紫外线照射对刺参体腔细胞吞噬活性的影响

采用流式细胞仪(FCM)技术与激光共聚焦显微镜技术(LSCM)对紫外线(UVA)照射后的刺参(Stichopus japonicus)体腔细胞的吞噬活性进行了检测。通过对刺参体内、外荧光吞噬微球孵育体系的筛选和比较,确定采用体外孵育方法测定吞噬率。在体外吞噬中,以荧光微球与体腔细胞的体积比为1∶1 500测定刺参体腔细胞吞噬率。结果表明,刺参经UVA照射,静置不同时间(0~4h)后提取体腔细胞,采用FCM检测其吞噬率在静止1h后达到最大,随后下降,LSCM检测结果与之相同;采用FCM检测发现,随着静置时间的延长,刺参体腔细胞的死亡率呈不断上升趋势,推测UVA照射会对刺参体腔细胞的免疫功能造成一定程度的损伤,其死亡率与吞噬率之间存在着一定的联系。通过检测刺参体腔细胞吞噬率的变化可以判断刺参的鲜活状态。     

盐度对刺参碳、氮收支影响的初步研究

在温度为(15.0±0.5)℃条件下研究了不同盐度(22.0、27.0、31.5、36.0)对刺参Apostichopusjaponicus生长和碳、氮收支的影响,建立了不同盐度下刺参的碳、氮收支方程。试验刺参体质量为(37.53±1.84)g,将刺参放于品字形循环水槽(40 cm×30 cm×30 cm,水体约为35 L)中饲养,试验共进行28d。结果表明:盐度为31.5的试验组刺参特定生长率(SGR)显著高于其他各组(P<0.05),达到了1.6%/d;不同盐度下刺参对碳、氮的摄食率分别为72.32～127.85 mg/(g.d)和6.59～11.65 mg/(g.d),盐度为31.5时刺参对碳、氮的摄食率最大,盐度升高或降低均导致刺参对碳、氮的摄食率降低;刺参摄食饲料中的碳后,通过粪便排出的碳达到了61.3%～74.4%,其次是呼吸消耗碳(21.7%～34.9%),用于生长的碳最少(3.8%～4.7%);刺参摄取的氮主要消耗在粪便中(56.6%～64.7%),其次是代谢消耗氮(27.0%～32.6%),用于生长的氮最少(7.4%～10.8%)。通过刺参的特定生长率和盐度对其碳、氮收支的影响可以看出,刺参生长的最适宜盐度为27.0～31.5,盐度的升高或降低均会导致刺参的生长减慢。     

不同海藻饲料对刺参幼参生长的影响

为了研究海藻饲料对刺参Apostichopus japonicus幼参生长效果的影响,在水温(18±1)℃下,将体质量(1.25±0.02)g的幼参饲养在容积为25 L的塑料水槽中,每槽6头,投喂采用孔石莼Ulva pertusa、角叉菜Chondrus ocellatus、裙带菜Undaria pinnatifida干粉及其混合干粉、鲜孔石莼、鲜角叉菜、鲜裙带菜及其混合磨碎液与25%海泥制成的8种饲料,共饲养60 d,试验结束时测定幼参的生长情况和水体中的氨氮含量。结果表明:投喂不同海藻饲料的幼参存活率均在80%以上,组间无显著性差异(P>0.05);投喂鲜孔石莼饲料的幼参体质量增长最快,特定生长率为(1.38±0.13)%/d,显著高于其他组(P<0.05);投喂鲜孔石莼饲料的幼参饲料转化率显著高于其他组(P<0.05),而其他组间无显著性差异(P>0.05),此组的摄食率和排粪率均为最高,且与其他组有显著性差异(P<0.05);鲜孔石莼组水体的平均氨氮含量最低,为(0.005±0.003)mg/L,孔石莼干粉组最高,为(0.021±0.016)mg/L,两者有显著性差异(P<0.05)。研究表明,投喂鲜孔石莼时幼参的生长效果最好,对水体的氨氮含量影响较小,在刺参幼参培育中添加鲜孔石莼效果较好。     

饥饿对仿刺参苗种生长及呼吸代谢的影响

在(14±1)℃条件下,研究了饥饿对体重为(2.5±0.25)g的仿刺参Apostichopus japonicus生长及呼吸代谢的影响。结果表明:以循环投喂和饥饿再投喂为激发机制的情况下,均未出现补偿生长现象,说明此规格的仿刺参不具有补偿生长能力;饥饿使仿刺参苗种的耗氧率先降低后升高,饥饿至第10天时降到最低,之后开始升高并最终稳定在较低水平;排氨率的变化趋势是先升高,后降低,在饥饿第15天时升至最高,这与体内营养物质的消耗有关。     

