阪崎肠杆菌zpx基因的分子信标一实时PCR技术研究

目的建立分子信标-实时PCR技术检测婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的快速方法。方法在PCR反应体系中加入分子信标探针,探针的5’端标记FAM,3’端标记TAMRA,建立阪崎肠杆菌zpx基因分子信标-实时PCR技术快速检测方法。结果检测方法特异性强,无非特异性扩增;分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为180fg/PCR反应体系,纯阪崎肠杆菌菌液的检出限为102 CFU/ml,无交叉反应;以此反应体系检测23份样品,其中2份为阳性,余未检出,与传统检测方法结果一致。结论分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

6种食源性致病菌质控考核结果分析

目的对承担食品安全风险监测任务的全国各级疾病预防控制中心开展微生物质量控制考核,以评价其对6种食源性致病菌的检验能力。方法 6种质控考核菌株包括单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希菌、沙门菌以及金黄色葡萄球菌。按照2011和2012年设计的组合,将新鲜培养的致病菌增菌液混合后滴加于灭菌奶粉载体中制成样品。2011年考核制备了6种样品(I~VI),2012年为10种样品(A~J)。运用点分数法对两年结果分别进行满意率评价,率的比较用Pearsonx~2检验或对数似然比x~2检验。结果 2011和2012年考核总体满意率分别为86.5%(268/310)和84.3%(375/445),2011年样品满意率最低的是空白样品VI(68.0%,17/25),2012年满意率最低的是G样品(0.0%,0/8)。2011和2012年考核结果主要漏检的是大肠埃希菌,其中2012年大肠埃希菌漏检率占漏检总数的85.7%(60/70)。2011年非考核菌中漏检最多的是金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌。2012年考核结果主要多检的是金黄色葡萄球菌,占多检总数的36.8%(7/19)。两年的结果均显示大肠埃希菌和阪崎肠杆菌组合样品中,大肠埃希菌的漏检率明显增高。沙门菌和大肠埃希菌的血清分型正确率较低,分别为41.5%(95/229)和45.1%(105/233)。单核细胞增生李斯特菌易错误鉴别成英诺克李斯特菌,蜡样芽胞杆菌易错误鉴别成蕈状芽胞杆菌,阪崎肠杆菌易错误鉴别成河生肠杆菌。结论 80%以上的疾病预防控制中心对6种致病菌的定性检验能力较好,可以满足食品安全风险监测的需求。其中对沙门菌的检验能力最高;金黄色葡萄球菌漏检率较低但易出现多检;大肠埃希菌的检验能力有待提高;阪崎肠杆菌的检验水平较2010年结果有明显提升。     

白黄小脆柄菇和阴沟肠杆菌跨界融合条件优化及融合子SEM形态

对白黄小脆柄菇和阴沟肠杆菌的原生质体跨界融合进行条件优化,并对筛选出的融合子进行扫描电子显微镜观察,测定融合子的细胞形态。首先进行原生质体融合条件优化,在单因素实验的基础上采用三因素三水平的响应面分析,根据回归分析确定较优的融合条件为:PEG 34.9%、时间10.4min、温度36.4℃。然后用含抗生素的培养基对融合子进行初筛,将筛选出的11株融合子进行降解木质素研究,其中融合子PE-9经2天的培养后,木质素去除率达到了27.3%,具有良好的降解木质素潜力。最后将复筛的高效融合子PE-9与亲本菌株进行扫描电镜SEM比较观察。     

阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因克隆、表达及活性研究

目的:利用pET质粒原核表达体系克隆、表达阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,表达产物进行Ni-NTA柱纯化,利用α-葡萄糖苷酶分解4-硝基苯基-α-D-呋喃型葡萄糖的特性进行表达纯化合的蛋白活性鉴定,为进一步制备阪崎肠杆菌检测用单克隆抗体奠定了基础.方法:从阪崎肠杆菌ATCC29544标准菌株中克隆获得阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,连接pET22b( )表达载体后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用不同浓度的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达外源基因,分别检测不同诱导时间、不同浓度IPTG作用下表达产物,筛选高表达菌株.表达菌株大量培养后,超声波及蛋白酶K作用破菌,Ni-NTA亲和柱纯化目的蛋白,纯化产物进行酶活性的测定.结果:克隆获得的α-葡萄糖苷酶基因与NCBI收录的基因序列属等位基因,核苷酸位点有多处差异,氨基酸序列也有不同.构建表达载体并诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,目标蛋白相对分子质量约为65kD,与理论值相符.目标蛋白量约占菌体总蛋白量的18%.同时,由纯化结果可以看出,以500mmol/L咪唑洗脱时的纯化效果最理想,蛋白纯度可达90%以上.对表达产物进行过酶活性初步检测证重组的阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶能够分解4-硝基苯基-α-D-呋喃型葡萄糖,产生蓝绿色.结论:本研究中克隆获得了阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶基因,通过构建pET22b( )-Glu表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的高表达菌株,表达产物具有较好的酶活性,纯化后纯度可达90%以上.     

