生鲜调理类羊肉中肠杆菌科细菌生长预测模型的建立

以羊肉中的优势腐败菌肠杆菌为研究对象,研究不同温度对其生长的影响,定量评价温度对生鲜调理类羊肉产品货架期的影响,为货架期快速有效地估测提供有效手段。该研究将肠杆菌科细菌接种到超高压处理后的羊肉产品上,真空包装后分别于4、10、15、20℃贮藏。用Curve Expert软件拟合不同温度下的生长情况,修正的Gompertz方程能很好地描述4²0℃下肠杆菌在羊肉中的生长。温度对μmax(最大比生长速率)和Lag(延滞时间)的影响,采用平方根模型(Belehradek)描述呈良好线性关系。用贮藏在8℃和16℃下羊肉中的肠杆菌生长实验值验证所建立的模型,偏差度分别为1.011 6和0.962 3,准确度为1.067 3和1.071 5;货架期的预测值与实测值间的相对误差分别为6.62%和1.36%,表明所建模型有效。     

TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因方法的建立

建立克罗诺杆菌的特异、灵敏的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测方法。方法 根据GenBank公布的克罗诺杆菌MMS基因高保守序列,设计特异引物和TaqMan-MGB探针,建立和优化反应体系,用25种其他常见致病菌评价反应体系的特异性,用克罗诺杆菌MMS基因重组质粒构建实时荧光定量PCR标准曲线,对重组质粒、纯菌和人工模拟污染样本进行灵敏度试验,并与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR比较,配对t检验分析两种方法对Ct值和荧光强度的差异。结果 采用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测克罗诺杆菌MMS基因仅需40min,与25种非目标菌无交叉反应,仅对克罗诺杆菌有特异性扩增;所构建方法线性关系良好,相关系数r²=0.999,扩增效率为99.972%,对重组质粒、纯菌、人工模拟污染样品标本的灵敏度分别达10拷贝/反应、3.8和38cfu/ml;与FDA推荐的TaqMan探针实时荧光PCR相比,TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR的Ct值更小、△Rn值更高,灵敏度和分辨率差异均有统计学意义(Ct:t=-14.406,P﹤0.01;△Rn:t=14.230,P﹤0.01)。结论 本研究建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR反应体系能够快速、特异、灵敏地检测克罗诺杆菌MMS基因,可用于婴幼儿奶粉中克罗诺杆菌的快速筛查和鉴定,具有较大的的应用价值和推广价值。     

乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的研制

建立乳粉中阪崎肠杆菌标准物质的制备方法.对阪崎肠杆菌真空冷冻干燥过程中使用的三种保护剂进行比较,筛选出效果最好的奶液(即脱脂奶粉与无菌水的比例为1∶4)作为保护剂,用于冷冻干燥时提高阪崎肠杆菌活菌存活率.在奶液中添加一定浓度的阪崎肠杆菌,使用真空冷冻干燥技术制备成冻干奶粉样品,测其含菌量,根据测得的菌落数量,按比例加入脱脂奶粉混匀稀释成平板菌落计数为10～15 g-1的标准样品,经真空包装获得2批共300个独立包装的冻干阪崎肠杆菌标准样品(10g/包).经过均匀性与稳定性检验,样品的定值及不确定度评估.结果表明:该标准物质均匀性、稳定性良好,该方法对进一步完善微生物尤其是致病菌标准物质的制备具有参考价值.     

乳粉中阪琦肠杆菌的PCR检测

针对我国食品进出口和生产卫生的需要,使用以16 S rRNA基因为靶序列设计合成了一对可扩增282 bp的目的片段的引物,建立了检测阪琦肠杆菌的PCR方法.结果表明,阪琦肠杆菌PCR产物有282 bp的特异性片段,而金黄色葡萄球菌无此目的条带,证实该引物具有特异性.该方法快速、可靠、灵敏,特异性强,可用于食品中阪琦肠杆菌的检测.     

2018年河南省市售婴幼儿谷类辅助食品微生物污染状况调查

目的 了解河南省市售婴幼儿谷类辅助食品卫生状况,为食品安全风险评估及标准制定提供基础数据。方法 参照《2018年国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》提供方法进行采样和检测,在河南省共采集婴幼儿谷类辅助食品103份,对其进行肠杆菌科、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增生李斯特菌和克罗诺杆菌属污染状况检测,对检测中可疑菌落采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行鉴定。结果 103份样品中肠杆菌科和克罗诺杆菌属检出率分别为0.97%(1/103)和5.83%(6/103),均在婴幼儿即食谷物辅助食品中检出,产地集中在江西省和福建省,采样地点类型均为便利店/零售店,6份克罗诺杆菌属阳性样品中有5份样品标识为≥辅食添加初期。9份样品蜡样芽胞杆菌定量结果在10～10³ CFU/g范围,检出率为8.74%(9/103),样品产地包括广东省、江西省、福建省、黑龙江省和四川省,采样地点类型均为超市和便利店/零售店,其中有8份是婴幼儿即食谷物辅助食品。结论 河南省市售婴幼儿谷类辅助食品尤其是婴幼儿即食谷物辅助食品受到克罗诺杆菌属和蜡样芽胞杆菌污染,且这些阳性产品中大多数标识的适用年龄为≥辅食添加初期,由此带来的食品安全风险较大,建议婴幼儿即食谷物辅助食品添加克罗诺杆菌属和蜡样芽胞杆菌微生物限量,降低由此带来的食品安全隐患。     

