底栖硅藻种类和密度对仿刺参幼体和稚参生长与成活的影响

在水温为22.0²6.0℃下,研究了不同密度的圆筛藻Coscinodiscus sp.、舟形藻Navicula sp.和双肋藻Amphipteura sp.及其等比例组合对仿刺参Apostichopus japonicus体长为40026.0℃下,研究了不同密度的圆筛藻Coscinodiscus sp.、舟形藻Navicula sp.和双肋藻Amphipteura sp.及其等比例组合对仿刺参Apostichopus japonicus体长为400⁵00μm的樽形幼体变态、附着及生长和成活的影响。结果表明:在单一硅藻组中,圆筛藻组幼体的附着率最高(13.3%±2.2%),显著高于舟形藻(6.9%±1.8%)和双肋藻组(5.9%±0.7%)(P<0.05);混合硅藻组的附着率均高于单一硅藻组,其中圆筛藻+舟形藻组幼体的附着率(23.2%±3.2%)显著高于对照组(18.0%±2.16%)(P<0.05)。混合藻类密度为1500μm的樽形幼体变态、附着及生长和成活的影响。结果表明:在单一硅藻组中,圆筛藻组幼体的附着率最高(13.3%±2.2%),显著高于舟形藻(6.9%±1.8%)和双肋藻组(5.9%±0.7%)(P<0.05);混合硅藻组的附着率均高于单一硅藻组,其中圆筛藻+舟形藻组幼体的附着率(23.2%±3.2%)显著高于对照组(18.0%±2.16%)(P<0.05)。混合藻类密度为1²5万个/cm2时,幼体的附着率(27.2%±4.28%)均显著高于对照组(P<0.05)。经过46 d的饲养,单一和混合藻类组幼参的最终体长(P<0.01)和成活率(P<0.05)均显著低于对照组。稚参变态附着后至体长为70025万个/cm2时,幼体的附着率(27.2%±4.28%)均显著高于对照组(P<0.05)。经过46 d的饲养,单一和混合藻类组幼参的最终体长(P<0.01)和成活率(P<0.05)均显著低于对照组。稚参变态附着后至体长为700⁸00μm的10 d内,以3种混合底栖硅藻为食物,之后以营养来源丰富的人工饵料为食,可明显提高仿刺参的生长速度和育苗成活率。     

3种微生态制剂对幼刺参养殖水体水质的影响

对3种微生态制剂改善幼刺参养殖水体水质的效果进行了研究。试验设3个处理组,分别在水体中泼洒芽孢杆菌、海洋红酵母和EM菌;另设1个对照组,只投喂基础饵料。试验水体20L,试验期间不换水,每隔2d对pH、化学需氧量、氨氮及亚硝酸盐氮进行检测,氨氮超过0.15mg/L时结束试验。结果表明,在水体中泼洒3种微生态制剂均可改善水质,其中,EM菌和海洋红酵母具有降低化学需氧量的作用,EM菌和芽孢杆菌具有降解氨氮和亚硝酸盐氮的功能,EM菌改善水质的效果最好。     

扇贝土和黄土在刺参幼参饲料中的应用研究

为探寻刺参Apostichopus japonicus饲料中品质优、资源广、价格廉的海泥替代物,用扇贝土和混合一定比例螺旋藻(1∶9)的黄土分别替代海泥,并搭配海带投喂平均体质量为0.35 g的刺参幼参,试验设海泥组、扇贝土组、黄土组,每组设3个重复,在室内水族玻璃缸中进行试验,每个缸中放80头幼参,饲养时间为56 d,养殖试验结束后,分别测定各组刺参的生长、消化和非特异性免疫指标。结果表明:扇贝土组和黄土组刺参的成活率、增重率、特定生长率、蛋白质效率等均高于海泥组,而饲料系数略低于海泥组,但均无显著性差异(P>0.05);黄土组脏壁比、比肠重显著低于扇贝土组和海泥组(P<0.05);扇贝土组刺参肠道中淀粉酶活力显著高于黄土组(P<0.05),但两组与海泥组均无显著性差异(P>0.05);扇贝土组刺参体腔液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力显著高于黄土组(P<0.05),且两组显著高于海泥组(P<0.05);扇贝土组和黄土组刺参体腔液过氧化物酶(POD)活力及总抗氧化能力(T-AOC)高于海泥组,但无显著性差异(P>0.05)。研究表明,扇贝土和混合螺旋藻的黄土均可作为新资源完全替代海泥饲料,且以扇贝土最优。     

