3株宠物犬大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

为分析宠物犬源大肠杆菌对常用抗菌药物的敏感性,从洛阳市宠物医院采集宠物犬肛门拭子样品,获得了3株犬大肠杆菌。通过麦康凯琼脂培养基和伊红美蓝琼脂选择性培养基,对菌株进行了分离培养。采用煮沸法提取大肠杆菌DNA,采用PCR方法扩增大肠杆菌16S r DNA。用琼脂糖凝胶电泳检测了PCR产物大小,并对扩增产物进行了测序,用BLAST软件进行同源性对比分析,最终鉴定为大肠杆菌。选择20种抗菌药物,采用纸片扩散法进行药敏试验。试验结果表明:宠物犬源大肠杆菌对氨苄西林、庆大霉素、阿莫西林、环丙氟哌酸等16种抗菌药物出现不同程度的耐药性,且耐药谱广,出现了多重耐药。     

水貂源大肠杆菌对9种抗菌药物敏感性试验

为了解水貂源大肠杆菌对抗菌药物的敏感性,指导兽医临床有效防治大肠杆菌病.采集山东省某水貂养殖场水貂粪便;采用常规的分离、鉴定方法获得8株大肠杆菌菌株;采用K-B纸片扩散法检测菌株对9种抗菌药物的药物敏感性.结果表明,菌株对9种药物呈不同水平的耐药性(耐药率范围25.0~100.0%),对妥布霉素、阿米卡星100%耐药;对粘杆菌素、氟喹诺酮类呈较低耐药率;62.5%的菌株对所检测的8种药物耐药.以上结果说明了本次检测的水貂源大肠杆菌耐药性非常严重,临床上应根据药敏试验结果,合理和谨慎地使用抗菌药物以控制水貂大肠杆菌病.     

微生物固定化吸附剂吸附Pd(II)的研究

微生物法在吸附处理重金属污染和回收贵金属方面具有广阔的发展前景。利用载体A固定化大肠杆菌开发了一种高效微生物固定化吸附剂,研究其对Pd(II)的吸附特性,构建其对Pd(II)的动态吸附模型,并开展了循环再生实验。结果表明,吸附柱的穿透时间和耗竭时间与大肠杆菌的浓度、微生物固定化吸附剂的填充量成正相关,与溶液流速成负相关;载体A:粘结剂:大肠杆菌的质量比为4:1:3,固定化吸附剂添加量为15 g、溶液流速3 mL/min时,吸附柱对Pd(II)有较好的吸附效率,穿透时间和耗竭时间分别为60 min和360 min;使用2 mol/L的HCl对负载Pd(II)后吸附剂进行解吸处理,解吸率达到99.32%;吸附-解吸循环5次后,固定化吸附剂对Pd(II)的吸附量基本保持不变。     

三价铜络合物降解萘普生：一种高效的氧化剂

首次利用三价铜(Cu（Ⅲ）)降解非甾体抗炎药萘普生（NPX）,探讨了 Cu（Ⅲ）降解 NPX的影响因素、活性种类及毒性研究。结果表明,p H=7.0,反应 5 min 时,0.1 mmol/L 的 Cu（Ⅲ）降解了 80% 的 NPX 并且降解率随 Cu（Ⅲ）浓度增加而增大;自由基猝灭实验表明体系中 Cu（Ⅲ）为主要活性物种;酸性条件下 Cu（Ⅲ）难以存在,并且 Cu（Ⅲ）特征峰强度随 p H 的增大而增大;Cl^-、HCO₃^-和 HA 对 NPX 的降解无明显影响;体系 TOC 值随着反应的进行逐渐降低,并且NPX 的中间降解产物的急性生物毒性要低于 NPX;另外推测 Cu（Ⅲ）是一种单电子氧化剂,对具有富含电子结构的污染物具有良好的氧化效果。     