原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌毒力因子的抑制作用

探究植物源活性物质原儿茶醛对阪崎克罗诺肠杆菌泳动运动能力、生物被膜形成能力、黏附和侵入Caco-2细胞能力及9 种与菌体相关毒力基因转录的影响。结果表明,原儿茶醛对6 株阪崎克罗诺肠杆菌实验菌株的最小抑菌质量浓度（minimal inhibitory concentrations,MIC）和最小杀菌质量浓度均为2 mg/mL,对阪崎肠杆菌ATCC29544亚抑制浓度分别为1/200、1/100 MIC和1/50 MIC。亚抑制浓度的原儿茶醛能够抑制阪崎克罗诺肠杆菌在琼脂软平板中泳动运动能力;减弱菌体在12 ℃和25 ℃下不同时间段（24、48、72 h）生物被膜的形成能力;降低细菌黏附及侵入Caco-2细胞能力;下调9 种与菌体相关毒力基因的转录量。研究结果表明原儿茶醛能够抑制阪崎克罗诺肠杆菌多种毒力因子,其有潜力作为抗生素补充剂或抗毒性物质预防及控制阪崎克罗诺肠杆菌引起的相关感染。     

阪崎肠杆菌随机突变体库的构建

阪崎肠杆菌(Cronobacter(Enterobacter sakazakii))是一种以婴幼儿奶粉为主要致病源的食源性致病菌。至今人们对其功能基因所知不多,毒力因子和致病机制研究都未能找到突破口。本研究利用质粒pTnMod-okm和pBSL180构建阪崎肠杆菌随机突变体库,最终以工程菌Escherichia coli WM3064及其所含质粒pBSL180成功构建了阪崎肠杆菌随机突变体库,并通过阪崎肠杆菌显色培养技术和抗生素抗性标记(卡那霉素50μg/mL)对重组子进行筛选,建立了该菌功能基因组研究平台。在后继研究中不但可以实现对单个基因进行定位及功能研究还可找到有相似功能的一类基因,为抗性机制和致病机理研究奠定基础。     

肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性分析及ERIC-PCR分型

目的：了解肉鸡生产链中肠炎沙门氏菌耐药性情况以及各生产环节菌株间亲缘关系,为临床用药及菌株追踪溯源提供依据。方法：采用微量肉汤稀释法对171 株肠炎沙门氏菌进行13 种抗菌药物药敏实验;采用肠杆菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应（enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR）法对33 株不同生产环节耐药菌株进行分子分型;采用SPSS 20.0软件、Gel-Pro Analyer 4.0和NTSYS pc 2.1软件进行分析。结果：171 株肠炎沙门氏菌对13 种药物耐药情况不同,其中对氨苄西林耐药情况最严重,耐药率高达90.06%,对恩诺沙星、氧氟沙星最为敏感,耐药率均仅为5.26%;不同环节间耐药性差异极显著（P＜0.01）;多重耐药率高达95.32%,共有26 种耐药谱型。不同环节的33 株肠炎沙门氏菌分为4 种（Ⅰ～Ⅳ）基因型,遗传相似性在66%～100%,Ⅰ型为优势基因型;基因型相同的菌株耐药谱不一定相同,反之,耐药谱相同的菌株基因型不一定相同。结论：肉鸡生产链条中沙门氏菌对多种抗菌药物产生耐药性,且耐药谱种类繁多;沙门氏菌能够沿着生产链进行水平传播,肉鸡场环节菌株基因型相对复杂,菌株基因型与耐药表型之间无明显相关性。     

食品中3M™克罗诺杆菌属分子检测系统评价研究

目的：用不同来源的克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）、不同来源的非目的菌及不同来源的人工染菌食品样品,考核评估3M? MDS分子检测系统（以下简称3M? MDS）对克罗诺杆菌属的检出限、灵敏度、特异性和准确度,以及与国标法（GB4789.40-2016）检验结果的一致性。方法：用3M? MDS对实验室保存的50株已确认克罗诺杆菌属、40株非目的菌株进行检测,确定该试剂盒的检出限、灵敏度和特异性;对240份人工污染不同浓度目的菌样品,用3M? MDS和国标法同时检验,分析方法的准确度和检验结果的一致性。结果：3M? MDS对50株不同来源的克罗诺杆菌属的检测灵敏度为100%,平均检出限为1.79×103CFU/mL;对40株非目的菌检测结果均为阴性,特异性为100%。用3M? MDS与国标方法对人工污染101 CFU/100g、100 CFU/100g 、10-1 CFU/100g克罗诺杆菌属FC718的240份不同来源乳粉、糊精、乳清和乳糖样品进行检测,结果一致性均大于95%,方法准确度为97.5%。结论：3M? MDS方法具有低检出限、高灵敏和特异性特点,在不同食品样品基质中,检验结果呈现良好的准确度,与国标方法检验结果具有高度一致性,是一项适合基层、企业推广的快速、可靠方法。     

婴幼儿食品中肠杆菌科重点致病菌污染风险及对我国标准修订的启示

婴幼儿食品因微生物污染而导致食源性疾病的问题通常会引起国际关注,由于婴幼儿人群的特殊性使得婴幼儿食品需要特殊且严格的食品安全要求。本文对近年来国内外婴幼儿食品中肠杆菌科所属的沙门菌和克罗诺杆菌（阪崎肠杆菌）污染情况与疾病风险进展进行了综述,并通过对国内与国际婴幼儿食品产品及生产过程中微生物限量标准比对分析,为我国婴幼儿食品国家标准的修订提供技术支撑。