两种典型表面活化剂SDS和NP对刺参幼参的急性毒性效应研究

为评价典型表面活性剂对大型海洋底栖动物的风险,采用静水毒性试验法,以十二烷基硫酸钠(SDS)和壬基酚(NP)两种典型表面活化剂对刺参Apostichopus japonicus幼参(体质量为0.15 g±0.05 g)分别进行单一的急性毒性试验,SDS试验浓度设为0、5.00、6.47、8.38、10.81、14.00 mg/L,NP试验浓度设为0、500、594、708、841、1000μg/L。结果表明:SDS对幼参72、96 h的LC_(50)分别为10.927、9.834 mg/L,而NP对幼参72、96 h的LC_(50)分别为1.12、0.80 mg/L;两种表面活性剂对幼参的安全浓度(SC)则分别为0.983 mg/L(SDS)和0.08 mg/L(NP);SDS的毒性效应主要体现在刺激幼参排脏吐肠,而NP的毒性效应则主要体现在引起体壁严重化皮。研究表明,SDS和NP两种表面活性剂对刺参幼参均存在较高的毒性效应,本研究结果可为表面活性剂的生物毒性预测和养殖水质风险评估提供基础数据参考。     

海带和条斑紫菜凝集素提取液对刺参体壁主要免疫酶活性的影响

为探讨凝集素提取液对刺参Apostichopus japonicus免疫的影响,将刺参基础饲料中分别添加质量分数为0.64%、1.28%、2.56%的海带凝集素提取液,或质量分数为1.88%、3.76%、7.52%的条斑紫菜凝集素提取液,分别投喂6个试验组刺参(体质量为3.50 g"1.95 g),以基础饲料饲养组为对照,分别于投喂凝集素提取液后第4、8、12、17天时,检测各组刺参体壁中过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的活性。结果表明:投喂海带凝集素提取液后,各浓度组刺参CAT、LSZ活性在第8、12、17天时均有显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),0.64%组ACP活性在第8、17天时有显著提高(P<0.05);投喂条斑紫菜凝集素提取液后,各浓度组刺参CAT活性在第8、12、17天时有显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01),7.52%组LSZ活性在第8天时有显著提高(P<0.05),AKP活性在第4、17天时有极显著提高(P<0.01),ACP活性在第12天时7.52%组有极显著提高(P<0.01),第17天时各浓度组均有显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01)。研究表明,海带和条斑紫菜凝集素提取液均能提高剌参体壁中CAT、LSZ、AKP、ACP的活性,显著增强剌参非特异性免疫水平,将其作为刺参免疫增强剂具有广阔的应用前景。     

刺参与日本囊对虾的池塘混养效果研究

为探明刺参Apostichopus japonicus养殖池塘混养日本囊对虾Penaeus japonicus的适宜搭配比例,通过在刺参养殖池塘围隔中进行日本囊对虾生态混养试验,比较了不同密度搭配比例下刺参(10、15 ind./m²,湿体质量为6.05 g±3.15 g)与日本囊对虾(0、2、4、8 ind./m2,湿体质量为6.05 g±3.15 g)与日本囊对虾(0、2、4、8 ind./m²,湿体质量为0.89 g±0.36 g)的养殖效果。结果表明:经过4个多月的混养试验,刺参生长状况与混养日本囊对虾的密度大小无显著相关性,混养日本囊对虾对主养品种刺参的生长无显著性影响(P>0.05);日本囊对虾的生长主要受自身养殖密度的影响,其密度越小,存活率越高,生长速度越快;与刺参混养的两个2 ind./m2,湿体质量为0.89 g±0.36 g)的养殖效果。结果表明:经过4个多月的混养试验,刺参生长状况与混养日本囊对虾的密度大小无显著相关性,混养日本囊对虾对主养品种刺参的生长无显著性影响(P>0.05);日本囊对虾的生长主要受自身养殖密度的影响,其密度越小,存活率越高,生长速度越快;与刺参混养的两个2 ind./m²对虾密度组最终体质量(33.90、32.47 g),显著高于4 ind./m2对虾密度组最终体质量(33.90、32.47 g),显著高于4 ind./m²对虾密度组(25.48、25.16 g)和8 ind./m2对虾密度组(25.48、25.16 g)和8 ind./m²对虾密度组(20.29、21.63 g)(P<0.05)。研究表明,综合分析产量与经济效益时,刺参搭配混养4 ind./m2对虾密度组(20.29、21.63 g)(P<0.05)。研究表明,综合分析产量与经济效益时,刺参搭配混养4 ind./m²密度组的日本囊对虾经济效益最高,本研究结果可为参虾池塘生态混养模式的推广应用提供参考依据。     

