Expression of green fluoscrescent protein gene in Sclerotinia sclerotiorum

Protoplasts of the pathogenic plant fungus,Sclerotinia sclerotiorum,were transformed using the pPGF plasmid,which contains green fluorescent protein gene,under the control of Aspergillus nidulans regulatory sequences. The pPGF plasmid was introduced by PEG/CaCl2 treatment. Positive transformants were harvested with hygromycin B (HYG) resistance as selective marker,and then were observed with green fluorescence phenomena in response to blue light,which suggested that GFP gene was cloned into genome DNA of S. sclerotiorum. The transformants were verified mitotically stable by Southern blotting analysis and passage culturing. This study is developed as an initial step for further research into infection mechanisms of S. sclerotiorum to plants and interactions with bio-control fungus.     

国外炭黑文摘

聚合物／MnO2／Fe2O3气敏阵列的开发；用于聚（二甲基硅氧烷）微流装置单细胞分析的改进紫外激光诱导自体荧光检测；用作超电容器电极的纳米结构中孔碳；用于提高直接甲醇燃料电池的碳载体改性。     

花生乳状液界面吸附蛋白提取工艺及其乳化性质的研究

研究水剂法提花生油形成的乳状液中界面吸附蛋白的提取工艺,并对其溶解性和乳化性进行了研究.结果表明:水洗后花生乳状液的最佳破乳工艺为Tween-20添加量1.5%、搅拌时间60 min、离心力20 500 g,此时乳状液破乳率达(75.21±0.15)%.采用酸沉方式回收界面吸附蛋白,得到蛋白质的纯度为(64.68±0.21)%.与花生分离蛋白、菜籽分离蛋白以及大豆分离蛋白相比,花生界面吸附蛋白的溶解性最差,但乳化性质最好,其降低界面张力的速度也最快.     

基于纳米材料的电化学生物传感器研究进展

该文主要从纳米尺寸材料电极的构建以及纳米材料作为生物分子指示剂两部分展开讨论,描述了依赖于阵列纳米管排列的生物分子与电极间的直接电子传递,纳米管、纳米颗粒为基质的纳米电极的构建,以及以金纳米颗粒、DNA量子点和蛋白为基础的多路分析技术与负载于CNT的新的纳米生物标记,特别讨论了纳米电化学方法在检测DNA和免疫传感器领域取得的研究进展.     

HClO对贻贝粘附单元DOPA氧化的理论研究

采用量子化学密度泛函理论(DFT)研究贻贝粘附单元DOPA(3,4-二羟基苯丙氨酸)的结构与性质,得分子的几何构型、原子电荷分布、反应活性及热力学等参数,表明:DOPA苯环易与HClO(次氯酸)发生亲电取代反应(1),生成3-氯4,5-二羟基苯丙氨酸,阻碍生成贻贝内超强粘附单元DOPA二联体,降低粘附蛋白间粘性;DOPA侧链易与HClO发生亲电亲核反应(2),促使DOPA侧链的断裂,降低粘附蛋白内粘性;在相同温度下,反应(1)和反应(2)的△G<0,且△G(1)<△G(2),反应(1)较易发生.     

幽门螺杆菌TNF-α诱导蛋白的生物信息学分析

肿瘤坏死因子诱导蛋白Tipα是幽门螺杆菌特有的一个膜相关蛋白.它可以激活核因子κB,并诱导多种细胞因子和趋化因子的表达,导致胃炎和随后的肿瘤发生.它是幽门螺杆菌和胃癌发生之间的关键分子.本文利用生物信息学工具分析Tipα序列,预测其信号肽、跨膜区、疏水性、二级结构、三级结构等性质.结果:Tipα具有一段信号肽、脂蛋白信号肽酶切位点及脂盒模体.另外该蛋白没有跨膜区,可能是一个外周膜蛋白.Tipα的三级结构说明,该蛋白形成了一个致密的球状结构,Tipα的二级结构以α螺旋为主.     

