表面等离子共振生物传感器技术及在生命研究中的应用

表面等离子体共振（Surface Plasmon Resonance,SPR）是一种入射光照射引起金属表面产生等离子体共振而导致反射光衰减的现象,反射光衰减程度与入射角和金属表面物质质量相关。根据这一原理研制的表面等离子体传感器,在检测、分析生物分子问的相互作用等方面有广泛的应用前景。本文对表面等离子共振生物传感器的工作原理、技术参数、检测方法进行了详细介绍,同时介绍了表面等离子共振技术在免疫检测、药物代谢及其蛋白质动力学等生命研究中的应用。     

酶水解海蟹加工下脚料制备调味品原料

以海蟹加工下脚料为原料,通过单因素及正交试验,结合免疫检测、氨基酸及多肽分析等研究蛋白酶水解海蟹下脚料制备调味品原料.蛋白酶水解海蟹下脚料粉碎样的优化组合条件为温度45 cI=、加酶量4 500U,g、时间5 h;蛋白酶水解海蟹下脚料蒸煮浓缩液的优化组合条件为温度60℃、加酶量4000U,g、时间3 h.免疫肢体金层析检测结果表明,水解液中原肌球蛋白被彻底分解,无过敏原性;水解液中多肽分子质量在78-24711Da之间占90.6%,水解液的蛋白含量13.32%,游离氨基酸总量51.75 mg/g,7种人体必需氨基酸(色氨酸未检测)占49.12%,含量约25.42mg/g.柠檬酸与苹果酸之比为2:1时水解产物脱腥效果较优.喷雾干燥产品的得率为5.25%,冷冻干燥产品的得率为21.17%.所制备的低过敏原性海蟹调味品原料(酶解蛋白液和蛋白粉)可添加在各类食品中.     

细胞角蛋白19片段抗原21-1含量化学发光微粒子定量免疫检测方法的建立

目的建立细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1,简称CY21-1)含量的化学发光微粒子免疫检测方法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)。方法原核表达制备重组CY21-1(r CY21-1),用其免疫BALB/c小鼠后,收集小鼠脾脏细胞,常规杂交瘤技术与Sp2/0进行融合,制备CY21-1单抗。间接ELISA法筛选可稳定分泌CY21-1抗体的杂交瘤细胞,分别标记微性磁珠(magnetic beads,MB)和吖啶酯(acridinium ester,AE),筛选可特异检测CY21-1的单抗配对,建立CY21-1 CMIA,同时验证方法的线性及灵敏度,并与同类试剂盒进行比较。结果经筛选获得了一组能特异检测CY21-1的单抗配对MB*26B5-3E4*AE,建立的CY21-1 CMIA对检测CY21-1校准品的线性范围为0.1~1 000 ng/m L,R~2=0.992 3,检测灵敏度为0.076 ng/m L。该方法与美国雅培公司生产的Abbott CY21-1 CMIA诊断试剂盒平行检测250份临床血清标本的结果具有良好的相关性(R~2=0.961 6)。结论成功建立了CY21-1 CMIA,且具有良好的线性及灵敏度,为我国肺癌的临床筛查和早期诊断奠定了基础。     

磁性微珠的结构及其特性

通过对超细磁粉表面的改造，实现了其与有机单体分子的复合，改变条件，可以得到不同粒径分布的磁珠，其分布范围窄，磁珠由超细磁粉核心，高分子材料层，化学功能基团组成，具有超顺磁性和强的蛋白吸附能力。     

基于化学发光原理的高通量免疫分析仪的研制

针对临床免疫检测高灵敏度、高通量的要求,研制了基于化学发光检测原理的免疫分析仪.结合化学发光免疫检测步骤,采用模块化设计思想和流水线作业模式完成仪器方案设计;通过微升级别液体加注过程的分析及仿真给出加样模块相关参数的优化原则;通过免疫复合物颗粒磁分离过程的分析给出磁场设计原则.在此基础上根据检测过程各步骤的操作要求及整体速度要求设计流水线各工位模块及控制系统.测试实验结果表明仪器检测结果准确,试剂兼容性好,达到了国家卫生部相关要求.仪器可稳定实现每小时180测试,目前已在多家医院临床应用.     

呋喃唑酮人工抗原的制备与鉴定

为了制备3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)的完全抗原,作者以乙醇肼和碳酸二甲酯为原料,首先合成了3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ),然后通过对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生制得3-(4-羧基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(CPAOZ),以CPAOZ作为半抗原,经水溶性碳化二亚胺法(EDC),缩合酯化法(DCC)和混合酸酐法(MA)法3种方法分别与载体蛋白偶联,合成人工抗原。对于制备产物通过紫外光谱扫描分析进行了鉴定,3种抗原的偶联比率分别为8、12、17。采用3种抗原做为包被原,建立了酶联免疫(ELISA)抑制曲线。结果表明,对AOZ的半数抑制率(IC50)分别为12.9、7.6、1.1 ng/mL。采用混合酸酐法(MA法)制备的包被抗原与抗体具有较好的匹配性。3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ),是硝基呋喃类抗生素呋喃唑酮在动物体内的稳定代谢物,采用本试验制备的抗原,有望获得特异性更好的抗体。     

流感疫苗血凝素含量检测方法的研究进展

目前流感疫苗血凝素含量最常用的检测方法是单向免疫扩散法(Single-radial immunodiffusion,SRID)。为了解决大流行流感发生初期无法获得参考品的情况,提高流感血凝素检测方法的灵敏度、重复性、准确性,人们从物理化学和免疫化学两个方面对SRID的替代方法进行了探索性研究。本文对近10年来对流感疫苗血凝素含量测定方法的研究进展作一简要综述。     

用于检测氯霉素类残留物的荧光免疫检测试纸条的研制

利用反相微乳技术合成了稀土铕-SiO2纳米颗粒,用其与氯霉素单克隆抗体结合制备氯霉素类残留物免疫检测探针,并制备免疫层析试纸条,用于牛奶中氯霉素和氯霉素琥珀酸盐同步检测,简便快速,30 min内出结果.与甲砜霉素、庆大霉素、磺胺二甲基嘧啶之间无交叉反应,特异性好,未发现非特异性吸附问题.     

以多孔金电极为传感界面的电化学双标记免疫传感器研究

本实验中制备得多孔金纳米电极,并采用层层自组装技术制作三明治电化学免疫夹心传感器。采用二种不同电位响应的中性红(NR)和硫堇(TH)为电活性标记物,利用循环伏安法(CV)和示差脉冲伏安法(DPV)定量测量,抗原浓度在1～100 ng/mL范围内,成功实现了正常兔和正常鼠的同时免疫检测,为未来多抗原同时免疫检测奠定了理论基础并具有一定的临床实验价值。     

莱克多巴胺的抗原合成鉴定及其抗体的制备纯化

莱克多巴胺属于β-兴奋剂类药物中的苯乙醇类衍生物，具有显著改善动物饲料利用效率，显著提高胴体瘦肉率的生产性能，因为其具有严重的副作用所以H前该类药物在我国和其他国家是被禁用的。本试验通过连接剂butane-1，4-diol diglyciydylether把莱克多巴胺和载体蛋白BSA和OVA偶联成免疫抗原和包被抗原，并采用紫外全波长扫描和SDS-聚丙烯酰胺凝胶的方法对合成的抗原进行了鉴定。通过免疫兔子获得了RCT的多克隆抗体，然后又通过饱和硫铵沉淀和proteinA-Sepharose4B的方法对抗体进行了纯化。纯化的抗体表现出对RCT较高的特异性和灵敏性。