基于多壁碳纳米管/SDBS/硫堇阪崎肠杆菌免疫传感器的研究

目的:研制一种灵敏度高、电化学性能稳定的免疫传感器,构建准确检测阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,E.sakazakii)的电化学方法。方法:将硫堇(Thi)、辣根过氧化物酶标记的阪崎肠杆菌抗体(HRP-anti-E.sakazakii)依次自组装固定于多壁碳纳米管(MWCNT)/十二烷基苯磺酸钠(SDBS)修饰的四通道丝网印刷电极上,制得一次性免疫传感器。采用原子力显微镜(AFM)表征电极修饰和孵育抗原后的表面形态,用循环伏安法(CV)考察不同修饰电极的电化学特性,根据还原峰电流的变化对阪崎肠杆菌进行测定。结果:在优化的实验条件下,该方法检测阪崎肠杆菌的线性范围为102～108cfu/mL,检测限为5.7×101cfu/mL(S/N=3)。结论:该免疫传感器灵敏度很高,具有较好的特异性、重现性(RSD=6.3%)、稳定性(4℃无菌容器中放置15d后电流响应为初始值的93.24%)和准确性(与GB/T4789.40-2010符合率为96.67%),具有一定的应用潜力。     

阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)分子检测方法研究进展

阪崎肠杆菌(现克罗诺杆菌属)是一种重要的食源性条件致病菌,因其能通过污染婴幼儿配方食品导致严重的新生儿脑膜炎、菌血症和小肠结肠炎等疾病,而受到广泛的关注。其分子生物学检测方法克服了传统检测方法实验操作繁琐、耗时长等问题。目前常用的分子生物学方法主要有普通PCR、实时荧光定量PCR、环介导恒温扩增、探针方法等。     

阪崎肠杆菌及与肠杆菌科其他细菌差异比较

为进一步推动乳品企业对每批次婴幼儿配方乳粉进行阪崎肠杆菌出厂检验,寻求准确,更加便捷、且检测费用低廉的检测方法.选择3种基础肠道分离培养基组合应用进行了研究,分离阪崎肠杆菌并对几种常见的肠杆菌科细菌在5种肠道分离培养基上生物学特性反应差异比较,以及对3种方法所用的培养基分离鉴定结果进行比较.结果表明,3种基础肠道分离培养基组合应用,观察其不同形态特征及生物学特性反应后,可初步判别阪崎肠杆茼及肠杆菌科中不同的属以及同属不同种.3种用于分离鉴定阪崎肠杆菌方法,无统计学差异.该方法分离崎肠杆菌准确、操作便捷、且检测费用低廉,有利于乳品企业对每批次产品进行阪崎肠杆菌监控.     

壳聚糖和N,O-羧甲基壳聚糖抑菌活性的研究

目的研究壳聚糖及不同取代度羧甲基壳聚糖的抑菌活性。方法大肠杆菌培养24h后，接种到含一定量的壳聚糖或N，O-羧甲基壳聚糖肉汤培养基中，研究不同浓度、取代度、pH、温度和盐时壳聚糖或N，O-羧甲基壳聚糖对壳聚糖或N，O-羧甲基壳聚糖肠杆菌生长的抑制作用，测定Oh、12h、24h、36h、48h、60h、72h光密度值。结果壳聚糖和N，O-羧甲基壳聚糖的抑菌活性受其浓度、取代度、pH、温度和盐的影响。结论壳聚糖抑菌活性明显；N，O-羧甲基壳聚糖的水溶性增加，抑菌活性下降。     

