强电场辐射丰优191水稻种子的农艺性状及幼苗蛋白质的研究

经强电场辐射的丰优191水稻种子,与产量相关的性状参数：穗粒数、穗实粒数、穗长、百粒重均有小幅度增加,试验组T1增幅最大。平均穗粒数为155,增加了49,为未经辐射的CK组146％;平均穗实粒数增加44,为CK组162％;而穗长也比辐射前增加2．2cm;从百粒重看,试验组T3较明显,比CK组增8．24％;而试验组T1只0．88％;穗实粒率除试验组T1迭74％外,其他试验组皆与CK组都在66％;提取试验组和CK组水稻幼苗蛋白．利用蛋白质组技术、双向电泳（two-dimensionalelectrophoresis,2-DE）技术寻找蛋白组的异同;经肽质量指纹图谱鉴定发现,强电场对水稻幼苗的影响主要是改变了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶（RuBisco）的大亚基、其A链及它们前体的含量,为研究强电场诱变的机理提供了实验依据。     

蛋白质组学及其技术进展

蛋白质组学是系统生物学重要基础和组成部分之一，近年来其研究技术进展迅猛。本文分析了蛋白质组学研究的必要性、长期性、复杂性和挑战性，重点综述了蛋白质组学一些研究技术及其在近年的进展。     

免疫电泳和双向电泳技术的发展和应用

1937年电泳技术的鼻祖Tiselius教授建立了最早期的移界电泳用于蛋白质分离与鉴定,开创了现代电泳技术的新纪元.随着各种电泳新技术的发展,电泳和其他技术的结合,以及各种先进的电泳仪的不断出现,使得许多与蛋白质结构和功能有关的研究得以飞速发展.本文主要就近年来备受关注的免疫电泳和双向电泳技术的发展和应用做一评述.     

利用双向电泳-质谱技术鉴定牦牛和犏牛睾丸中的差异表达蛋白质

比较了牦牛和犏牛睾丸组织中蛋白质的表达差异;应用双向电泳-质谱技术,对牦牛和犏牛的睾丸组织中差异蛋白质进行分离和鉴定;对获得的22个差异表达点进行质谱鉴定和数据库搜索,获得了19个蛋白质,其中有3种分子伴侣可能与犏牛雄性不育有关;研究结果表明,牦牛和犏牛睾丸组织中存在差异表达蛋白,并可利用双向凝胶电泳进行分离,为进一步分析犏牛雄性不育的原因提供了线索.     

双向电泳技术在昆虫研究中的应用

随着生命科学进入后基因组学研究时代,蛋白质组学成为其研究热点.双向电泳技术(Two-dimensional electro-phoresis,2-DE)凭借其高灵敏度,高分辨率以及能将数千种蛋白质同时分离等优点,成为蛋白质组学的核心技术之一,在生命科学研究中发挥着不可替代的作用.近年来,随着黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、家蚕(Bombyx mori)、意大利蜜蜂(Apis mellifera)和冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)等昆虫基因组测序的基本完成,昆虫的蛋白质组学研究也迅速展开.本文就双向电泳技术在昆虫遗传学、发育生物学、亚细胞器、免疫学、毒理学、行为学以及媒介学上的研究进展进行了综述.总结前人的研究结果认为,昆虫突变、发育、抗性、行为等变化与蛋白的差异表达或蛋白亚型的变化密切相关,并鉴定了相关的蛋白质.这一研究为全面阐明昆虫的生长发育、生理生化等特性具有重要意义,也对转录水平的研究提供了很好的补充.如何提高双向电泳技术的准确性和重复性,使其在昆虫学上的研究更广泛、更深入是未来研究的重点.     

阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白质双向电泳技术和图谱的建立

建立阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白双向电泳技术。采用2种不同的尿素-3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸(CHAPS)-二硫苏糖醇(DTT)裂解法兼反复冻融提取阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544全菌蛋白,在2种pH范围的固相pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳,胶体考染后获得的双向电泳图谱进行Image Master 2DPlatinum软件分析。结果表明,获得全菌的蛋白浓度为5.32μg/μL;裂解液成分:尿素7 mol/L,硫脲2 mol/L,CHAPS 4%(m/V),DTT 1%(m/V),PMSF 45mg/L,pH 3～10IPG缓冲液2%(V/V)。该技术成功构建了阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白质双向电泳图谱。     

大麦和麦芽水溶性蛋白提取方案的优化及双向电泳图谱的建立

为了建立一套适用于大麦和麦芽的双向电泳分析方法,得到更加清晰、全面的双向电泳图谱。以高产优质大麦品种Gairdner为材料,对提取方法以及提取过程中所用的试剂的种类、用量和处理时间等进行比较分析和优化,运用蛋白定量法测定提取样品的蛋白质含量,摸索出一套完整的用于双向电泳分析的大麦蛋白提取和样品制备方法。大麦或麦芽经研磨,缓冲液-苯酚提取,醇洗,冻干后得到的蛋白质样品,双向电泳分离,硝酸银染色,PDQuest分析,图谱结果显示大麦检测到700个蛋白质点,麦芽检测到500个蛋白质点。这一方法的构建可作为大麦蛋白质组研究的重要工具,为今后大麦蛋白质组学以及对大麦品质改良的研究奠定了一定的基础。     

基于双向电泳和质谱联用技术的水牛乳源酪蛋白的研究

利用双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-MS)联用技术对水牛乳酪蛋白与其他乳源蛋白差异性进行了研究。根据Image Master 2D Platinum图像分析软件对不同乳源酪蛋白的双向电泳(2-DE)图谱进行蛋白斑点的匹配分析,获得21个存在于水牛奶中,主要分布在低丰度蛋白区的差异蛋白点,经质谱分析,得到4个属于水牛奶酪蛋白的主要组分,另外发现两个与水牛奶中的蛋白有较高同源性的新组分。     

液相等电聚焦电泳纯化燕窝蛋白质

以市售燕窝为材料,采用MicroRotofor系统进行液相等电聚焦电泳(liquid-phase isoelectric focusing,LIEF)纯化燕窝蛋白质,等电聚焦电泳后对收集到10个小室的样品进行SDS凝胶电泳分析。结果显示,燕窝蛋白质提取液中的一些胶状物聚集在聚焦槽酸端第1～4样品室,第9、10样品室杂质也较多,合并第5～8样品室的样品,即得纯化后的燕窝蛋白用于后续双向电泳分析。液相等电聚焦电泳预分离纯化技术结合双向电泳技术,对4个燕窝蛋白质进行较好的分离,在2-DE胶上检测到约30～60个蛋白质点。由此可见,液相等电聚焦电泳预分离技术是燕窝蛋白质进行2-DE分离前的重要纯化手段。     

西施舌肠蛋白质双向电泳图谱的建立

以西施舌的肠组织为研究对象,经破碎、裂解、离心等抽提方法提取肠组织蛋白样品,利用Bradford蛋白定量试剂盒作蛋白定量后,进行一向等电聚焦电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后的凝胶用考马斯亮蓝染色,利用ImageScannerⅢ扫描仪扫描凝胶,获得凝胶图像。首次得到西施舌肠蛋白质双向电泳图谱,构建了西施舌肠蛋白质组的双向电泳技术体系。图谱分析显示,所获得的肠蛋白质等电点介于pH4～7,大部分蛋白为酸性蛋白,高分子质量及高等电点蛋白含量相对较少。