副溶血性弧菌ERIC-PCR分型及毒力基因检测研究

目的:建立副溶血性弧菌ERIC-PCR分子分型技术,分析副溶血性弧菌标准菌株及分离株基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱,并对副溶血性弧菌毒力基因进行检测,以了解不同来源副溶血性弧菌毒力基因携带情况.方法:提取副溶血性弧菌基因组DNA,以肠杆菌基因间共有重复序列(ERIC)为引物进行PCR扩增,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像分析仪对图谱进行观察分析,并以相似性系数构建聚类图;通过PCR方法对直接耐热溶血素(TDH)和耐热直接相关溶血素(TRH)进行检测.结果:26株副溶血性弧菌均可扩增产生可重复的DNA指纹图谱,ERIC-PCR可将26株菌分为12个型,分辨力指数为0.926;只在临床分离株中检测到TDH基因,而除一株标准菌株外,所有菌株都未检测到TRH基因.结论:研究显示ERIC-PCR可从分子水平对副溶血性弧菌基因组DNA进行快速指纹图谱分析,同时结合毒力基因检测,能够为副溶血性弧菌食物中毒疾病的预防和流行病学调查提供科学依据.     

产雌马酚菌与肠杆菌混合发酵的研究

雌马酚是大豆异黄酮在结肠中特定微生物作用下的降解产物,具有多种生物学活性。从婴儿肠道中筛选到一株可以降解大豆异黄酮产生雌马酚的厌氧菌株粪链球菌BY-1,研究了肠杆菌BY-2对BY-1的生长和代谢的影响,并对其相互作用机理进行了初步探讨。结果表明,BY-1与BY-2以1:1的接种比例混合培养时,BY-1的产酸量和雌马酚产量都显著高于单独培养时。肠杆菌BY-2代谢产生的酶、有机酸、氢气都可能是促进粪链球菌BY-1生长的因素,BY-1与BY-2之间是偏利关系。为开发含雌马酚保健发酵乳提供了一定的参考价值。     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法的研究

建立了奶粉中可致婴幼儿高死亡率的阪崎肠杆菌的PCR和荧光PCR检测方法。利用细菌16S和23SrDNA的保守区设计通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S-23SrDNA间区序列(ITS)进行扩增和测序,在比对阪崎肠杆菌ITS序列的基础上,设计了11条PCR和荧光PCR检测引物,组合成30对PCR引物,并筛选出一对种特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR检测方法。用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌株验证实验表明,本文所建立的PCR和荧光PCR方法特异性强;加菌实验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为(2.2～5.4)CFU/100g,灵敏度高;新建的PCR和荧光PCR方法与FDABAM(美国食品及药品管理局微生物分析手册)方法比对实验表明,三种方法的检测结果完全一致。由于PCR和荧光PCR检测方法快速、可靠,因此可替代传统检验方法。     

市售鲜肉中奇异变形杆菌的ERIC-PCR分型与耐药性分析

目的:研究中山市市售生鲜肉中分离的奇异变形杆菌的同源性和耐药性,分析其基因型与耐药表型之间的关系。方法:采用肠杆菌基因间重复序列(Entrobacter repetive intergenic consensus,ERIC)-PCR分型方法对71株奇异变形杆菌进行分型,所得分型指纹图谱使用Quantity One软件进行处理分析。耐药性检测采用K-B纸片扩散法,参照CLSI制定的标准判读药敏结果。结果:71株奇异变形杆菌的相似性系数为0.64~1.00,以75%为界可分为9个簇。测试的18种抗生素中,对链霉素和红霉素的耐药率最高,均为100%;对青霉素和头孢曲松耐药率最低,分别为16.90%、11.27%。所有菌株均为多重耐药菌,且至少耐6种药物。结论:市售生鲜肉中分离的71株奇异变形杆菌相似性高,耐药情况严重,其基因型与耐药表型之间没有明显的相关性。     

环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌

利用环介导等温扩增方法的快速、简便等优点,建立一种检测乳中阪崎肠杆菌的方法.以阪崎肠杆菌的OmpA序列为靶基因,设计特异性引物.优化并建立LAMP检测乳中阪崎肠杆菌的方法.结果表明,LAMP检测阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度为3.7×101cfu/mL,其灵敏度是PCR方法的10倍.人工污染阪崎肠杆菌灭菌乳的检测限为4.3×101 cfu/mL.对23株致病菌进行特异性实验,特异性良好.该方法具有特异性强、灵敏度高、设备简便、耗时短等优点,在食品检测中具有良好的应用前景.     