饲料中添加混合益生菌对刺参幼参免疫反应和抗氧化性能的影响

为探讨混合益生菌对刺参Apostichopus japonicus幼参免疫反应和抗氧化性能的影响,用添加梅奇酵母C14(浓度为1×10~5cells/g饲料)、红酵母H26(浓度为1×10~5cells/g饲料)和芽孢杆菌BC26(浓度为1×10~7cells/g饲料)的混合益生菌饲料,投喂体质量为(0.54 g±0.06 g)的幼参,记为益生菌组,并设只投喂基础饲料的对照组,投喂4周和8周后,测定幼参免疫指标和抗氧化指标的变化。结果表明:饲养4周时,益生菌组幼参体腔细胞吞噬活力和呼吸爆发,体腔液(CF)和体腔细胞裂解液(CLS)溶菌酶、酚氧化酶活力均显著高于对照组(P<0.05);饲养8周时,益生菌组除CF和CLS酚氧化酶活力与对照组无显著性差异外(P>0.05),其他免疫指标仍显著高于对照组(P<0.05);饲养4周时,益生菌组幼参CF、肠道和体壁超氧化物歧化酶(SOD)活力,CF、CLS、肠道、呼吸树和体壁过氧化氢酶(CAT)活力,总抗氧化能力(TAOC),以及肠道和呼吸树谷胱甘肽(GSH)含量均显著高于对照组(P<0.05);饲养8周时,益生菌组幼参肠道、呼吸树和体壁SOD活力,所有组织CAT活力,CLS和肠道T-AOC,CF、肠道和呼吸树GSH含量均显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,饲料中补充混合益生菌可促进幼参免疫反应和影响其抗氧化性能。     

3株芽孢杆菌对刺参池塘有机物的降解效果及鉴定

为修复刺参Apostichopus japonicus养殖池塘底质环境,根据菌株对底泥中有机质(COD)、氨氮(NH_4~+-N)和亚硝酸盐(NO_2~--N)的去除率,从刺参养殖池塘底泥和商品益生菌中筛选高效降解刺参养殖池塘底质有机污染物的潜在益生芽孢杆菌,并对筛选出的优良菌株的产酶能力和降解特性进行了研究。结果表明:从分离的11株细菌中经过筛选最终获得3株优良菌株(N1、DL、R),它们能同时高效降解底泥中COD、NH_4~+-N和NO_2~--N,5 d内对COD的最大去除率分别为45.71%、23.98%、24.97%,对NH_4~+-N的最大去除率分别为60.54%、36.15%、36.74%,对NO_2~--N的最大去除率分别为52.10%、14.41%、28.82%;根据菌株生理生化特性以及16S r DNA序列分析,N1、DL、R菌株分别为白翎芽孢杆菌Bacillus baekryungensis、地衣芽孢杆菌B.licheniformis和解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens。本研究结果可为进一步开发高效的刺参养殖池塘底质有机污染物降解益生菌及复方制剂提供参考。     

仿刺参共附生真菌Aspergillus terreus来源的聚酮类化合物的研究

海参是海洋中重要的食物和药物资源,含有丰富的活性物质。海参共附生微生物非常丰富。为了从海参共附生微生物获得具有强生物活性的物质,对山东芝罘岛海域的仿刺参来源的共附生真菌Aspergillus terreus利用分子生物学手段进行了种属鉴定,并利用固体基进行培养,对其次级代谢产物进行了研究。通过薄层层析、柱层析、高效液相色谱对其化学成分进行了分离和纯化,综合核磁波谱、质谱对其进行结构鉴定。从该菌中获得dihydrogeodin(1)、Territrems A(2)、Territrems B(3)、2,4-二羟基苯乙酮(4)、questin(5)和emodin(6)六种物质。利用人口腔上皮癌细胞株(KB)和多药耐药性的细胞株(KBv200)对1,5和6进行了细胞毒活性测试。本研究首次对化合物1进行了完整的谱图解析,并首次发现海洋环境来源的微生物可以代谢化合物dihydrogeodin(1),以及具有强抑制乙酰胆碱酶活性Territrems(3),而这些物质是海参本体不能够产生的,为开发具有预防和治疗帕金森病相关的功能食品提供了新来源。     

