特异性抗幽门螺杆菌IgY的制备和活性测定

目的寻找一种高效的特异性抗幽门螺杆菌IgY的制备和活性测定方法。方法分别用福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂混合含幽门螺杆菌灭活全菌及其超声碎片的试剂,对6只31周海兰褐种产蛋母鸡进行免疫,2周后二免,4周后三免。于初免后即开始收集鸡蛋,提取特异性抗幽门螺杆菌IgY,采用间接血凝试验测定卵黄中的抗体效价,体外抑菌试验测定其抑制幽门螺杆菌的活性。结果母鸡在初免2周后,抗体效价可达1∶256,初免3周后,抗体效价可达1∶1 024,初免4周后,抗体效价可达1∶8 192;同批样品在此水平可维持达11周以上,然后抗体效价呈缓慢下降趋势,26周后抗体效价仍可保持在较高水平。特异性抗幽门螺杆菌IgY具有明显的抑制HP生长的活性。结论采取加强免疫方法,可高效地引起免疫应答,是一种较好的获得抗体的方法。     

赣南地区自然人群幽门螺杆菌感染的流行病学调查

目的:探讨分析赣南地区自然人群幽门螺杆菌的流行病学特征。方法:于2011年2月至2013年3月间用多阶段抽样方法选取赣南地区2885名常驻人口,采用14C-UBT检测法与血清幽门螺杆菌IgG抗体金标免疫斑点渗透法对所有研究对象的幽门螺杆菌感染情况进行检测,并分析其流行病学特征。结果:不同性别感染幽门螺杆菌感染阳性率差异比较无统计学意义P>0.05;各年龄段幽门螺杆菌的感染率从32.83%⁴1.67%不等,但各年龄段间幽门螺杆菌感染率的差异比较无统计学意义P>0.05。结论:赣南地区自然人群幽门螺杆菌的感染率低于全国的平均水平即,且不同年龄与性别人群的感染率无明显差异。     

消幽散治疗幽门螺杆菌感染性胃病55例临床观察

目的:观察自拟消幽散治疗幽门螺杆菌感染性胃病的疗效。方法:将110例幽门螺旋杆菌感染性胃病患者,随机分为观察组和对照组各55例。观察组给予自拟消幽散治疗,对照组给予葵花胃康灵治疗。结果:观察组患者的总有效率明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:自拟消幽散治疗幽门螺杆菌感染性胃病的疗效理想,值得临床推广应用。     

rCtUBE的生物信息学分析及其表达优化(英文)

目的:幽门螺旋杆菌(Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌的重要致病因子。研发基于Hp尿素酶的表位疫苗是一种很有前景的防治Hp感染的策略。方法:通过生物信息学软件对位于Hp尿素酶酶活性中心的表位肽F8和霍乱毒素B亚基(CTB)的连接顺序和间隔序列加以分析,设计出一种Hp表位疫苗rCtUBE。通过基因克隆技术构建含有融合基因rCtUBE的重组表达载体pETCUB及其重组菌株;重组菌株经蛋白表达和优化后,利用Ni-NTP镍离子亲和层析和DEAE Sepharose FF阴离子交换层析纯化融合蛋白rCtUBE,并进一步通过腹腔注射免疫BALB/c小鼠,鉴定Hp表位疫苗rCtUBE的免疫学活性。结果:经生物信息学软件分析,Hp表位疫苗rCtUBE具有科学合理的结构,并成功构建了重组表达载体pETCUB及其重组菌株BL21(DE3)/pETCUB,经蛋白表达优化及纯化,可获得高纯度(95.3%)的融合蛋白rCtUBE。融合蛋白rCtUBE以氢氧化铝为佐剂注射免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA鉴定:小鼠能够产生针对CTB和表位肽F8的高滴度特异性抗体。结论:Hp表位疫苗rCtUBE具有科学合理的结构,能在大肠杆菌表达系统中获得较高水平的表达,且具有较高的免疫学特异性,因此为研发防治Hp感染的表位疫苗奠定了一定的实验基础。     

