翡翠贻贝提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用

本文研究探讨了翡翠贻贝提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用。建立四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型,测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量及肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)含量;采用双向电泳分析肝脏差异表达蛋白;病理切片观察小鼠肝组织病理损伤的情况。结果表明,与模型组相比较,翡翠贻贝提取物各剂量组小鼠ALT、AST水平和MDA含量均显著降低,SOD、CAT、GSH-Px和GSH含量显著提高,TNF-α和IL-6水平也显著降低(p0.01)。通过双向电泳获得了蛋白质显著差异点97个,鉴定出在模型组中有4个蛋白高表达,1个蛋白低表达;在翡翠贻贝提取物组中3个蛋白高表达。病理镜检显示小鼠肝脏损伤程度有所减轻。从以上实验结果可推测,翡翠贻贝提取物对CCl4引起的小鼠急性化学性肝损伤具有明显的保护作用。     

云南盐津乌骨鸡与武定鸡肌肉蛋白质组学差异研究

选取云南两种具有代表性的地方优质鸡种盐津乌骨鸡和武定鸡为研究对象,采用双向电泳(2DE)分析其腿肌与胸肌中蛋白表达差异,并以基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定腿肌与胸肌中差异蛋白质点。结果表明,经双向电泳图谱分析所获得的肌肉组织蛋白点分布于pH4.0~7.0之间,其中盐津乌骨鸡腿肌、胸肌中分别检测到(1421±34)、(1329±25)个蛋白点;武定鸡腿肌、胸肌中检测到(1585±19)、(1516±28)个蛋白质点。对比分析盐津乌骨鸡与武定鸡的DE图谱,发现有178个点存在明显的表达差异,在盐津乌骨鸡中高表达的点有72个,在武定鸡中高表达的点有106个。选取的蛋白质点经鉴定主要为核纤层蛋白A、磷酸葡萄糖变位酶1、β-烯醇酶、原肌球蛋白1、三磷酸腺苷合成酶、C-反应蛋白前体、B链α-晶状体蛋白、肌酸激酶M型、乙二醛酶1、磷酸甘油酸激酶 PGK1、慢骨肌肌钙蛋白T、蛋白酶体非ATP酶调节亚单位14、热休克蛋白β-1超氧化物歧化酶、以及一些假设蛋白和非特征性蛋白。     

河豚鱼骨骼肌蛋白组分析

为了建立一套对河豚骨骼肌总蛋白进行蛋白组分析的技术体系,采用高分辨率的双向电泳技术对河豚骨骼肌总蛋白进行分离,银染后用IMAGEMASTERTM 软件分析2D 凝胶图谱,共检测出112 种以上的蛋白。利用基质辅助质量飞行时间质谱(MALDI TOF MS)对分离较好的33 个蛋白点进行肽质量指纹图谱分析,并用MASCOT 在线软件通过检索NCBI nr,MSDB 及UniProtKB/TrEMBL 等数据库,鉴定其中的21 个蛋白点,包括原肌球蛋白等结构蛋白以及各种与代谢相关的酶、与信号传导和细胞凋亡相关的蛋白等。该体系为动态监测河豚鱼骨骼肌在不同水环境及饲料的不当添加等情况下蛋白表达谱的变化提供了新的方法。     

华根霉蛋白质组双向电泳体系的建立及优化

华根霉(Rhizopus chinensis CCTCC M201021)是从我国传统微生物载体——大曲中分离筛选得到的一株丝状真菌,具有重要的工业应用前景。为建立一种适于华根霉胞内蛋白质的双电泳体系以进行蛋白质组学研究,作者对华根霉胞内蛋白质的提取方法及双向电泳流程相关参数进行了考察和优化.确定采用液氮研磨与高速珠磨相结合的方法对华根霉进行细胞破碎,用TCA/丙酮对提取的蛋白质进行纯化,采用被动水化的上样方式上样,24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条,上样量为1 200 μg蛋白质,考马斯亮蓝G-250股体染色法,最终得到了背景清晰、分辨率高的双向电泳图谱。     

不同烟草青枯病抗性品种的蛋白质组学比较

为探讨烟草品种对青枯菌的抗病性及抗性机理,应用蛋白质双向电泳联用质谱技术,对青枯病抗病品种DB101 和易感品种红花大金元叶片的蛋白质组成进行了比较分析。结果表明,26 个蛋白质在2 个不同抗性品种中发生了差异变化, 其中在DB101 表达量上升的有12 个,在红花大金元表达量上升的有14 个。用MALDI-TOF/OF MS 分析和数据库检索共鉴定出其中的22 个蛋白质。根据这22 个鉴定出来的蛋白质所参与的代谢途径和生化功能将它们分为6 类,即光合作用、代谢和能量、过氧化物平衡、表达调控、防卫相关蛋白和推测蛋白。研究表明,烟草对青枯病病原菌的侵染存在一个复杂的抗病信号应答和代谢调控网络。在这22 个鉴定出的蛋白中,有2 个在抗病品种DB101 中显著上调的蛋白谷氨酸-1-半醛2,1-氨基变位酶和二氨基庚二酸脱羧酶在以往的研究中还未见报道,可能与烟草对青枯病的抗病性密切相关。本研究为进一步揭示烟草对青枯病的抗性机理及相关抗病基因的功能克隆提供了依据。     

