电化学免疫传感器的发展应用

介绍了电化学传感器的分类,重点介绍了电流型免疫传感器的测试原理和研究应用,并对此领域的未来发展作了展望。该类传感器应用广泛,有众多优点。     

蒸汽对烟草漂浮苗干根中烟草花叶病毒的失活效果

为了评价蒸汽用于烟草漂浮育苗旧苗盘残留物中烟草花叶病毒（TMV）的消毒效果,采用枯斑寄主和K326接种方法,测定了蒸汽对烟草漂浮苗花叶病株干根中TMV的失活效果。结果表明,96℃蒸汽蒸3～60min,对病苗干根中TMV失活效果高,可达99．9％。血清学检测结果表明,蒸汽消毒3min能有效破坏病根样品中TMV抗原。推荐旧苗盘TMV蒸汽消毒方法为：苗盘润湿后96℃蒸汽保持不少于3min。但在96℃蒸汽中保持5min后,普通聚苯乙烯泡沫苗盘在冷却过程中变形。     

胭脂红酸人工抗原合成及多克隆抗体的制备

为了快速高效检测食品中胭脂红酸含量,本研究通过羟基二咪唑法制备了胭脂红酸人工抗原;通过免疫新西兰大耳白兔获得了胭脂红酸抗血清,经硫酸铵沉淀法分离纯化获得抗胭脂红酸多克隆抗体;利用棋盘滴定法检测了抗体效价,并探究了溶液pH值、离子强度和有机溶剂对ELISA反应的影响,优化出最佳ELISA反应条件;在最佳反应条件下,建立了胭脂红酸的间接竞争ELISA抑制曲线。紫外光谱扫描结果显示,免疫抗原(CA-BSA)和检测抗原(CA-OVA)均与载体蛋白成功偶联;经分离纯化获得的胭脂红酸多克隆抗体效价为1:16000;检测抗原最佳浓度为1μg/m L、ELISA反应最适缓冲液为pH7.4、含50mmol/L Na~+且无甲醇的磷酸盐缓冲液;间接竞争ELISA标准曲线的线性范围为7.8～1150ng/mL,检测限为1ng/mL,灵敏度IC_(50)值为95.2ng/mL。本研究为开发CA快速检测试剂盒对食品中胭脂红酸含量的大量快速测定奠定了基础。     

干酪乳杆菌胞外多糖诱导小鼠骨髓来源树突细胞成熟以及分泌IL-6、TGF-β和IL-23

为研究干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）促进体外培养的小鼠未成熟骨髓来源树突细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）成熟的作用,分析不同剂量的EPS对BMDCs分泌细胞因子白细胞介素（interleukin,IL）-6、转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）和IL-23的影响,并检测EPS对BMDCs抗原提呈能力的影响。首先从干酪乳杆菌中分离纯化出EPS,并检测EPS的纯度;把从BALB/c小鼠体内分离出的骨髓细胞分化为BMDCs,未成熟BMDCs分别与磷酸盐缓冲液、不同剂量EPS和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）体外培养,采用流式细胞法检测了BMDCs成熟表面标记物MHC II和CD86的表达,酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法分析了IL-6、TGF-β和IL-23的表达量,CCK-8法检测了BMDCs与小鼠脾淋巴细胞的混合培养体系中淋巴细胞的增殖率。结果表明：分离出EPS的纯度约为95%;EPS能够上调BMDCs表面MHC II和CD86的表达量;EPS可以显著促进BMDCs分泌IL-6、TGF-β和IL-23（P＜0.05）,但促进水平低于LPS;EPS可以明显促进BMDCs刺激异基因淋巴细胞的增殖。综上所述,在体外实验中,干酪乳杆菌EPS能够促进BALB/c小鼠BMDCs的成熟,诱导BMDCs分泌与辅助性T17细胞分化和增殖相关的细胞因子IL-6、TGF-β和IL-23,并且可以增强BMDCs的抗原提呈能力。     

抗原口服耐受性影响因素的研究进展

抗原口服耐受性是经口接触某种抗原物质后机体再次接触这种抗原时对其免疫应答的主动抑制.机体每天都要接触大量的食物抗原,而抗原口服耐受性的存在使绝大部分人不会对这些抗原产生过敏反应.食物致敏性是人们关注的热点之一,通过建立动物模型来研究食物致敏性是一条比较直接的途径,而降低实验动物的口服耐受性可有效提高该模型的检出效力.本文就近年来口服耐受性影响因素及消除口服耐受性的措施或方法方面的研究进展进行综述.     