一株叶黄素高效降解菌株的筛选、鉴定及其降解产生香料物质的条件优化

叶黄素生物降解产物中含有环柠檬醛、β-紫罗兰酮和二氢猕猴桃内酯等重要香味物质,目前能够应用于叶黄素生物降解的酶类和菌株较少。本研究从烟田土壤中分离得到一株高效降解叶黄素菌株,经典形态学和16S rDNA进化树分析,鉴定该菌株为Enterobacter tabaci strain β7。在单因素试验基础上采用响应面试验得出该菌株降解叶黄素最佳培养条件,即为蔗糖31.97 g/L,硝酸钠3.18 g/L,酵母粉6.88 g/L和初始pH值为6.91,叶黄素降解率从85.71%提高到93.17%。GC-MS结果表明该菌叶黄素降解产物主要为β-环柠檬醛（0.75%）、5,6-环氧-β-紫罗兰酮（2.59%）、3-羟基-β-紫罗兰酮（1.69%）、β-紫罗兰酮（1.21%）、4-羟基-β-紫罗兰酮（0.89%）和二氢弥猴桃内酯（1.03%）等香料物质。该研究结果为叶黄素降解提供新型菌株资源,也为叶黄素降解产生香料物质打下理论和应用基础。     

应用VITEK全自动微生物鉴定系统检测婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌

基于对婴儿配方奶粉中微生物安全性问题的关注，本实验对婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的检测方法进行了初步研究。应用VITEK32自动微生物鉴定系统对人工污染的婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌进行检测，获得与美国食品药品管理局（FDA）推荐的API 20E生化鉴定方法一致的结果。     

利用环介导等温扩增技术对奶粉中阪崎肠杆菌进行检测

利用阪崎肠杆菌16S-23S rDNA间区(ITS)序列,在比较阪崎肠杆菌与其近源株ITS序列的基础上,设计了4条阪崎肠杆菌LAMP检测特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌LAMP检测方法.用15株阪崎肠杆菌,61株近源菌验证试验表明,所建立的LAMP方法准确且灵敏度高.加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为1.2 CFU/100 g.新建的LAMP方法与FDA BAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合.     

婴幼儿配方食品中阪崎肠杆菌的计数结果不确定度评定

[目的] 了解专项抽查的婴儿配方食品中的阪崎肠杆菌指标状况,并探讨阪崎肠杆菌的计数结果的不确定度评定方法。[方法] 按照GB 4789.1-2010 《食品微生物学检验 总则》和GB 4789.40-2016 《食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》进行了抽样和检测, 依据JJF1059.1-2012 《测量不确定度评定与表示》及贝塞尔统计学方法对计数结果进行不确定度评定。[结果]22批次婴儿配方食品中有1批次检出阪崎肠杆菌,检出率为4.55%, 该批次样品中阪崎肠杆菌平均计数为25.5MPN/100g,计数结果扩展标准不确定度为2.72MPN/100g。[结论] 本次评估依据阪崎肠杆菌检计数检验国家标准,对4次保温培养节点进行了分析,结果表明固液混合过程,酵液取样体积,阪崎肠杆菌显色平板上可疑菌落选择和MPN法重复计数的四个不确定度较大,是记数检验过程中的重要环节。     

阴沟肠杆菌分泌生物表面活性剂的合成研究

对阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)分泌表面活性剂的行为进行了初步研究,结果表明E.cloacae能以葡萄糖等水溶性碳源产生糖脂类生物表面活性剂,以葡萄糖为碳源、氯化铵为氮源时其最佳培养基组成的质量分数分别是3%、0.1%,碳氮比为8.9,初始pH值为7.2。该生物表面活性剂对菲有较强的增溶效果,并可强化高岭土所吸附的菲的脱附,可望促进石油烃污染土壤的生物修复过程。