紫外线照射对刺参体腔细胞吞噬活性的影响

采用流式细胞仪(FCM)技术与激光共聚焦显微镜技术(LSCM)对紫外线(UVA)照射后的刺参(Stichopus japonicus)体腔细胞的吞噬活性进行了检测。通过对刺参体内、外荧光吞噬微球孵育体系的筛选和比较,确定采用体外孵育方法测定吞噬率。在体外吞噬中,以荧光微球与体腔细胞的体积比为1∶1 500测定刺参体腔细胞吞噬率。结果表明,刺参经UVA照射,静置不同时间(0~4h)后提取体腔细胞,采用FCM检测其吞噬率在静止1h后达到最大,随后下降,LSCM检测结果与之相同;采用FCM检测发现,随着静置时间的延长,刺参体腔细胞的死亡率呈不断上升趋势,推测UVA照射会对刺参体腔细胞的免疫功能造成一定程度的损伤,其死亡率与吞噬率之间存在着一定的联系。通过检测刺参体腔细胞吞噬率的变化可以判断刺参的鲜活状态。     

3种微生态制剂对幼刺参养殖水体水质的影响

对3种微生态制剂改善幼刺参养殖水体水质的效果进行了研究。试验设3个处理组,分别在水体中泼洒芽孢杆菌、海洋红酵母和EM菌;另设1个对照组,只投喂基础饵料。试验水体20L,试验期间不换水,每隔2d对pH、化学需氧量、氨氮及亚硝酸盐氮进行检测,氨氮超过0.15mg/L时结束试验。结果表明,在水体中泼洒3种微生态制剂均可改善水质,其中,EM菌和海洋红酵母具有降低化学需氧量的作用,EM菌和芽孢杆菌具有降解氨氮和亚硝酸盐氮的功能,EM菌改善水质的效果最好。     

响应面法优化仿刺参酶解工艺及其改善睡眠活性的研究

以水解度为主要指标,筛选了动物蛋白酶、海参水解酶、木瓜蛋白酶、水产蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和碱性蛋白酶对仿刺参的酶解效果,考察了酶解温度、加酶量、水解时间、p H等单因素条件对水解度的影响,在此基础上通过响应面分析获得仿刺参的最佳酶解工艺,并对最佳工艺条件下酶解液高、中、低剂量对小鼠改善睡眠的功能进行了研究。结果表明:水产蛋白酶对仿刺参蛋白的水解效果优于其他受试蛋白酶,且响应面结果显示其加酶量对水解度具有极显著影响(p<0.01);响应面法优化得到刺参酶解的最适条件为:p H7、温度49℃、加酶量8%(酶/底物百分比)、时间4h,其水解度达到28.0%;仿刺参酶解液高、中、低剂量组对小鼠没有明显的直接催眠作用,但中剂量组能显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率(p<0.05)。     

仿刺参相关微生物对致病灿烂弧菌的拮抗及机理研究

从健康的仿刺参体表以及肠道中分离得到37株细菌,以仿刺参"腐皮综合症"致病菌灿烂弧菌(Vibriosplendidus)为指示菌,采用十字交叉划线法和纸片法进行体外拮抗试验,两种方法筛选出对灿烂弧菌(Vibriosplendidus)有拮抗作用的菌株分别为20种和8种。选择对灿烂弧菌有较强拮抗作用的7种菌株进行拮抗机理研究。研究表明:7株菌均是通过营养物质和生存空间竞争及产生有抑菌活性的胞外产物两种方式协同抑菌。其中,编号为CG-6-1的Pseudoalteromonas sp.主要分泌蛋白类等和比较大的极性分子,其胞外产物经过硫酸铵沉淀,在80%饱和度时抑菌活性最高,因此推断其产生的抑菌物质是蛋白类物质。     

海地瓜和冰岛刺参海参岩藻聚糖硫酸酯抗肿瘤作用的比较研究

目的:采用离子交换层析法分别从海地瓜和冰岛刺参中,分离纯化两种海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC),通过建立小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,比较分析两种SC-FUC对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用。方法:采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成,采用离子色谱法测定其硫酸基含量。通过连续腹腔注射两种SC-FUC 21d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤质量和计数肺表面转移灶结节数。采用RT-PCR法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:海地瓜SC-FUC和冰岛刺参SC-FUC均由岩藻糖组成,硫酸基含量分别为26.3%和29.31%;两者均能显著抑制荷瘤小鼠原位肿瘤的生长,抑瘤率分别为19.24%和28.69%;显著减少肺表面转移灶结节数(P<0.01),转移抑制率分别为31.4%和57.1%;显著降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α和VEGF mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。冰岛刺参SC-FUC的效果要优于海地瓜SC-FUC。结论:两种SC-FUC均能显著抑制肿瘤的生长和转移,其作用机制与其高硫酸化程度有关。     

海参精华火腿的组织构造和流变学特性

研究了海参精华火腿的组织构造及其流变学特性,通过TPA和感官评定对其质地、营养及风味变化进行研究.采用HE染色法观察其组织构造的变化,通过应力松弛和破断试验测定其流变学特性参数.针对海参精华火腿质构特点与普通火腿作比较.结果表明:添加刺参酶解液的海参精华火腿的破断强度为360 gf,弹性模量为2.6×107dym/cm2,黏性模量为4.6×1 08 dyn·s/cm2.添加25 mL海参酶解液火腿样品的酸性粘多糖含量为O.06mg/g.与普通火腿相比,除硬度指标稍有下降外,黏弹性、感官、风味及组织构造均未显示出明显差异,但其营养功能水平有显著提高.海参精华火腿流变学特性参数与组织结构参数变化之间具有一定的关联性,TPA与感官测定结果呈较好的相关性.     