牦牛背最长肌蛋白质双向电泳条件的建立

为建立高原牦牛背最长肌蛋白质双向电泳的最佳条件,以牦牛背最长肌为研究对象,比较了超高速离心法、三氯乙酸-丙酮法、Tris-酚法及双裂解法4 种方法对总蛋白质的提取效果。凝胶采用快速银染法染色,经双向电泳,用ImageMaster 2D Platinum软件分析蛋白点,并通过质谱对分离的蛋白点进行鉴定。结果表明：超高速离心法提取的样品蛋白质量浓度最高,杂质最少,蛋白点分离程度最好,蛋白点拖尾及产生纵横条纹的现象不明显,获得531 个蛋白点,数量最多。该方法比其他3 种方法更简单快捷,耗时最短,仅需2.5 h,而另3 种方法至少需4～6 h甚至过夜反应。随机选取的6 个蛋白点鉴定为5 种蛋白,分别为肌球蛋白调节轻链2（1、2号点为同一蛋白）、脂肪酸结合蛋白、苹果酸脱氢酶、葡萄糖磷酸变位酶1、过氧化物氧还酶-1。本实验成功建立了牦牛肉双向电泳分析方法。     

不同种植方式下烤烟根系差异表达蛋白质分析

通过根系差异蛋白质组学探讨了种植方式（复种连作、复种轮作）对烤烟生长的影响。结果表明,共有15个蛋白质表达丰度发生变化,用LC-MS/MS鉴定了14个差异蛋白质点,经生物信息学分析,11个蛋白质的功能有注释,其中3个属于与香气形成有关的蛋白质,包括转酮醇酶、单脱氢抗坏血还原酶和O-甲基转移酶,它们在复种轮作条件下均上调表达,此可能有助于烟叶品质提高,而复种连作处理下调表达,可能不利于品质提高。还鉴定到涉及能量、抗性、物质运输、核酸等功能的蛋白：磷酸甘油酸酯激酶、线粒体内膜移位酶亚基Tim13、NBS-LRR、DnaJ、细胞内囊泡运输蛋白Sly1、核糖体蛋白质,在复种轮作下也上调表达,此可能促进烤烟的生长,有利于提高烟草产量和品质且经济效益较好。而在复种连作处理下调表达,进而可能使得烟草生长变弱、产量降低、品质变差。     

蛋白质组学技术及其在工业微生物研究中的应用

随着后基因组时代的到来,蛋白质组学的研究受到越来越多的关注,双向凝胶电泳和生物质谱技术是蛋白质组学研究的两大工具.微生物被广泛应用于食品、化工、医药等领域,随着这些领域的快速发展,利用蛋白质组学技术解析微生物代谢途径及调控机制越来越受到重视,从而为进一步的菌种改良提供理论依据.主要综述了蛋白质组学相关技术及其在工业微生物代谢途径与调控机制研究中的应用进展.     

鲢鱼重组Cystatin及其酶解产物对草鱼冷藏肉片优势腐败菌的抑制作用

首先通过三羟甲基甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和滤纸片法分别鉴定木瓜蛋白酶液(Papain)对鲢鱼重组半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)酶解程度及酶解产物对草鱼冷藏肉片中分离的3种优势腐败菌,即草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)、腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)和中间气单胞菌(Aeromonas media)的抑菌活性。结果表明,酶解6 h后的产物,即9.5 ku以下的片段对3种菌的抑菌效果均最好。再利用凝胶过滤高效液相色谱(TSK-GEL G2000SWXLHPLC)和双向电泳对6 h酶解产物进行分离纯化分析。发现仅峰T-2对3种菌均具有明显的抑制活性,峰T-2在TSK-GEL G2000SWXLHPLC上呈现单一峰,电泳得到单一蛋白点,其分子质量为8.6 ku,p I值为6.5。最后通过RPLC-MS/MS串联质谱鉴定该蛋白点,得到3个肽片段(31QSNDAFVR38、46VQQQVAAGMKY56和81NPSIEQVIQ89)且含有Cystatin特征序列QVAAG。结果提示,Cystatin蛋白(完整序列分子质量12~14 ku)内部,存在能够发挥抑菌作用的肽片段。     

高白鲑肌肉蛋白质组双向电泳技术体系的优化

为建立高白鲑肌肉蛋白质双向电泳分析方法,通过固相p H梯度胶条等电聚焦和SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,分别考察了蛋白质样品制备方法、上样量、IPG胶条p H值、等电聚焦程序、助凝剂剂量、SDS-PAGE凝胶浓度及染色方法等影响的因素。结果显示,采用丙酮沉淀法制备蛋白质样品,上样量90μg,IPG胶条pH值5～8,一向胶聚焦时间400 V 16 h+1 000 V 2 h,平衡时间15 min,0.05 m L过硫酸铵及2μL TEMED,10%(体积分数)二向分离胶和硝酸银染色时,获得蛋白质分离效果好,分辨率高及横纹少的高白鲑肌肉蛋白质二维电泳图谱,为高白鲑肌肉蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。