乳品中坂崎肠杆菌污染情况的调查

<正>坂崎肠杆菌为革兰氏阴性杆菌,是肠杆菌科、肠杆菌属的一个种,由其引发的婴儿、新生儿脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎散发和爆发的病例在世界范围内多有报道,致死的病例可高达40%-80%。从调查病例的分析中,婴儿暖     

LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌

据WHO最新报告显示,乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法,但检测周期长达1周左右,而且操作复杂,难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象,建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16s RNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域,并在63℃进行恒温扩增。实验结果表明,使用该方法能够在5h之内检测出复原乳样品中101CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法,克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点,不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测,而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。     

恒天然跌落“神坛”

新西兰乳制品巨头恒天然集团在乳清蛋白中检出肉毒杆菌,"洋奶粉"百分百纯净的神话被打破。随着事件的持续发酵,多美滋、娃哈哈、可瑞康、可口可乐纷纷卷入其中,而雅培、香港牛等品牌也未能幸免。目前我国已对恒天然集团浓缩乳清蛋白粉和奶粉基粉两种原料无限期停止进口,直到污染事件完全解决。曾经风光无限的恒天然,如今走下神坛。历数恒天然的过去,发现其"走下神坛"并不是偶然之举。2006年9月至今,恒天然已经屡次犯事。阪崎肠杆菌2006年9月,恒天然有两批全脂奶粉共计231吨,     

污水处理厂不同粒径生物气溶胶负载肠杆菌科细菌分布特征及影响因素

为探究污水处理厂不同粒径生物气溶胶负载肠杆菌科分布特征及影响因素，在江苏省某污水处理厂厂界内及周边采集了不同季节不同粒径生物气溶胶样本，并分析其负载的肠杆菌科浓度。对于生物气溶胶负载的总肠杆菌科及其可吸入性片段，冬季是最主要的逸散季节，而污泥脱水间是最主要的释放单元。污水处理厂不同粒径生物气溶胶负载肠杆菌科的分布特征存在显著的季节性差异和处理单元间差异。相比于上风向，厂界内和下风向生物气溶胶具有更高的肠杆菌科总浓度、可吸入性片段浓度及相对比例。厂界内与上风向生物气溶胶负载肠杆菌科的粒径分布存在显著的差异性，差异度为64.32%;而厂界内与下风向生物气溶胶负载肠杆菌科的粒径分布的差异性不显著，且差异度下降至32.17%。相对湿度、温度、风速和光照强度均对污水处理厂不同粒径生物气溶胶负载肠杆菌科的分布存在显著影响(P<0.05);其中，相对湿度是最主要的影响因素。该研究可为污水处理厂生物气溶胶污染的风险评估和控制提供理论依据。     

肠杆菌富硒蛋白的提取工艺优化及其体外抗肿瘤与抗氧化作用研究

课题组前期分离的肠杆菌H1 (Enterobacter sp. H1)可以高效转化无机硒为有机硒。该试验在前期研究的基础上，通过单因素试验结合响应面法优化富硒蛋白的盐提法提取条件，以期获得优质的富硒蛋白。同时，探究该富硒蛋白的抗氧化能力及对肝癌细胞Hep G2杀伤的影响。结果表明，盐提法提取肠杆菌富硒蛋白的最佳提取条件为：Na Cl浓度0.78 mol/L、料液比1:20.22(g:m L)、提取时间4.05 h，在此条件下，肠杆菌富硒蛋白的提取率可达到(55.56±0.05)%，所提取的富硒蛋白中硒含量为(2.55±0.004)mg/g。同时，该富硒蛋白对肝癌细胞的增殖有一定的抑制作用，当蛋白浓度为400μg/m L、孵育时间为24 h时，细胞增殖抑制率可达17.41%。以蛋白质清除羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基及总还原力的能力为指标，发现该富硒蛋白有较强的抗氧化性，且蛋白浓度与抗氧化能力呈正相关。以上结果可为开发具有抗氧化及抗肿瘤功效的硒蛋白产品提供依据，为硒蛋白资源的综合利用提供参考。