酵母蛋白中4种嘌呤含量的测定及对比分析

为分析酵母蛋白中嘌呤含量,建立同时测定酵母蛋白中4种嘌呤（黄嘌呤、次黄嘌呤、鸟嘌呤、腺嘌呤）含量的高效液相色谱法并进行方法学验证,然后对酵母蛋白、豌豆蛋白、大豆蛋白、乳清蛋白样品中的4种嘌呤含量进行分析。结果显示,酵母蛋白中4种嘌呤的高效液相色谱法检测分离条件：以pH3.50、20 mmol/L KH2PO4-H3PO4为流动相,流速1.0 mL/min、柱温30℃、进样量10μL、检测波长254 nm。方法验证结果显示,在0～70 mg/L的范围内线性关系良好,相关系数为0.999 6～0.999 7,4种嘌呤检出限范围为0.027 mg/L～0.084 mg/L,精密度为0.03%～0.08%,加标回收率为96.21%～102.50%,采用该方法测定6种酵母蛋白和豌豆蛋白、大豆蛋白、乳清蛋白9个蛋白样品中的嘌呤含量,其总嘌呤含量依次是3.507、23.369、10.479、4.057、0.162、0.090、0.574、0.388、0.125 mg/g。YP-5、YP-6、大豆蛋白、乳清蛋白4种蛋白样品是低嘌呤含量食品。     

香菇子实体中单核苷类成分研究

以离子交换柱层析为主要手段从香菇子实体的水提物中分离得到6个单核苷类化合物,经EI-MS、~1H-NMR和~(13)C-NMR鉴定分析,这6个化合物分别是:尿苷、尿嘧啶、鸟苷、香菇嘌呤、腺苷和腺嘌呤,其中腺嘌呤为首次从香菇中分离得到,香菇嘌呤的核磁数据首次得到全面归属。     

超声波处理对低嘌呤脱脂豆粉巯基含量、疏水性及粒径分布的影响

为研究超声波处理对低嘌呤脱脂豆粉性质的影响,利用可见分光光度计、激光粒度分布仪、荧光分光光度计进行了检测分析。结果表明：超声波处理样品的游离巯基含量、体积平均粒径、粒径分布宽度及蛋白质表面疏水性均显著高于未经超声波处理的样品（P＜0.05）。超声波功率为405 W、超声波温度50 ℃、超声波时间30 min时,游离巯基含量达到最大值8.75 μmol/g;超声波功率为450 W、超声波温度40 ℃、超声波时间60 min时,相对表面疏水性达到3.86%。因此,超声波处理引起了低嘌呤脱脂豆粉蛋白质游离巯基含量、粒径分布和表面疏水性的变化。     

球孢虫草(CCordycepa bassiana)活性威分分析

以球孢虫草为材料,采用气相色谱测定了虫草多糖的单糖组成,高碘酸钠比色法测定了D-甘露醇含量,应用HPLC测定了核苷类物质的含量及组成,并与野生冬虫夏草进行了比较.结果表明,球孢虫草胞外多糖(EPS)由甘露糖和半乳糖组成,摩尔比是1.2:1.0;胞内多糖(IPS)由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.4:4.0:1.0.球孢虫草子座与发酵菌丝体中甘露醇的含量分别为4.01%和12.05%;且它们中均含有鸟苷、腺苷和尿苷三种成分,但发酵菌丝体中三者的含量高于子座及野生冬虫夏草.通过三种活性成分测定,为综合评价球孢虫草内在品质和开发球孢虫草提供了科学依据.     

短乳杆菌产胸苷磷酸化酶发酵培养基的优化

胸苷磷酸化酶在核苷类物质合成中具有重要作用,本研究以短乳杆菌为胸苷磷酸化酶生产菌种,对短乳杆菌产胸苷磷酸化酶发酵培养基进行优化。首先通过Plackett-Burman设计筛选出影响短乳杆菌产胸苷磷酸化酶的3个较为重要因素：发酵时间（P=0.030）、接种量（P=0.033）和葡萄糖浓度（P=0.019）。在此基础上采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,并利用响应面中心组合设计对影响显著因素进行优化,得到最适培养基组成成分和培养条件为：发酵初始pH 8.0,葡萄糖18 g/L,酵母膏15 g/L,NaCl 7.5 g/L,蛋白胨10 g/L,胸苷15 mmol/L,摇床转速110 r/min,发酵温度38 ℃,发酵时间10.57 h,接种量1.54%。在此优化条件下,短乳杆菌产胸苷磷酸化酶能力得到了很大提高,短乳杆菌胸苷磷酸化酶活从0.400 U/mg湿菌体提高到1.172 U/mg湿菌体,比优化前提高了2.93倍。蛋白质凝胶电泳分析显示经优化后每克湿菌体胸苷磷酸化酶的含量明显高于优化前。     