13C-UBT诊断Hp的临床价值

通过对100例胃肠道功能紊乱的患者进行胃镜检查、活组织检查、胃窦活检快速Hp检查、^13C-尿素呼气试验(^13C-UBT)和ASSURE^TM Hp快速试验(HpRT)，并以胃镜活检和组织病理检查结果为金标准。结果显示：胃窦活检快速Hp检查法的灵敏度为79％，特异性为76％；^13C—UBT检查的灵敏度为96％，特异性为95％；HpRT检查的灵敏度为86％，特异性为88％。^13C-UBT检查Hp的灵敏度和特异性较好，可作为临床上诊断Hp的首选方法。     

定量检测幽门螺杆菌感染的胶乳比浊试剂研究

将重组表达的幽门螺杆菌(Hp)上的尿素酶B(UreB)蛋白与黏附素(HpaA)蛋白通过化学反应,偶联到聚苯乙烯微球上,并置换到保存液中,制备出幽门螺杆菌的抗体检测试剂2(R₂)。结合抗原抗体反应特性及降低血清中非特异性吸附,制备出幽门螺杆菌的抗体检测试剂1(R₁)。R₁与R₂搭配使用构成了定量检测人血清中幽门螺杆菌的抗体检测胶乳试剂盒。可以发现,制备20 mL胶乳R₂,包被幽门螺杆菌UreB蛋白与HpaA蛋白各1.6 mg,同时聚苯乙烯微球粒径为190 nm时,试剂效果最好。该试剂盒通过对1 000例常州本地随机临床样本与室间质评样本进行评测,发现常州本地随机临床样本的阳性率为34.6%,室间质评样本的检测结果与上海临床检验中心公布结果一致,试剂盒性能较好。     

沙棘提取物对幽门螺杆菌脲酶活性的抑制

探讨沙棘提取物对幽门螺杆菌脲酶(Helicobacter pylori urease, HPU)活性的抑制及相关基因的表达影响。培养幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)提取HPU,通过设置沙棘提取物系列浓度梯度及孵育时间梯度,采用Berthelot法检测HPU活性并评价沙棘提取物对HPU的抑制作用;进行酶活性动力学研究及对抑制位点进行分析;将菌液与不同浓度的沙棘提取物混合后孵育6 h,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测菌体中脲酶蛋白α亚基(urease subunitα,Ure-α),脲酶蛋白β亚基(urease subunitβ,Ure-β),脲酶辅助蛋白E(urease accessory protein E,Ure-E)和脲酶辅助蛋白H(urease accessory protein H,Ure-H)脲酶基因的表达。结果表明,沙棘提取物对HPU的抑制作用呈时间、剂量依赖性,IC₅₀值为(2.73±0.10)mg/mL。沙棘提取...     

幽门螺杆菌融合蛋白HCTV的保护性研究

目的探讨幽门螺杆菌融合蛋白HCTV(HpaA-CtxB-VacA,HCTV)小鼠口服后的免疫应答。方法以Ni2+-NTA柱纯化HCTV为抗原,与重组蛋白HpaA和VacA分别给小鼠灌胃免疫,ELISPOT检测小鼠胃黏膜和派伊尔小结(Peyer patches,PP)特异性抗体分泌细胞(Antibody-secreting cells,ASC),ELISA检测血清IgG和IgA、小肠黏液sIgA和粪便sIgA。结果ELISPOT和ELISA检测结果表明,胃黏膜和PPsIgA-ASC、IgG-ASC数量明显增加,尤以sIgA-ASC为甚,同时血清IgA和IgG、粪便sIgA、肠黏液sIgA也明显高于HpaA组、VacA组和对照组,差异均有显著意义。结论已成功获得纯化的融合蛋白HCTV,小鼠灌胃免疫可有效诱导黏膜免疫应答,产生高水平的sIgA,可作候选Hp口服疫苗。     

硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用

目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。     

四联疗法治疗幽门螺旋杆菌感染疗效观察

目的探讨以PPI为基础联合三种抗生素的四联药物疗法治疗幽门螺旋杆菌感染的疗效观察。方法选取52例病人服药1周,停药4周后进行复查,评价治疗效果。结果以PPI为基础联合三种抗生素根除Hp感染的总根除率为86%,副反应小。结论埃索美拉唑四联疗法治疗Hp感染安全可靠,Hp根除率高,值得临床推广。