桑蚕丝蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳研究——Ⅲ.绢丝蛋白的等电聚焦和双向电泳

本文用等电聚焦和双向电泳的方法,对桑蚕液状绢丝蛋白的组成成分进行了分析和研究。结果如下:丝胶的蛋白组成成分较中部丝素多而且分布宽,前者的等电点主要在pH为3.5～6,0的范围内;后者的等电点主要在pH5～7.0的区域内,是由一个分子量为2.8×10~5的大亚基和三个分子基为2.65×10~4(等电点为6.5、6.7和6.9)的小亚基为主要成分的多组分蛋白质;后部丝素在分子量和等电点分布方面均不同于中部丝素。     

氡染毒大鼠支气管肺泡灌洗液蛋白质的双向电泳分析

观察氡染毒后大鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)蛋白质表达谱的变化.雄性Wistar大鼠吸入氡的累积剂量达200工作水平月(Working level month,WLM)后,收集大鼠BALF,提取BALF细胞总蛋白,采用双向电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质的分析.ImageMaster 2D Platinum软件分析结果显示正常组和氡染毒组大鼠BALF细胞总蛋白双向电泳图谱上分别可见到645和554个蛋白点,共获得48个显著的蛋白质差异点,其中23个点在正常大鼠BALF中表达或表达明显增强,25个点在染毒大鼠BALF中表达或表达明显增强.结果提示,正常大鼠与氡染毒大鼠BALF细胞的蛋白质表达谱存在差异.     

蛋白质组和科学仪器现代化

基因组载有生物体的全部遗传信息 ,基因组的测序的完成是重要的里程碑之一。科学的进展已进入功能基因组时代。因为蛋白质是生物功能的行者 ,因此蛋白质组成为功能基因组的重要前沿。蛋白质组是指基因组表达的全部蛋白质。蛋白质组学是在细胞水平上研究各种蛋白质的性质 (比如表达水平 ,翻译后的修饰 ,蛋白质相互作用等 ) ,以便得到疾病过程 ,生理过程和生化过程中的整体的 ,整合的概况和在蛋白质水平上的调节网络。2 0 0 1年 4月在美国成立了ＨＵＰＯ(ＨｕｍａｎＰｒｏ ｔｅｏｍｉｃｓＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ) ,研究重点为人类疾病与健康…     

甘蔗叶片蛋白质组双向电泳技术优化

为了建立适合甘蔗叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对甘蔗叶蛋白质的溶解方法、IEF电泳、上样量等关键步骤进行了优化.结果表明:裂解液中有2 mmol/L的硫脲才能更充分地溶解蛋白;上样量1.0 mg时得到质量较好的凝胶图谱;甘蔗叶片蛋白质主要分布在pH4～7范围.通过对甘蔗叶片蛋白双向电泳技术的优化,提高了双向电泳图谱分辨率和蛋白点数,建立了一套适用于甘蔗叶片蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法,为甘蔗糖代谢相关的差异蛋白质组学研究提供参考.     

不同乙肝病毒携带者血清蛋白差异分析

目的对比转氨酶水平正常的乙肝病毒携带者（AsC）与乙肝患者的血清蛋白表达差异。方法各收集15例AsC（对照组）与乙肝患者（实验组）血清,利用双向电泳技术分离2组的血清蛋白,并对其血清蛋白样品的双向电泳图谱进行比较。结果 2组血清蛋白样品中共找到6个明显的差异点：其中实验组血清中表达量上调有4个点,表达量下调有1个点,新出现1个点。结论 AsC与乙肝患者的血清蛋白的双向电泳图谱有一些差异,这些差异点可能为乙肝患者的诊治提供新的靶点。     

两种电泳法分析丁香提取物对猪肌原纤维蛋白氧化位点的控制

研究猪肌原纤维蛋白（myofibrillar protein,MP）经胰蛋白酶水解后的肌球蛋白头部（S1）和尾部（Rod）受羟自由基的氧化程度以及丁香提取物对蛋白氧化位点的影响。选择未氧化的MP、氧化的MP及与丁香提取物结合后氧化的MP进行一维电泳、双向电泳实验和质谱鉴定。一维电泳结果表明,丁香提取物对S1部位的保护作用更加明显,Rod和S1分解生成的小片段主要是通过二硫键与肌动蛋白发生了交联。双向电泳和质谱鉴定结果证实了氧化后增加的蛋白,主要是肌球蛋白或肌动蛋白等MP中主要蛋白的亚基或碎片;丁香提取物的添加能够有效地控制这些碎片的产生,从分子水平上证实了丁香提取物抑制蛋白氧化的效果。肽段质谱鉴定结果显示,羟自由基诱发的MP氧化主要修饰的氨基酸部位为甲硫氨酸和半胱氨酸。本研究表明在肉制品加工与贮藏中添加丁香提取物可以改善肉制品的功能特性。     

双向电泳技术及其在乳酸菌研究中的应用

双向电泳技术是蛋白质组学研究中最流行的一种技术,是大规模筛选蛋白质差异表达的最佳方法。该技术主要通过等电聚焦和SDS-PAGE相结合的方法,通过等电点和分子量大小对蛋白质进行分离。因其具有方便、快速及良好的重复率和分辨率,是蛋白质组学研究中最广泛应用的技术。本文就其技术产生、原理、影响因素及其在乳酸菌研究中的应用做一综述。     

复用血液透析器（人工肾）膜表面粘附蛋白的实验研究

以Fresenius F6聚砜膜复用透析器为研究对象,对其膜表面粘附的蛋白进行定量分析研究.用4种不同的化学清洗剂及超声波的方法,对膜表面粘附的蛋白进行清洗,以获得最佳清洗方法;对透析器不同部位膜上的蛋白进行测定,获得不同部位膜上蛋白含量的差异性;用双向电泳的方法检测膜上粘附的蛋白含量及其性质,获得不同种类蛋白与聚砜膜结合的特异性关系.结果显示:使用5次后每克纤维膜表面粘附的蛋白量至少为0.1 mg,且在透析器各部位分布不同;超声波是一种用来清洗膜上残留物质的有效方法;膜表面粘附的蛋白主要是中性或偏酸性的蛋白,中、大分子量的蛋白容易造成膜孔堵塞且不易去除,而小分子量的蛋白较易去除.     

茭白总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为建立茭白总蛋白质双向电泳技术体系,研究了TCA/丙酮沉淀法和改良酚抽法两种不同总蛋白质提取方法、蛋白质上样量、pH值范围及凝胶质量浓度等条件对2-DE的影响。结果表明,改良酚抽法更适合茭白总蛋白质的提取,采用17 cm、pH 4~7的胶条、1.0 mg的蛋白质上样量、12 g/dL的凝胶浓度、考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,最终可获得蛋白质点较多,背景清晰,分辨率较高的2-DE图谱,为进一步开展茭白差异蛋白质组学研究奠定了基础。     

蕨菜总蛋白质双向电泳技术体系的建立

为了建立蕨菜中总蛋白质的双向电泳技术体系,作者以新鲜蕨菜为实验材料,分别比较了不同蛋白提取方法,不同上样量以及不同pH范围IPG胶条对2-DE图谱的影响。结果表明,采用TCA-丙酮结合酚抽法提取蕨菜中的蛋白质,采用IPG胶条pH5-8、蛋白质的上样量为1 200μg、考马斯亮蓝G-250胶体考染法进行染色。在此条件下进行蕨菜全蛋白质的双向电泳所得到的图谱蛋白质点多达719个,且蛋白质点分布均匀、背景清晰、分辨率较高。