复方中草药对仿刺参免疫力和抗病力的影响

将以黄芪、党参为主药并加入另外5味中草药所配伍的复方中草药粉碎制剂,以质量分数分别为0%(对照组)、0.5%、1.5%和2.5%的剂量添加于基础饲料中,连续投喂仿刺参Apostichopus japonicus37d,在试验开始后第1、2、3、4周采样,测定仿刺参的肠、触手、体壁、肌肉和体腔液中的抗菌活力及体腔细胞的吞噬活性;于试验开始后第4周,用仿刺参"化皮病"病原菌黄海希瓦氏菌Shewanella marisflavi以3.7×108个/mL的浓度在每头仿刺参背部注射0.1 mL的菌悬液,每天观察记录死亡个体症状,统计死亡率,计算相对保护率(共观察记录7 d)。结果显示:各组的抗菌活力均随着用药时间的延长、用药浓度的加大而升高,总体趋势表现为2.5%添加组>1.5%添加组>0.5%添加组>对照组;各用药组仿刺参的体腔细胞吞噬能力均随着用药时间的延长呈现先升高后降低的趋势,第2、3周达峰值,总体趋势表现为1.5%添加组>2.5%添加组>0.5%添加组>对照组;攻毒试验结果显示,对照组仿刺参3 d后全部死亡,第7天各用药组相对保护率依次为1.5%添加组>0.5%添加组>2.5%添加组,分别为30.0%、20.0%和10.0%。由此表明,该复方中草药可以显著提高仿刺参的免疫力和抗病力,以1.5%添加剂量组的效果最佳。     

黄、渤海春季刺参肠道及养殖池塘细菌菌群的多样性

以黄海和渤海春季刺参养殖池塘的沉积物、海水和刺参Apostichopus japonicus肠道内容物中的细菌基因组DNA为模板,以细菌16S r DNA通用引物进行PCR扩增,构建16S r DNA文库并进行测序分析。结果表明:黄海和渤海养殖刺参肠道内容物、池塘沉积物和海水中共存在变形菌Proteobacteria、蓝细菌门Cyanobacteria、放线菌门Actinobacteria、拟杆菌门Bacteroidetes和厚壁菌门Firmicutes 5个门类的细菌类群,其优势类群均为变形菌(变形菌比例>41%),且在文库所含变形菌的4个亚门(Alphaproteobacteria、Betaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Deltaproteobacteria)中,除黄海春季刺参养殖池塘海水文库(YSp3)中α-变形菌占优势外,其余5个文库均以γ-变形菌为优势亚门。     

刺参速生耐高温品系生长性能及高温期摄食性能分析

为分析定向选育刺参Apostichopus japonicus速生耐高温品系的生长性能和高温期摄食性能,对该品系刺参第四世代(G4)、第三世代(G3)及未经选育的普通刺参(对照)4—30月龄的生长指标进行连续和定期测定,并对26～30月龄刺参高温期排粪个体数量比例及粪便相对质量(RFM)进行测定和分析。结果表明:3组刺参体质量增长分化时间点出现在13～14月龄时期,G4、G3两组刺参的体质量峰值和终末值均显著高于对照组(P<0.05),G4组体质量峰值和终末值高于G3组,但无显著性差异(P>0.05);在2016年6—10月(14～18月龄)和2017年4—8月(24～28月龄)两个高温时期内,G4与G3两组刺参的增重率(WGR)均显著高于对照组(P<0.05),但G4与G3组无显著性差异(P>0.05);排粪个体数量比例和RFM均随水温升高显著降低(P<0.05),同温度下G4>G3>对照;排粪个体数量比例仅在水温上升期升至26.4℃和水温下降期降至23.8℃时差异显著(P<0.05);RFM在各取样水温下均呈显著性差异(P<0.05);当RFM取值为0.001～0.020,G4、G3组对应水温值比对照组高出0.30～2.48℃,RFM取值为0.010时,G4、G3组水温分别为26.39、26.09℃,对照组水温为23.91℃,表明水温因素限制选育品系刺参摄食活动的影响有所降低。研究表明,经累代定向选育的速生耐高温刺参品系比普通刺参生长增重更快,高温期摄食性能更具优势。