴化氰活化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ凝胶上，制成亲和层析柱，使正常人血清通过此柱，胰岛素被特异地吸附在柱中而从血清中除掉，用放方法测定过柱处理后的血清，其中不含胰岛素，经蛋白测定和醋酸纤维素膜电泳检测证明过柱前，后血清蛋白含量和组成未产生明显变化，向此血清中定量加入胰镐素     

sCAR-PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化

为获得腺病毒受体sCAR与掌叶半夏蛋白(PPA)的亚基B(PPAb)的融合蛋白,将PPAb基因克隆入已构建的原核表达载体pQE30-sCAR中,经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pQE30-sCAR-PPAb,转化大肠杆菌M15后获得工程菌。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-PPAb。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,在42 kD左右有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-PPAb能提高Ad-EGFP对Kasumi-1的感染效率。     

带信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白的表达及其分离纯化

以构建好的人胸腺素α1基因工程菌为研究材料,研究影响DsbA-胸腺素α1融合蛋白分泌效率的因素,优化信号肽酶表达得到阻遏的培养条件,获得含带信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白的菌体,破碎细胞后利用疏水层析与Ni2 螯合亲和层析进行目标蛋白分离纯化,获得较高纯度底物蛋白(信号肽DsbA-胸腺素α1融合蛋白,其分子量约为34 kD),为进一步研究及分离纯化DsbA信号肽酶创造条件.     

重组甜味蛋白Monellin在E.coli中的表达条件及其对ICR小鼠血糖的影响

实验探究了重组Monellin菌株的最佳培养条件,并对其进行了甜味阈值确认和血糖值影响实验.实验所用菌种为实验室构建保存的BL21(DE3)-pET28a Monellin菌种,利用不同浓度的乳糖和IPTG诱导该菌种生成目的蛋白,探究其最佳诱导条件,利用镍柱亲和层析纯化目的蛋白后进行相对甜度和甜味阈值实验,随后设置甜度...     

《热固性树脂》专家委员会专家简介

刘坐镇 1965年出生,担任生物反应器国家重点试验室生物分离研究室主任,华东理工大学中岳高新技术研究所所长,上海华震科技有限公司董事长,华昌聚合物有限公司董事长兼总经理,并负责全面工作。担任的学术团体职务有《离子交换与吸附》编委、中国化工防腐蚀协会常务理事、中国工程建设标准化协会委员。长期从事离子交换树脂及其它分离介质（如亲和层析介质等）的合成及其在生化物质提取分离中的应用研究。1993年创办华震科技有限公司,致力于树脂在生物工程行业的应用工作。     

解析《食品中真菌毒素限量》新标准

食品安全国家标准GB 2761—2011《食品中真菌毒素限量》,已于2011年4月20日发布,2011年10月20日实施。新标准不仅代替GB 2761—2005《食品中真菌毒素限量》,也代替了GB 2715—2005《粮食卫生标准》中的真菌毒素限量指标。笔者现就新旧标准的主要差异,特别是新标准采用的检验方法,做一些分析和比较。1.修改了标准名称新标准已修订为食品安全国家标准,是国家强制性标准必须执行,对保障食品安全具有重要性。2.明确了具体范围新标准规定了食品中黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素M1、脱     

铁离子螯合亲和层析分离抗氧化活性核桃肽

采用铁离子螯合亲和层析方法分离出具有不同抗氧化活性的核桃肽,并探讨核桃肽的抗氧化活性与铁结合能力的关系。结果表明,核桃肽在酸性条件(pH 5.5)下与铁的结合能力最强,随着pH逐渐升高,结合能力下降。磷酸氢二钠对吸附到铁亲和层析柱上核桃肽的洗脱效果最好,通过阶段洗脱,得到铁结合能力逐渐增强的核桃肽组分(F1、F2和F3)。对其总还原能力和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除能力进行测定,发现其抗氧化能力为F3>F2>F1(P<0.05)。结果表明,核桃肽的铁结合能力越强,其抗氧化活性越高。     

肝素-琼脂糖凝胶6FF的制备及其在抗凝血酶III分离纯化中的应用

以自制琼脂糖凝胶6FF为基质,肝素为配基,利用还原胺化方法制备了肝素-琼脂糖凝胶6FF介质. 考察了肝素偶联反应的影响因素,并对其进行了优化,得到肝素配基的含量为2.7 mg/mL. 用所制介质从人血浆中分离出抗凝血酶III,从血浆开始计算的抗凝血酶III活性回收率为31.76%,与商品Heparin-Sepharose CL-6B的分离效果相当.     

重组人SOD2/3杂合酶原核表达及纯化方法的研究

目的 摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶(rhSOD2/3).方法 利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2+浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯合亲和层析纯化rhSOD2/3.结果 重组酶的表达量占菌体...