改良十六烷基三甲基溴化铵-磁珠核酸提取方法及在植物转基因检测中的应用

目的 建立一种快速、高效、便捷的植物基因组DNA提取方法并运用于植物转基因检测。方法 改良传统的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium ammonium bromide, CTAB)方法, 并结合磁珠吸附基因组DNA, 配合核酸自动提取系统提取水稻和加工米粉中的核酸, 荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测Bt63大米转基因成分, 并与另外4种提取方法的结果进行对比, 评价提取效果。结果 5种不同方法中CTAB-磁珠法提取的样品基因组DNA浓度和质量最佳, 荧光PCR检测低浓度Bt63转基因成分(0.01%)的Ct值最小, 检测结果最好。结论 该方法可高效快速地提取植物核酸, 在低含量的转基因成分检测中相比其他几种方法具有绝对优势。     

毕赤酵母多基因组装系统的构建及其在2-苯乙醇合成中的应用

巴斯德毕赤酵母是一种优良的外源蛋白生产平台,近年来也被用于发酵生产高附加值化学品。为了使产品生产适应发酵工业的需要,常需要对毕赤酵母进行代谢改造,同时表达多个基因。该文设计并建立了一种毕赤酵母多基因组装系统,利用golden gate克隆实现多元件整合,并通过Cre-lox系统去除抗性标签。该系统可实现同时游离或整合表达多个基因,插入位点、启动子、终止子均可灵活调整。利用这一系统对毕赤酵母进行改造,用于发酵合成高价值化学品2-苯乙醇。通过游离表达比较不同来源的关键基因,并整合表达2-酮-3-脱氧-D-阿拉伯庚酮-7-磷酸合酶ARO3、ARO4^K229L和ARO5,分支酸变位酶ARO7^G141S和预苯酸脱水酶PHA2基因,最终重组菌株PE-3合成了408.4 mg/L 2-苯乙醇,是出发菌株的10倍以上。该研究建立多基因组装的系统可用于毕赤酵母代谢工程,构建适用于发酵生产蛋白或其他代谢产物的重组菌株。     

烟草突变体库创制、筛选与分析项目中期检查会议在青岛召开

2011年8月3-7日,烟草基因组计划重大专项2011年研究项目"烟草突变体库创制、筛选与分析"中期检查会议在青岛召开。该项目由中国烟草总公司青州烟草研究所牵头、有关单位共同承担。     

杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用

为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500~1000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100~500bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。     

中外科学家携手破译油菜多倍体基因组

中外科学家携手破译油菜多倍体基因组     

令人谈之色变的食品安全名词

<正>[转基因]这个概念的科学解释是这样的:将从特定生物体基因组中需要的目的基因或人工合成指定序列的DNA片段中提取基因片段,转入特定生物中,与其本身的基因组进行重组,再从重组体中进行数代的人工选育,从而获得具有稳定表现的遗传性状的个体。     

水稻育种技术取得重大突破 新品种预计每亩增产100公斤

记者日前从科技部中国农村技术开发中心获悉,国家重点研发计划“七大农作物育种”重点专项“水稻全基因组选择与高产优质品种设计育种”成果围绕水稻理想株型与品质形成的分子机理这一重大科学问题取得了一系列关键突破。     

RNA干扰研究前沿和应用领域

小RNA(MicroRNA，miRNA)的作用与应用研究继2001，2002连续两年被美国《Science》杂志评选为年度10大突破技术以来，2003年继续热度高涨，名列前矛。其核心技术RNA干扰(RNAi)，即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因     

牦牛乳中DNA提取方法的建立与优化

为加速牦牛重要基因的挖掘和功能鉴定,以牦牛乳作为试验材料,建立简便的牦牛基因组DNA提取方法.采用常规离心法,从牦牛乳中获得体细胞,进而提取基因组DNA.研究不同去除蛋白方法、不同DNA沉淀剂、不同贮藏条件对牦牛乳中DNA提取质量的影响.DNA质量通过PCR评价.结果表明:高盐法与酚/氯仿法去除蛋白效果相当.高盐法简便...     

Phenotypic and genetic characterization of a novel strain of Acidithiobacillus ferrooxidans （AF2）

A comparative study on the phenotypic and genetic characteristics among Acidithiobacillus ferrooxidans (AF2), a typic strain ATCC23270 and a previously isolated strain AF3 was performed. AF2 can use ferrous ion (Fe²⁺) or elemental sulfur (S⁰) as sole energy source, but oxidizes S⁰ more effectively than Fe²⁺, which is different from ATCC23270 and AF3. The G+C content of AF2 is 51.8% (molar fraction), however, ATCC23270 and AF3 strains have G+C content of 63.7% and 64.8% (molar fraction), respectively. The DNA-DNA hybridization results show that AF2 has 41.53% and 52.38% genome similarity to ATCC 23270 and AF3, respectively, but AF3 has a high genome similarity of 89.86% to ATCC 23270 strain. Rusticyanin (rus) and subunit III of aa₃-type cytochrome oxidase (coxC) genes are not detected in AF2, but Fe²⁺ oxidase (iro) gene can be detected. To understand the genomic organization of iro gene, a cosmid library of AF2 genome was constructed and iro gene-containing clone was screened. The sequencing result shows that although the nucleotide sequence of iro gene in AF2 is completely identical to that of ATCC 23270 strain, its genomic organization is different from that of ATCC 23270. In AF2, iro is located at downstream of purA gene, while it is located at downstream of petC-2 gene in ATCC 23270 strain. These results indicate that AF2 is a novel strain of A. ferrooxidans, and that phenotypic differences among the strains of A. ferrooxidans are closely correlated with their genetic polymorphisms.