纤维连接蛋白的提取及其在细胞培养中的应用

目的从牛血清中提取纤维连接蛋白(Fibronectin,FN),并观察其在细胞培养中的作用。方法将明胶偶联于溴化氰活化的Sepharose-4B,采用亲和层析法从牛血清或粗提后的样本中提取FN,并检测其蛋白含量。用纯化的牛FN处理细胞培养板,观察细胞在板中的生长情况,并与在进口板中的生长情况进行比较。结果所提取的FN,其蛋白含量约为400μg/ml,电泳结果与FN对照品一致,均为两条主带。用其处理的细胞培养板,培养细胞的形态和密度与进口板比较无明显差异。结论用溴化氰活化的Sepharose-4B提取FN是可行的,且其在细胞培养中有良好的助黏附与贴壁作用,有助于细胞培养。     

抗氯霉素卵黄抗体的制备及其分离纯化

将合成的氯霉素(CAP)与牛血清白蛋白(BSA)的偶联物(CAP-BSA)作为免疫抗原注射到母鸡体内得到氯霉素卵黄抗体(IgY). 比较了不同的提取方法,用优化的辛酸-硫酸铵沉淀法从卵黄液中初步提取卵黄抗体. 选用3,3￠-二氨丙基亚胺(DADPA)作为亲和凝胶与配基氯霉素之间的"间隔臂",合成了分离纯化抗氯霉素特异性IgY的亲和层析柱. 将IgY粗品经过亲和层析柱,得到的特异性IgY的抗体活性提高了10倍,收率约为3.3%.     

斑节对虾carcininPm3的表达及其无标签多肽的获得

crustin是对虾中重要的抗菌肽,本研究获得的carcininPm3属于斑节对虾crustin家族,是一种新型抗菌肽,成熟肽含有92个氨基酸,与其他对虾抗菌肽的同源性小于45％.根据其氨基酸序列和大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)的密码子偏好性设计carcininPm3的基因序列,将carci...     

金属螯合亲和层析法纯化玉米SOD及其酶学性质的研究

利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤初步分离了玉米SOD,利用金属螯合亲和层析纯化了SOD。电泳后活性染色与蛋白染色均得到3个条带,比活为8597,纯化倍数为307,回收率为29.4％,达到了电泳纯。结果表明玉米SOD亚基的分子量为16 000,最大紫外吸收在260nm处,该酶在pH值7～9、80％以下稳定,玉米SOD对KCN和H2O2敏感,对邻苯三酚的Vmax为49.50mmol／min、Km为0,163 4mmol／L。     

天蚕素抗菌肽(Cecropin A)融合蛋白的表达及其分离纯化工艺研究

通过单因素实验确定了天蚕素抗菌肽融合蛋白表达的最佳条件,即温度为31℃,种子菌接种量为2.0％,培养基pH值为6.5,诱导时间为10 h,此时融合蛋白的表达量占细胞总蛋白的30.6％;开发融合蛋白纯化工艺,将工程菌细胞超声破碎后,所得包涵体使用8 mol/L尿素溶液溶解,泵入2 mol/L尿素溶液中搅拌使蛋白质复性,复...     

转谷氨酰胺酶酶原在枯草芽孢杆菌WB800中的表达

以茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)基因组 DNA 为模板,PCR扩增得到转谷氨酰胺酶酶原基因(pro-transglutaminase,pro-TG),经pMD18-T载体亚克隆到表达载pBEp43(+),然后转化到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WB800中,经过32...     

高效液相色谱柱后衍生法检测啤酒中黄曲霉毒素的研究

现在大多数检测黄曲霉毒素的方法,如酶联免疫测试盒、免疫亲和层析净化荧光光度法等,都只能检测单一的黄曲霉毒素B₁或黄曲霉毒素总量,而且检测限高,重复性和稳定性不好,难以得到理想的测试结果。本文主要研究啤酒样品经pH7.0磷酸盐缓冲溶液调节pH值后,用含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析柱净化富集,黄曲霉毒素交联在层析介质的抗体上,用吐温-20/PBS将免疫亲和柱上杂质除去,再以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱,洗脱液经C₁₈柱分离,然后用液相色谱柱后衍生法,用荧光检测器进行检测。本方法可同时分离检测出黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁和G₂,检测限可达0.2μg/L。     

亲和层析法分离纯化油茶籽多糖Ⅰ的研究

根据油茶籽多糖Ⅰ所拥有的特异性磷酸基团,运用固化金属离子亲和层析法获得合适的金属螯合剂,使得具有一定降血脂作用的油茶籽多糖Ⅰ能特异性的被结合到琼脂糖凝胶上,从而获得纯度较高的油茶籽多糖Ⅰ。通过试验对亲和层析法在提取过程中的使用条件进行优化,得到最适pH以及离子类型。此外,试验将传统方法与亲和层析法进行比较,其对油茶籽多糖Ⅰ的纯化效果,尤其在去蛋白方面,后者能更有效地去除油茶籽多糖Ⅰ里残留的蛋白质。     

狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备

目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。     

无水体系中环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶制备高载量固定化金属亲和层析介质

在以二甲基亚砜为溶剂的无水体系中,利用环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶Sepharose 6 Fast Flow进行活化,并偶联亚氨基二乙酸和Cu2+制备了固定化金属亲和层析介质. 结果表明,该体系中环氧氯丙烷对琼脂糖凝胶的活化效率大幅度提高,在40%(j)环氧氯丙烷、0.02 g/mL NaOH及50℃、反应时间4 h的优化条件下,环氧基活化密度最高达165 mmol/mL,较目前报道的最高值提高50%以上. 最终所制介质的Cu2+螯合密度为128.3 mmol/mL,对BSA的平衡吸附容量达2.05 mmol/L. 以0.5 mol/L咪唑为洗脱剂,被吸附的BSA洗脱率可达90%以上.