应用SELEX技术筛选沙门氏菌抗原的适配子

目的:应用指数富集配体系统进化(SELEX)技术筛选沙门氏菌抗原的高亲和性适配子。方法:首先合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机单链寡核苷酸序列(ssDNA)文库,再以环氧乙烷丙烯酸珠子作为筛选介质,利用生物素-抗地高辛碱性磷酸酶显色系统检测DNA适配子与沙门氏菌抗原的亲和力,以获得沙门氏菌抗原的高亲和性适配子。结果:随着筛选轮数的增加,DNA适配子与沙门氏菌抗原结合后显色,吸光度逐渐增加,初步获得了沙门氏菌抗原的高亲和性适配子。结论:实验所用的筛选流程是适当的,可以考虑推广用于类似靶目标的筛选。     

过敏性疾病重组疫苗的研究进展

过敏性疾病是世界范围内严重的卫生问题之一。因多数情况下患者很难做到避免接触过敏原,因此特异性脱敏治疗成为重要的治疗措施。随着人们对过敏原表位认识的深入和蛋白重组表达技术的不断成熟,一种新型用于特异性脱敏治疗的疫苗——重组疫苗被众多学者认可并广泛使用。重组疫苗具有安全、高效、特异等传统过敏原疫苗不具备的优势,并可达到个体化治疗的目的。本文就特异性脱敏治疗(specific immunotherapy,SIT)、重组疫苗及其制备以及疫苗的临床试验作一综述。     

健肝颗粒Ⅱ方联合恩替卡韦治疗乙肝e抗原阳性慢性乙型病毒性肝炎150例临床观察

目的观察健肝颗粒Ⅱ方联合恩替卡韦治疗乙肝e抗原(HBe Ag)阳性慢性乙型病毒性肝炎(CHB)的临床疗效。方法将300例HBe Ag阳性CHB患者随机分为对照组和治疗组,各150例。对照组给予恩替卡韦治疗,治疗组在对照组治疗方法的基础上给予健肝颗粒Ⅱ方。治疗52周后比较2组治疗前后患者外周血丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量、HBe Ag及乙肝e抗体(HBeAb)血清学转换情况。结果与对照组比较,治疗组HBe Ag转阴率及HBeAb转阳率均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与同组治疗前比较,2组外周血ALT及血清HBV-DNA载量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01),且治疗组外周血ALT降低幅度明显大于对照组(P<0.05)。对照组ALT复常率为65.3%,治疗组为78.0%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组血清HBV-DNA载量低于检测限比率为62.7%,治疗组为74.7%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论健肝颗粒Ⅱ方联合恩替卡韦治疗HBe Ag阳性CHB疗效显著,可升高患者的HBe Ag转阴率、HBeAb转阳率、ALT复常率及血清HBV-DNA载量低于检测限比率,其疗效优于单用恩替卡韦。     

围产期暴露壬基酚对仔鼠肝脏增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察母鼠孕期和哺乳期暴露于壬基酚(NP)对子代肝脏增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。方法试验分为2组:包括NP染毒组(NP 200 mg/kg·bw)和对照组(花生油)。母鼠受孕第6 d到仔鼠出生后21 d灌胃染毒壬基酚,60 d后剖杀仔鼠,检测肝脏PCNA的表达,并检测肝脏功能(包括血总蛋白TP、白蛋白ALB、前白蛋白PA、球蛋白GLB)。结果与对照组比较,NP暴露组60 d PCNA阳性细胞数明显增多(P<0.01),积分光密度增高(P<0.01)。经检测仔鼠的TP、ALB(P<0.05)与对照组差异有统计学意义,而PA、GLB(P=0.194、0.644)与对照组相比较差异无统计学意义。结论 NP暴露使仔鼠肝脏组织PCNA的表达增加,即处于增殖状态的细胞增多,并且可能对肝脏功能产生一定影响,提示NP对肝脏具有损伤作用。