植物源性食品DNA提取方法的建立及几种方法比较

以大豆和马铃薯植物源性食品为研究对象,比较了研究所建立的基于磁珠的DNA提取方法、3种商品试剂盒法和传统CTAB法共5种方法提取各种食品基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分析法、定性PCR和实时荧光定量PCR法对所提取的DNA进行检测,比较所得DNA的浓度和纯度,以及对下游检测的适用性。结果表明,与其他几种提取方法相比,研究所建立的方法提取到的DNA浓度稍低,但纯度较高,而且对于豆油和淀粉样品,可很好地提取到基因组片段,满足后续PCR检测要求。     

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立

以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。     

高产核酸的热带假丝酵母诱变选育及其发酵条件优化

以热带假丝酵母（Candida tropicalis）HY4-17为出发菌株,采用电子束辐射技术诱变,经过初筛、复筛及遗传稳定性试验选育核酸高产菌株,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面法优化培养基,并优化接种量和发酵时间以提高核酸产量。结果表明,获得一株生长快速,遗传稳定的突变菌株EBI-21,其核酸含量较出发菌株HY4-17提高了25%。最佳培养基组成为：糖蜜185 g/L,硫酸铵3 g/L,硫酸锌0.05 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸亚铁0.05 g/L,磷酸1 mL/L,pH值为4.5。在优化培养基及接种量8%,发酵时间12 h条件下,核酸产量达到1.73 g/L,较未优化前提高了80.21%,培养时间缩短了10 h。     

植物多糖及其提取方法

1 前言 多糖是自然界和生物体中广泛存在的物质,它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子。它具有多种生物活性,与生物机能的维持密切相关,与蛋白质、脂类形成的糖蛋白、脂多糖在细胞的识别、分泌以及在蛋白质的加工、转移方面起着不容忽视的作用。近年来,植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现,各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相继被发现^[1,14,15]。我国对多糖的研究始于20世纪70年代,植物多糖由于它们独特的功能和低毒性,作为新药发展的方向具有广阔的应用前景,越来越多的研究人员将目光投向植物多糖。     

锁核酸和不对称扩增辅助的等位基因多重引物识别KRAS基因突变的研究

RAS突变的检测为指导结直肠癌的预测和预后提供了有力的工具。探讨一种简洁、低成本的用于检测KRAS基因突变的多重引物等位基因识别方法(multiplex primer allelic discrimination, MP_mAD)。利用不对称扩增和含锁定核酸(locked nucleic acid, LNA)的等位基因特异性引物、以及共同的反向引物和探针,进行多重孔检测和参考孔检测,以多重检测和参考检测的扩增循环数值差(ΔC_q)来判定结果。同时使用福尔马林固定石蜡包埋组织(Formalin Fixed and Paraffin Embedded Tissues, FFPET)样本或在野生型基因组DNA背景下混合质粒进行非临床性能评价,并采用Kappa检验比较MP_mAD与Sanger测序的结果一致性。该方法对KRAS热点突变检测灵敏度至少为3%;凝胶电泳也验证了方法的特异性;重现性的变异系数(coefficient of variation, CV)<15%;同源基因检测未观察到交叉反应。通过分析115例FFPET标本...     

转基因玉米检测技术评价

基因工程技术的发展使转基因作物及其产品越来越多地进入人们的生活,转基因食品安全性已成为各国政府和学术领域的重点关注内容。而随着转基因作物品种的不断增加,现有的常规转基因检测方法已不能满足准确、快速、灵敏及高通量的要求,从而需要对转基因检测技术进行广泛而深入的强化研究。本文对转基因玉米的品系、转基因玉米的蛋白质和核酸检测技术的研究进展进行精炼阐述、重点研讨ELISA、PCR和基因芯片等技术在转基因玉米检测中的最新进展。从不同侧重点提高转基因检测效率,实现对转基因玉米相关食品高效检测,确保食品质量安全的最终目标。     

Real-time PCR检测核酸疫苗中宿主基因组残留DNA

目的建立Real-time PCR方法,用于定量检测核酸疫苗中宿主基因组的残留DNA。方法以Lightcycler平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的Real-time PCR检测方法,并用于核酸疫苗纯化过程中间产物的检测。结果整个检测过程可在30min内完成,特异性强,检测灵敏度可达10fg/μl,其标准曲线的相关系数为-0.99。结论该方法可用于核酸疫苗中宿主基因组残留DNA的检测。     

适体生物传感器研究进展

适体作为识别分子已成功应用于多种生物传感器平台,在医疗诊断、环境检测、基础分析中显示出良好的应用前景。近年来,以适体为识别元件的生物传感器越来越受到人们的关注。介绍了适体的优点,重点综述了2006年以来适体生物传感器的研究新发展。     

基于核酸适配体调控噻菁染料聚集体构建铅离子检测方法

基于调控噻菁染料(Dye2)的超分子自组装性质及其与核酸适配体(T30695)特异性结合的能力,构建了Pb2+的特异性识别模块.结果表明,当体系中加入Pb2+时,T30695单链形成G-四链体,并将二聚体形式存在的噻菁染料诱导解聚为单体,引起422,445 nm处紫外吸收峰变化,仅需通过UV-vis光谱仪便可实现对Pb...     

基于在位光还原银胶法的核酸碱基快速检测

核酸遗传物质是蛋白质合成过程中关键环节,对生物遗传和变异起着关键性作用。核酸碱基多样性特点决定了碱基反应性能,进而发生生物进化和衰老。组合核酸碱基能够得到足够多的信息,是形成高分子生物物质的基础。因此,提出了基于在位光还原银胶法的核酸碱基快速检测。制备表面增强拉曼光谱常规基底,准备核苷酸、核苷、碱基实验材料。制备核酸碱基、硝酸银溶液、银胶溶液和银膜,测量拉曼光谱。使用激光诱导获取银基质,利用NaClO_4分子的Cl-O键振动作为内标,分析在位光还原合成银胶法增强光谱效果。由分析结果可知,该方法可以获得高信噪比的表面增强拉曼光谱,且具有良好稳定性,在核酸碱基低浓度检测方面具有实用价值。