荷移光度法测定谷物中嘌呤含量的研究

探讨荷移光度法测定谷物嘌呤的方法。通过筛选不同荷移剂得到测定嘌呤的荷移剂以氯醌酸为宜,并对氯醌酸荷移光度法测定嘌呤的条件做了探究,所得的最优测定条件为：室温(20~30℃)、pH中性、以无水乙醇为介质、控制测定体系水分2.5%~3.0%、反应5~30 min,得到n_氯醌酸∶n_鸟嘌呤=1∶3的紫红色稳定荷移络合物;在λ_max=532nm下,鸟嘌呤和混合总嘌呤浓度在0 ~1×10_-4 mol.L_-1范围内符合朗伯-比耳定律且线性良好,其线性方程分别为ΔA_鸟嘌呤= 0.034c_鸟嘌呤+ 0.005 (R2 = 0.9952)、ΔA_总嘌呤= 0.0285c_总嘌呤+ 0.0071 (R2=0.992),其摩尔吸光系数分别为ε_鸟嘌呤=3.1×10₄ L.mol_-1.cm_-1、ε_总嘌呤=3.6×10₄ L.mol_-1.cm_-1,检出限分别为2×10_-6 mol.L_-1、9×10_-6 mol.L_-1。而对谷物实样的测得结果显示本试验所建立方法有良好的精密度(RSD 2.2%~7.3%)且与HPLC法(RSD 2.2% ~7.5%)相一致,回收率为83.8%~98.1%与HPLC法的91.8%相当,符合微量成分分析要求,且经F-检验和t-检验均表明本法与HPLC法无统计学上差异。因此,用氯醌酸荷移光度法测定谷物中的嘌呤含量可行。     

吸附剂对豆浆中嘌呤物质的吸附

采用不同的吸附剂分别对豆浆中的嘌呤物质进行去除,通过单因素和正交试验优化工艺条件,结果表明,在活性炭浓度为1.5g/L,pH值为6.0,60℃恒温静置60min的条件下,豆浆中嘌呤的吸附率达到最大,为48.878%。该方法的提出,填补了中国国内豆浆中嘌呤物质去除的技术空白。     

食品中嘌呤含量分布的研究进展

目前国内外嘌呤检测方法不统一, 导致一些文献报道的同种食品中嘌呤分布数值出入较大。本文对食品中嘌呤检测的前处理方法、定量方法以及嘌呤含量分布研究现状进行综述分析, 以期为嘌呤检测技术发展提供借鉴。对于指导消费者合理膳食, 降低痛风发病率具有重要意义。     

嘌呤核苷磷酸化酶不同表达方式对发酵利巴韦林的影响

嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase,由pup G基因编码)是合成利巴韦林的关键酶,本研究考察该酶的质粒过表达和基因组整合表达对鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TA208发酵生产利巴韦林的影响。以B.amyloliquefaciens TA208为出发菌株,分别利用基因过表达和无标记整合技术,成功构建了B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082。通过实时定量PCR测定这3株菌pup G基因的转录水平,结果表明与B.amyloliquefaciens TA208相比,TA2081和TA2082的转录水平均有提高,但TA2081提高的更为显著;通过测定PNPase活性发现,B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082的PNPase活力分别为出发菌株TA208的2倍和1.30倍。7.5 L分批补料发酵实验表明,与出发菌B.amyloliquefaciens TA208相比,工程菌TA2081鸟苷到利巴韦林的摩尔转化率从20.41%提高到98.63%,TA2082的转化率从20.41%提高到40.95%。综上所述,增加pup G的表达量能提高利巴韦林的产量,本研究为利巴韦林生产菌的代谢工程改造提供了理论依据和技术指导。     

高效液相色谱测定脱脂豆粕中嘌呤含量

为检测脱脂豆粕中嘌呤含量,利用高氯酸水解豆粕样品中的核酸,采用高效液相色谱法测定豆粕粉中嘌呤含量。测定结果表明:色谱柱为Ultimate AQ-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温25℃,进样量10μL,流速1.0mL/mim,紫外检测器波长254 nm;流动相为水、冰乙酸、四丁基氢氧化铵以997∶1.5∶1.5的比例混合,再与无水甲醇以99∶1混合。以此方法测定的腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤的精密度RSD分别为0.31%,0.27%,0.50%,0.41%;回收率分别为89.00%,86.90%,88.10%,81.30%。通过此方法测定脱脂豆粕粉中的嘌呤含量为253.0 mg/100g。