大肠杆菌FMME-N-26生产琥珀酸的发酵条件优化和放大

琥珀酸(Succinic acid)被认为是白色生物技术生产的最具潜力的大宗化学品之一,在工业上具有广泛的应用。微生物发酵生产琥珀酸具有环境友好和可持续发展等优点,展现出良好的发展前景,但是存在得率低、副产物积累、生产强度低等问题。为了实现琥珀酸的高效生产,在3.6 L发酵罐中对E. coli FMME-N-26生产琥珀酸发酵条件和补料策略进行了优化,建立了好氧-厌氧两阶段发酵工艺,最终确定发酵策略为：有氧发酵8 h后转为厌氧发酵,MgCO3为pH中和剂,发酵72 h补加抗渗透压保护剂2 mmol/L甜菜碱,厌氧阶段控制葡萄糖浓度为1~5 g/L。优化后发酵72 h,琥珀酸的产量和厌氧阶段得率分别达到119.2 g/L和1.08 g/g葡萄糖(理论得率97%),分别比优化前提高了46.4%和4.8%,副产物乙酸和乳酸仅积累2.37和0.94 g/L,分别比优化前降低了37.1%和49.2%。在1000 L发酵罐中实现中试放大生产,E. coli FMME-N-26生产琥珀酸的产量、得率和生产强度在国内外属于领先水平,为琥珀酸工业化生产奠定了坚实的基础,同时也为其他高价值化学品的生产提供了借鉴。     

壳聚糖在抗菌PP中的应用

通过热重分析、差示扫描量热法对壳聚糖的热稳定性进行了研究,考察了其在抗菌聚丙烯(PP)中应用的可行性。壳聚糖在氧气中起始分解温度为252.0℃,可满足加工PP时对耐热性能的要求。壳聚糖改性PP的流动性和力学性能变化不大,黄色指数增加。随着壳聚糖添加量的增加,抗菌率逐渐提高,当壳聚糖质量分数达3%时,抗菌PP对大肠杆菌和金黄葡萄球菌的杀菌率均可达99%。     

以甘油为碳源分批补料高密度发酵产环氧化物水解酶

环氧化物水解酶能够立体选择性地催化环氧化合物生成相应的二醇,具有重要的工业应用价值。通过摇瓶实验研究了不同甘油浓度对重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pET28(a)-CESH生长的影响,确定了IPTG最佳诱导时机、诱导浓度和诱导后培养温度。在15 L发酵罐进行放大培养,对比分批补料和批次发酵,前者生产率达6.71×105 U·(L·h)-1,比批次发酵提高了33.3%,酶活达到2.0×107 U·L-1,所用的时间,比批次发酵缩短了10 h,适合于工业应用。     

重组大肠杆菌产L-阿拉伯糖异构酶的条件优化

L-阿拉伯糖异构酶可以将D-半乳糖催化为D-塔格糖,为提高E.coli BL21(DE3)/pET-30a(+)-araA产L-阿拉伯糖异构酶的能力,分别优化了该基因工程菌发酵基础培养基中的碳源、氮源和诱导时机、诱导温度、诱导剂浓度和诱导时长。结果表明,采用优化后的发酵基础培养基和诱导产酶条件生产的L-阿拉伯糖异构酶的酶活力可达到80.1 U/mL,是优化前的1.8倍。L-阿拉伯糖异构酶与90 g/L的D-半乳糖在55℃的水浴振荡器中反应12 h, D-半乳糖的转化率可达到44.2%。     

重组大肠杆菌共表达D-海因酶和N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶

通过PCR分别扩增得到N-carbamoylase基因和上游带有RBS区的D-hydantoinase基因,并将其依次克隆入pBAD/His A质粒中,得到呈多顺反子结构的双酶表达质粒pBAD-CRH,转化E. coli Top10F￠得到重组菌TaraCRH. 实验证明,E. coli TaraCRH对外源蛋白的表达控制严紧,而加入阿拉伯糖诱导后可以成功表达两酶基因. 诱导条件优化结果表明,诱导温度采用29℃,培养基中阿拉伯糖浓度0.05 g/L可达到最高酶活. 进一步尝试采用玉米浆培养基代替LB培养基,在经过优化的玉米浆培养基中培养TaraCRH菌株,经阿拉伯糖诱导,海因酶和水解酶酶活分别达到3.52和4.21 U/mL.     

利用CRISPRi技术构建乙醛酸生物合成Corynebacterium glutamicum工程菌

以谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicumATCC 13032)为出发菌株,敲除其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶合成基因lldh,建立规律间隔成簇短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interfer...