过敏原肌质钙结合蛋白在毕赤酵母中的表达、优化及免疫反应性研究

目的 探究天然肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein, SCP)的可替代物,为蟹类过敏原的检测提供基础材料,本研究首次利用毕赤酵母(Pichia pastoris, P. pastoris)高效表达表达三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)重要过敏原SCP,并检验其免疫反应性。方法 根据毕赤酵母的密码子偏好性优化SCP基因并构建重组质粒。将其热激转化至P. pastoris GS115菌株后经遗传霉素(Geneticin, G418)筛选获得阳性高拷贝子。最后通过甲醇诱导表达重组SCP并结合免疫印记(Western blotting, WB)和间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)验证其免疫反应性。结果 SCP在P. pastoris GS115中实现了可溶性高效表达,其表观分子量约为28 kDa。在摇瓶水平下,最佳诱导条件为pH为6.0、每24 h添加1.0%(v/v)甲醇,于28℃发酵144 h,在此条件下,纯度为91.6%的SCP产量可达15 mg/L。WB和间接ELISA结果表明,重组SCP具有IgG结合能力。结论 毕赤酵母表达系统可以得到纯度较高且免疫反应性良好的重组SCP。本研究为SCP的理化研究及产业化应用奠定了基础,并有望促进特异性甲壳类过敏原检测的发展。     

真菌疏水蛋白固定化酶制备胆碱生物传感器

以Ⅱ型疏水蛋白(HrBI)为胆碱氧化酶 ChOx)固定化基质修饰金电极构建新型电流型胆碱生物传感器.对疏水蛋白修饰电极的电化学特征进行分析,讨论了HFBI自组装膜在不同pH值下的稳定性.结果表明:该传感器对胆碱的线性响应范围为0.O1-1.0mmoVL;灵敏度为2184.06nA.mmol.L_1.cm_2cm;响应时间小于6s;检出限为0.O1mmol/L(信噪比=3).HFBI自组装薄膜修饰的酶电极高效地保持了固定化ChOx的活性,表现出良好的抗干扰性能和较长的使用寿命,有望为传感器进一步研究和其他表面功能化研究提供一种具有高度生物相容性的电活性生物固定化基质     

以序列特征值预测酶和非酶蛋白及内含肽

利用生物信息学快速准确鉴别酶、非酶蛋白及内含肽能极大提高实验效率,而测序数量的指数型增长使酶、非酶蛋白及内含肽的自动分类尤显重要。本文获取了同一性小于25%的序列共计3853条,采用Z标度的伪氨基酸组成和氨基酸组成分布提取序列特征值识别酶、非酶蛋白及内含肽。结果表明,该特征值提取方法经参数优化后,即当λ=5,w=0.15时,以支持向量机为分类器,其10倍交叉验证的精度可达81.3%,ROC曲线下面积为0.83;其精度高于其它方法0.5%到12.9%不等;独立样本测试的预测精度可达71.2%,ROC曲线下面积为0.782,其精度高于其它方法0.4%到6.4%不等,效果均优于其它常见的序列特征值方法。本文结果说明从序列出发判断其归属是可行的,3种不同功能的分子在序列特征上存在一定的差异,所建立的Z标度的伪氨基酸组成和氨基酸组成分布法可用于其它类似的生物信息学问题。建立了从序列出发预测酶、非酶蛋白及内含肽的新方法。     

竹红菌乙素对人红细胞膜蛋白荧光猝灭机理的研究

本文利用人红细胞膜蛋白内源荧光(主要指色氨酸),经加入不同的竹红菌乙素之后,引起了荧光猝灭现象,根据荧光猝灭原理分别从吸收光谱,荧光光谱,稳态变温实验和瞬态荧光等技术分析了上述的猝灭过程,实验证明:该猝灭是以动态碰撞过程为主要作用机理,据此作者提出了乙素可以用于生物膜体系的蛋白质荧光猝灭剂的理由。