高效液相色谱法测定喹噁林类药物对刺参组织DNA的氧化损伤

为探索喹噁林类药物在刺参养殖中使用的安全性问题,采用高效液相色谱-紫外法对喹噁林类药物引起刺参组织DNA氧化损伤效应进行研究。采集经过不同添加剂量、不同时间喹噁林药物处理过的刺参组织,提取DNA,酶解后用高效液相色谱-紫外法对DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG）进行测定分析。结果表明：高效液相色谱-紫外检测法,操作简单,具有广泛的适用性、稳定性和准确性,灵敏度高,并且样品用量少,分析速度快。8-OHdG的含量随着乙酰甲喹质量浓度的增加和处理时间的延长而显著增加（P＜0.05）,存在质量浓度-反应、时间-反应关系,并且是一个持续性的过程。喹烯酮对DNA的氧化损伤也是随着添加剂量的增加而显著加重（P＜0.05）。说明乙酰甲喹和喹烯酮能引起刺参组织DNA的氧化损伤,对其遗传物质具有一定的遗传毒性,因此需要规范喹噁林类药物在刺参养殖中的使用。     

刺参体内铝的富集和消除规律研究

目的研究铝在刺参体内的富集和消除规律。方法选取体重为(50±10) g的刺参暴露于铝浓度分别为50、150、300μg/L的海水中进行富集实验,分别在第0、1、3、5、7、10、15、21、30 d取样检测分析。富集实验结束后,放入自然海水中开始消除实验,分别在第1、3、7、14、21、35、45 d取样检测分析。结果3个实验组刺参体壁中铝的蓄积量范围为10.0～18.2mg/kg、富集系数范围为53.2～160、最终消除率范围为67.0%～78.6%;纵肌中铝的蓄积量范围为32.2～60.0mg/kg、富集系数范围为189～582、最终消除率范围为84.7%～88.2%;呼吸树中铝的蓄积量范围为69.2～120mg/kg、富集系数范围为365～1143、最终消除率范围为77.9%～86.4%;消化道中铝的蓄积量范围为78.7～275mg/kg、富集系数范围为865～1275、最终消除率范围为74.8%～86.1%。结论刺参各组织铝蓄积量、富集系数随暴露时间的延长而增大,各组织对铝蓄积量和富集系数大小顺序均为消化道呼吸树纵肌体壁,消化道和呼吸树是刺参富集铝的主要器官。刺参纵肌、呼吸树和消化道对铝的蓄积量、富集系数均随暴露浓度的增大而增大,体壁对铝的蓄积量也随暴露浓度的增大而增大,但体壁对铝的富集系数随暴露浓度的增大而减小。消除实验期间,刺参体壁、纵肌、呼吸树和消化道中铝残留量随消除时间的延长而降低,呈现前期消除较快,后期逐渐平稳的趋势;消除实验结束,3个浓度组刺参中铝的最终残留量与对照组相差不大。     

刺参2 种天冬氨酸蛋白酶的酶学性质及其对自溶的影响

对刺参体内2?种天冬氨酸蛋白酶——组织蛋白酶D（cathepsin?D,Cat?D）和组织蛋白酶E（Cat?E）的酶学性质进行探讨,并考察两者可能在刺参自溶中的参与作用。先用Tris-HCl缓冲溶液提取刺参体壁中的粗酶,采用特异性荧光底物法测定Cat?D和Cat?E的酶学性质。结果表明,Cat?D和Cat?E的最适pH值分别为5.0和4.0,分别在60?℃和40?℃呈现最大酶活性,两者在20～40?℃活性均较为稳定。Zn2＋、Cu2＋、Fe2＋、Fe3＋、Mn2＋可抑制Cat?D的活性,抑制率分别为86%、76.3%、29.2%、56.5%和48.5%。Fe3＋、Fe2＋、Cu2＋可抑制Cat?E的活力,抑制率分别为99.1%、82.2%和28.6%。Pepstatin?A、Z-Leu-Leu-Leu-H、苯甲基磺酸氟、1,10-菲啰啉能够抑制两者活性,抑制率分别约为98%～99%、65%～78%、30%～35%、19%～23%。二硫苏糖醇、L-Cys和乙二胺四乙酸则可将两者活性分别提升30.4%～31.1%、7.58%～9.64%、6.6%～7.9%。结果表明,刺参Cat?D和Cat?E为2?种具有一定金属离子敏感性和依赖性的天冬氨酸蛋白酶,其活性中心有丝氨酸和半胱氨酸参与其活性调节,且两者很有可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。     

刺参酸性磷酸酯酶的分离纯化及部分性质研究

以刺参内脏为原料提取一种酸性磷酸酶(ACPase.EC.3.1.3.2),进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G.200柱纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一酶带.该酶紫外最大吸收峰波长为220nm和280nm,荧光发射波长在300nm处,激发峰为306.3nm和606.3nm,等电点为4.2,该酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)最适pH值为4.4,最适温度为45℃,酶促反应初速度为0.2591μmol/min,米氏常数Km值为0.816×10-4mol/L.重金属Hg2 、Ag 、Cd2 和pb2 对该酶有明显的抑制作用,其中Hg2 对该酶的抑制作用最强,抑制程度依次为:Hg2 >Ag2 >Pb2 >Cd2 .