利用血红蛋白基因提高短小芽孢杆菌在低氧条件下的碱性蛋白酶产量

将透明颤菌血红蛋白基因vgb成熟肽编码区序列分别与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)P43双启动子和短小芽孢杆菌(B. pumilus)碱性蛋白酶基因启动子wBp连接,利用大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4分别构建组成型表达质粒pSUP43Vgb和pSUwBpVgb,将其分别转化短小芽孢杆菌UN-31-C-11.SDS-PAGE和CO差异光谱检测表明,融合基因在UN-31-C-11中均得到了表达,并且表达质粒使重组菌株在低氧条件下的生长量在对数生长后期超过对照菌株20%以上,同时促进了短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的表达,其产量高于对照30%以上.     

高表达重组人粒细胞集落刺激因子cDNA的中国仓鼠卵巢细胞株的建立

用质粒ｐＥＦ－ＢＯＳ的增强子、肽链延长因子基因的启动子及其第一内含子替换质粒ｐＥＤ－ＧＣＳＦ的增强子，腺病毒主要晚期启动子及杂合内含子。构建成了更高表达质粒ｐＥＦ－ＧＣＳＦ，转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞，加入并逐渐升高氨甲喋呤的浓度。结果显示：一定范围内，随着ＭＴＸ浓度增高，重组人粒细胞集落刺激因子表达量随之提高；筛选并建立了一株稳定高表达ｒｈＧ－ＣＳＦ ｃＤＮＡ的细胞株，其表达量为５．０￣５．６μ     

毕赤酵母强启动子PCAT1的改造及转录因子结合位点分析

本研究通过随机突变对毕赤酵母甲醇诱导型强启动子PCAT1进行改造,以绿色荧光蛋白为表征,经过高通量筛选,获得一个活性范围为25.57%~138.12%的PCAT1启动子库;通过测序发现活性提高了38.12%的PCAT1变体6-39在5’-3’方向上的-118bp处的碱基由A突变为了G。用转录因子结合位点在线预测软件Mat Inspector分析该PCAT1变体的转录因子结合位点变化,发现该PCAT1变体与野生型的PCAT1相比,F$YMCM结合位点减少,并且F$CSRE和F$YGAL结合位点增多。接着,用Mat Inspector分析16种毕赤酵母甲醇利用途径基因启动子的转录因子结合位点,发现转录因子F$CSRE结合位点在甲醇诱导型启动子中分布广泛,F$YGAL结合位点仅在组成型的启动子中分布广泛,推测F$CSRE结合位点的增多最有可能提高PCAT1的甲醇诱导活性,为毕赤酵母甲醇利用途径基因启动子关键位点解析提供参考。     

带自身启动子的6gαB基因在枯草芽孢杆菌中的表达

将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的启动子连同β半乳糖苷酶bgαB基因经PCR扩增后，连接在T载体上，再取代枯草杆菌载体pZ01-bgaB的启动子，将其在枯草杆菌宿主WB600中表达．经摇瓶发酵20h，得到乳糖酶活力6．37U／mL，比活力3．814U／mg，SDS—PAGE电泳显示有明显重组蛋白质条带．证明了嗜热脂肪芽孢杆菌来源的启动子在枯草杆菌中是完全适用的．     

不依赖IPTG诱导产木糖醇大肠杆菌工程菌的构建

该研究采用分子生物学技术构建不依赖异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导产木糖醇的大肠杆菌（Escherichia coli）工程菌,并研究启动子、质粒拷贝数、诱导剂IPTG的添加、基因xylA和xylB的敲除以及木糖含量对工程菌发酵产木糖醇的影响。结果表明,当转速为200 r/min时,E. coli AI07/pWYZ-1（启动子为lacP）的木糖醇产量是E. coli AI07/pAGI02（启动子为pflB-p6）的1.8倍;E. coli AI07/pWYZ-2（中拷贝质粒pBR322）的木糖醇产量高于E. coli AI07/pWYZ-1（高拷贝质粒pUC19）,分别为19.56 g/L、7.90 g/L;是否添加诱导剂IPTG对E. coli AI07/pWYZ-2产木糖醇影响不大,且在发酵96 h时,木糖醇产量极显著高于E. coli AI05/pWYZ-2（P＜0.01）,其在不添加IPTG的条件下,当木糖初始质量浓度为80 g/L,发酵时间为108 h时,木糖醇产量达48.7 g/L。     

Aspergillus niger F-01和Aspergillus niger G-1125生淀粉酶糖化酶基因启动子的克隆与比较分析

从生淀粉低产菌Aspergillus niger F-01和高产菌Aspergillus niger G-1125中克隆到生淀粉糖化酶的启动序列,这两个菌种生淀粉糖化酶基因启动子序列长分别是651bp和613bp,两个启动子都含有真核生物启动子的典型序列CCAAT和TATAAAT,通过序列比对发现,这两个启动子的同源性为84.4%。     

菜热休克蛋白基因HSP81.1启动子的克隆与功能验证

本研究从甘蓝型油菜（Brassica napus）基因组中扩增获得热休克蛋白基因启动子,并将其克隆至双元载体pBI121的GUS报告基因上游,构成双元表达载体pBI121 HSP GUS。通过农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法转化烟草后获得转基因植株。对T1转基因植株研究表明,外源基因在42℃处理1h后开始表达,且即使用同样条件诱导,GUS基因的表达率和表达量在不同生长时期也有差异。在第50d左右的苗期,GUS基因的表达率和表达量高,但随植株老化而逐渐下降。研究显示,利用油菜的热休克蛋白启动子可以达到通过温度控制烟草基因表达的目的。     

新型结肠癌个性化治疗重组溶瘤腺病毒Ad—CEA-ZD55-ST13的构建

一种新型的重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13被成功构建.该病毒利用CEA(carcinoembryonic antigen)启动子和ST13基因特异性增强ZD55系统的肿瘤靶向性.实验表明,重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13能在结肠癌细胞株SW620中增殖;Ad-CEA-ZD55-ST13增加ST13基因在HCT116细胞中的表达量;Ad-CEA-ZD55-ST13比对照病毒Ad-CEA-ZD55-EGFP对HCT116的杀伤作用强.     

三种启动子shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸 (small interfering RNA siRNA)，设计采用特异性延伸引
物和上游、下游两条通用引物，通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6
+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子 小发夹状RNA（shRNA）表达框.用该方法制备的增
强型绿色荧光蛋白（EGFP）特异性三种启动子 shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因
表达，其中以tRNAVal shRNA表达框抑制效果最显著，且未检测到干扰素应答基因2'5'OAS mRNA的表达，
表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应，进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最
适搭配启动子.     

Survivin启动子介导的溶瘤腺病毒载体抗肿瘤研究

肿瘤特异性启动子用于调控溶瘤腺病毒载体靶向于肿瘤细胞,从而实现对肿瘤组织的特异性杀伤,肿瘤特异性启动子的应用已成为靶向基因病毒治疗中的一个重要策略.利用肿瘤靶向人源Survivin 启动子构建的重组腺病毒Ad.SP-E1A展开对多种肿瘤细胞和正常细胞杀伤实验研究,结果发现:Ad.SP-E1A具有较高的肿瘤靶向杀伤能力以及对正常细胞无毒副作用,为基因病毒治疗平台中选择高效安全的腺病毒载体提供参考.