一种绢纺原料除油微生物菌株的获得及除油性能研究

从茧丝腐化液中筛选获得了一株脱油效率较高的菌株,经16S rDNA分子鉴定,命名为Enterobacter sp.TY-4。对脱油菌株脱油条件进行了优化,获得了最适碳源为蔗糖、最适氮源为蛋白胨,最适C/N为0.25︰1,培养基最适pH 7.0,最适浴比和接种量分别为2︰125和1%。将脱油菌株TY-4与一株脱胶菌株Aeromonas sp.TJ-5进行共培养,对比了脱胶菌和除油菌同时接种与次序接种对重油茧丝脱胶除油效率的影响。结果表明,采用共培养方式和次序接种明显提高了脱胶脱油效率,残油率和脱胶率分别达0.48%和24.1%。     

奶粉中阪崎肠杆菌的分离与鉴定

目的了解某地区婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染情况,为我国制定婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的限量标准及为政府加强对婴儿配方奶粉的管理提供科学依据。方法常规生理生化鉴定法和实时荧光PCR法。结果检出2株阪崎肠杆菌。结论我国市售的婴儿配方奶粉中存在少量的阪崎肠杆菌污染。     

3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片的评价

目的 评价3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片在食品检测中的准确性和适用性.方法 以SN/T 2775—2011的要求为基础,采用3M PetrifilmTM肠杆菌科测试片法和参考方法GB 4789.41—2016进行实验评价,包括线性和准确度、包容性和排他性、耐变性、批间变异及协同实验.结果 测试片方法检测结果...     

酱油腐败菌的分离鉴定与性质研究

乳酸菌和肠杆菌在传统食品的发酵中易引起食品腐败。本研究从传统酱醅和胀罐酱油中分离筛选到3株疑似腐败菌,对其进行形态、生理生化特性研究及16S rDNA序列分析,结合PCR-RFLP、ERIC-PCR及Species-Specific PCR,最终分别鉴定为产气肠杆菌、屎肠球菌(从酱醅中分离到)和马里乳杆菌(从胀罐酱油中分离到)。研究表明,产气肠杆菌具有极强产气性、而马里乳杆菌也具微弱产气性;将这三株菌接种到成品酱油中发现,均能微弱改变酱油pH值;同时这三株菌均对温度、pH、盐度具有耐受性;产气肠杆菌和屎肠球菌为条件致病菌,对消费者存在潜在危害,同时本研究发现马里乳杆菌的存在会引起酱油胀气、降低pH,从而导致酱油腐败。这三株菌的分离鉴定,对酱油的质量保证和食用安全性具有重要意义。     

恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立

为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定,同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限,利用Real Amp法和国标法对20份市售奶粉进行对比实验。结果显示,引物组16S-11扩增效率最优,与常见病原菌无交叉反应,对阪崎肠杆菌基因组DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到102 CFU/m L、102 CFU/m L和103 CFU/m L;对阪崎肠杆菌基因组DNA和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到103 CFU/m L、103 CFU/m L和104 CFU/m L;在20份市售奶粉样品中Real Amp检测结果与传统国标培养结果一致,表明本文建立的阪崎肠杆菌Real Amp检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。     

ERIC-PCR和Sau-PCR对单增李斯特菌分型稳定性研究

为了研究肠杆菌间重复序列-聚合酶链式反应(ERIC-PCR)和Sau-PCR两种现代分子分型方法对单增李斯特菌(LM)分型的稳定性,取分离自广州市菜市场、超市及厦门某食品加工厂不同食品来源的5株单增李斯特菌进行实验,分别将这5株单增李斯特菌株进行室温放置培养和传代培养,提取室温放置培养24 h、48 h、和72 h及传代培养至第5代、10代、15代和20代的基因组DNA,然后同时进行ERIC-PCR和Sau-PCR分型,观察随着放置时间延长及传代次数增加其指纹图谱的变化。结果显示,5株单增李斯特菌在室温放置培养及传代培养后除部分条带发生缺失外均未出现条带增加现象,整体条带变化不大,两种分型方法的同源性分别在92%和94%以上,表明ERIC-PCR和Sau-PCR两种分型方法在室温放置培养72 h和传代培养20代内对单增李斯特菌分型相对比较稳定,具有流行病学意义。