仿刺参雌性生殖腺皂苷提取分离工艺优化及体外抗氧化活性研究

目的:优化超声辅助提取和高速逆流色谱(HSCCC)分离仿刺参雌性生殖腺皂苷工艺并探究其抗氧化活性。方法:以提取时间、乙醇体积分数、超声时间、料液比为考察因素,采用响应面试验优化皂苷提取工艺;针对高速逆流色谱分离工艺的关键参数溶剂体系配比、流动相体积流量、转速进行优化,并通过DPPH自由基、ABTS自由基清除试验评价粗提物及分离组分的抗氧化活性。结果:粗皂苷的最佳提取条件为提取时间7 d,乙醇体积分数83%,超声时间33 min,料液比1∶20 (g/mL),此条件下皂苷提取率为(0.66±0.02)%。在HSCCC溶剂体系配比为V_乙酸乙酯∶V_正丁醇∶V_甲醇∶V_水为2.0∶3.0∶0.2∶4.8,流动相体积流量为2 mL/min,转速为800 r/min的条件下分离粗皂苷提取物得到组分1和组分2。粗皂苷提取物、组分1和组分2的DPPH自由基清除率分别可达(36.23±0.55)%,(35.07±0.20)%和(38.40±0.14)%,ABTS自由基清除率分别可达为(17.55±0.42)%,(24.49±0.50)%和(33.65±0.34)%。结论:经工艺优化获得了较高的仿刺参雌性生殖腺粗皂苷得率及较好的分离效果,且相较于粗皂苷,经HSCCC分离后得到的组分2的抗氧化活性有所提高。     

仿刺参酶解提取物营养成分分析及其对小鼠免疫功能的影响

对仿刺参酶解提取物营养成分组成进行了测定和分析,并依照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中"增强免疫力功能检验方法",评价了其对小鼠免疫功能的影响。结果表明仿刺参酶解提取物水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、磷脂、多糖、皂苷含量分别为6.41%、70.51%、5.05%、6.83%、0.96%、8.56%、0.78%。仿刺参酶解提取物氨基酸总量为56.046 g/100 g,必需氨基酸占氨基酸总量的24.2%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的55.6%。刺参酶解提取物低、中、高(0.1 g/kg·bw、0.2 g/kg·bw、0.6 g/kg·bw)剂量组可明显提高Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力,与阴性对照组比较差异显著(p0.05);3剂量组可显著提高小鼠血清溶血素水平(p0.05);高剂量组能极显著提高小鼠抗体生成细胞数(p0.01);中、高剂量组能极显著提高小鼠NK细胞活性(p0.01)。仿刺参酶解提取物含有丰富的营养成分,并具有增强免疫力的功能。     

仿刺参相关微生物对致病灿烂弧菌的拮抗及机理研究

从健康的仿刺参体表以及肠道中分离得到37株细菌,以仿刺参"腐皮综合症"致病菌灿烂弧菌(Vibriosplendidus)为指示菌,采用十字交叉划线法和纸片法进行体外拮抗试验,两种方法筛选出对灿烂弧菌(Vibriosplendidus)有拮抗作用的菌株分别为20种和8种。选择对灿烂弧菌有较强拮抗作用的7种菌株进行拮抗机理研究。研究表明:7株菌均是通过营养物质和生存空间竞争及产生有抑菌活性的胞外产物两种方式协同抑菌。其中,编号为CG-6-1的Pseudoalteromonas sp.主要分泌蛋白类等和比较大的极性分子,其胞外产物经过硫酸铵沉淀,在80%饱和度时抑菌活性最高,因此推断其产生的抑菌物质是蛋白类物质。