转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤的体外实验

目的 探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法 采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转染树突状细胞。转染成功的树突状细胞与外周血T淋巴细胞共培养,激活特异性CTL细胞,与阳性表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞反应,用3H-TdR掺入法观察CLLs对瘤细胞的特异性杀伤效应。结果 树突状细胞能够用脂质体方法转染IgVH1核酸质粒,并且有效递呈给外周血T细胞,对表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞产生特异性免疫杀伤活性,与对照组相比差异有显著意义（P<0.01）。结论 体外诱导扩增的 DC能够转染 IgVH1核酸质粒,体外激活T淋巴细胞,产生特异性细胞毒效应。     

锁核酸和不对称扩增辅助的等位基因多重引物识别KRAS基因突变的研究

RAS突变的检测为指导结直肠癌的预测和预后提供了有力的工具。探讨一种简洁、低成本的用于检测KRAS基因突变的多重引物等位基因识别方法(multiplex primer allelic discrimination, MP_mAD)。利用不对称扩增和含锁定核酸(locked nucleic acid, LNA)的等位基因特异性引物、以及共同的反向引物和探针,进行多重孔检测和参考孔检测,以多重检测和参考检测的扩增循环数值差(ΔC_q)来判定结果。同时使用福尔马林固定石蜡包埋组织(Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissues, FFPET)样本或在野生型基因组DNA背景下混合质粒进行非临床性能评价,并采用Kappa检验比较MP_mAD与Sanger测序的结果一致性。该方法对KRAS热点突变检测灵敏度至少为3%;凝胶电泳也验证了方法的特异性;重现性的变异系数(coefficient of variation, CV)<15%;同源基因检测未观察到交叉反应。通过分析115例FFPET标本...     

有机试剂在光谱法测定生物大分子中的应用

从有机试剂作为光谱探针及其辅助试剂测定生物大分子(主要是蛋白质和核酸)的作用机理出发，综述了1996年以来国内外在此领域的研究进展情况，并对今后的发展趋势作了展望。     

核酸、蛋白多肽及疫苗乳剂的制备方法

本发明涉及制备核酸、蛋白多肽及疫苗乳剂的方法，其方法如下：(1)原有或配制好的核酸、蛋白多肽、疫苗水相或油相液体及另一种配制好的油相或水相液体同时抽入一支或分别抽入二支注射器内；(2)将一盛有水相及油相液体的注射器同时接于一两通或多通管上；(3)使两注射器相通，通过人力或机器动力进行往复运动来振动两注射器，     

一种HBV/HCV/HIV多重PCR血筛试剂的性能评价

目的评价Cobas Taq Screen MPX Test version 2.0试剂(以下简称MPX V2.0)在cobas s 201核酸血液筛查系统上检测原料血浆HBV DNA、HCV RNA及HIV RNA的性能。方法利用国际标准品,对试剂的灵敏度、特异性、耐受性、不同基因型检测能力、重复性、抗交叉污染能力及其对阳性混合样本的拆分检测能力进行验证,并对15 273份原料血浆进行检测,统计检测结果无效率,综合评价该试剂的性能。结果该试剂检测HBV、HCV及HIV-1的灵敏度分别为2.44、8.07和47.21 IU/ml;特异性均为100%;HBV A~G 7种基因型均能在3倍灵敏度被检出,HCV及HIV-1各基因型均能被检出;HBV、HCV及HIV-1 3倍灵敏度样品和阴性样品用不同批号的试剂,在不同时间均能准确检测;低浓度HBV、HCV及HIV-1样品检测Ct值的变异系数分别为3.61%、1.80%和2.39%;抗交叉污染试验中无交叉污染发生;阳性混合样本(96混)能被准确拆分;15 273份原料血浆HBV DNA阳性检出率为0.33‰(5/15 273),未检出HCV和HIV阳性样品;检测批无效率和样品最终结果无效率分别为2.56%和0.66%。结论MPX V2.0试剂灵敏度高,能检测国内流行基因型,具有良好的特异性、耐受性、重复性和抗交叉污染能力,满足《欧洲药典》和FDA对HBV、HCV和HIV核酸检测的要求,适用于原料血浆的核酸筛查。     

应用HEV RNA RT-PCR诊断戊型肝炎的研究

根据我国HEV基因序列分析，设计引物，检测临床上可疑HE患者25例，82份样品。在患者血清及粪便样品中，HEVRNA的阳性率分别为77．78％和63．16％；临床诊断为HE的20例患者，HEVRNA全为阳性，5例抗HEV阴性而未分型的患者，HEVRNA也为阳性。血中HEVRNA可持续90天，粪便中可持续33天。     

转基因玉米检测技术评价

基因工程技术的发展使转基因作物及其产品越来越多地进入人们的生活,转基因食品安全性已成为各国政府和学术领域的重点关注内容。而随着转基因作物品种的不断增加,现有的常规转基因检测方法已不能满足准确、快速、灵敏及高通量的要求,从而需要对转基因检测技术进行广泛而深入的强化研究。本文对转基因玉米的品系、转基因玉米的蛋白质和核酸检测技术的研究进展进行精炼阐述、重点研讨ELISA、PCR和基因芯片等技术在转基因玉米检测中的最新进展。从不同侧重点提高转基因检测效率,实现对转基因玉米相关食品高效检测,确保食品质量安全的最终目标。     

核酸适体筛选方法的研究进展

核酸适体是能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,理论上自然界存在的任何物质均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术,筛选到其相应的核酸适体。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现,如毛细管电泳SELEX(capillary electrophoresis SELEX,CE-SELEX)、荧光磁珠SELEX(Flu Mag SELEX)、自动化SELEX(automated SELEX)、细胞-SELEX(cell-SELEX)、消减SELEX(subtractive SELEX)技术等。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适体的筛选方法进行了总结和展望,为核酸适体的筛选提供了参考。     

荧光碳点共振光散射法测定核酸的应用研究

以葡萄糖为碳源采用溶剂热法合成荧光碳点。利用共振光散射(RLS)技术研究了碳点与脱氧核糖核酸的相互作用,根据核酸在pH 8.8的Tris缓冲液中与碳点有很强的光散射信号,建立一种简便灵敏的测定核酸的方法。此方法中增强的RLS强度与核酸浓度在0.4～30μg/mL范围内呈线性关系,检出限为0.023μg/mL。将该法用于合成样品中核酸的测定,回收率在103%～106%之间,RSD<3.7%。     

治疗性HIV-1重组DNA疫苗的构建与免疫效果评价

目的　构建编码HIV- 1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因嵌合的核酸疫苗 ,并评价其免疫效果。方法　将编码HIV -1多表位抗原基因 (MEG)与p2 4基因插入到真核表达载体pVAXI中 ,构建HIV- 1治疗性重组核酸疫苗质粒。通过ELISA试剂盒检测免疫恒河猴血清中HIV -1特异性抗体 ,并通过淋巴细胞转化实验检测HIV -1特异性T淋巴细胞增殖反应。结果　构建的重组核酸疫苗质粒pVAXI -MEGp2 4免疫恒河猴后 ,能有效地刺激产生T淋巴细胞特异性增殖反应 ,并诱导产生抗HIV -1特异性抗体。结论　所构建的重组核酸疫苗质粒能诱导机体产生免疫反应。