基于核酸适配体的纳米金比色法快速检测肠炎沙门氏菌

该文以肠炎沙门氏菌为研究对象,开发基于核酸适配体的纳米金可视化检测方法。通过优化体系内适配体浓度,研究纳米金-适配体体系的肠炎沙门氏菌检测限、特异性及适用温度;同时以人工污染样品为例,评价纳米金-适配体的加标回收率。结果显示：该方法可以特异性检测肠炎沙门氏菌,对其他食源性致病菌无特异反应。通过条件优化,在适配体浓度200 nmol/L 下,肠炎沙门氏菌的最低检测限为9.3×101 CFU/mL,其线性范围为103～107 CFU/mL,线性方程为y=0.187 8x-0.146（R2=0.991 3）。检测人工污染样品的加标回收率为93.68%～117.89%。利用核酸适配体纳米金比色法进行肠炎沙门氏菌的检测操作简便、结果可视;通过调整核酸适配体可进行其他致病菌的检测,具有良好的推广意义。     

基于适配体亲和磁珠的黄曲霉毒素B1单样本前处理试剂盒的制备及应用

黄曲霉毒素B₁(aflatoxin B₁, AFB₁)适配体共价偶联于磁珠表面制备适配体亲和磁珠(aptamer affinity magnetic beads, AAMB),将AAMB、孵育液、洗涤液和洗脱液预封装于试剂条中开发了AFB₁单样本前处理试剂盒,借助真菌毒素全自动净化仪实现了AFB₁前处理的自动化,使用超高效液相色谱仪对洗脱液中AFB₁的含量进行测定。通过优化磁珠粒径、适配体间接臂长度、适配体亲和磁珠用量、孵育液体积确定了AAMB的制备条件以及AFB₁单样本前处理试剂盒的使用条件,对比了手动和自动两种前处理方式下AAMB回收率的差异。在优化条件下,AFB₁的检出限(limit of detection, LOD)为0.6 ng/mL,玉米和小麦中低、中、高三个水平的加标回收率在92.8%～110.1%之间,日内精密度的相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)小...     

核酸适配体生物传感器在食品中氟喹诺酮类兽药残留检测中的应用

氟喹诺酮类药物(FQs)通常用于预防和治疗畜产养殖、水产养殖过程中的动物疾病,然而过量或不规范使用等会产生耐药菌株,而含FQs残留的动物性食品进入食物链会导致人体生物蓄积毒性.探索FQs有效的检测方法逐渐成为众多学者的关注点.目前国内外建立了多种检测FQs的方法.基于核酸适配体的氟喹诺酮类兽药检测方法相比于其它方法具有...     

基于DNA核酸适配体序列的超灵敏比色法检测牛乳中的雌二醇

分别利用最适长度的雌二醇DNA核酸适配体的特异性识别和胶体金聚集前后颜色及吸光度的变化实现雌二醇的定性和定量检测。本研究制备了胶体金,并设计了75-mer、35-mer和22-mer的雌二醇核酸适配体,依据没有核酸适配体保护的胶体金在最适氯化钠浓度条件下聚集,而有核酸适配体保护的胶体金在此浓度条件下不聚集以及雌二醇的核酸适配体与雌二醇特异性结合的特性,实现对雌二醇的超灵敏检测。结果表明,在Na Cl浓度30 mmol/L、35-mer核酸适配体质量浓度30 nmol/L条件下,雌二醇质量浓度与胶体金在625 nm和523 nm波长条件下,吸光度的比值(A_(625) nm/A_(523) nm)在13.6~54.4 pg/m L的范围内呈良好的线性关系,检测限为2.7 pg/m L。所构建的比色法的特异性、稳定性和重复性均良好。应用该方法对牛乳样品进行检测,雌二醇的最低检测限为13.6 pg/m L,因此可用于奶制品中雌二醇的快速检测。     

纳米材料用于害虫防治的研究进展

传统害虫防治方式容易造成环境污染、农药残留、害虫抗药性增加、误杀害虫天敌等问题,在害虫防治新型替代物及控制措施方面,纳米材料赋予了其新功能.文中综述了现阶段国内外纳米材料通过直接应用、包埋技术、DNA干扰技术等方式防治害虫的方法,并对其防治效果及作用机理进行了介绍.研究表明,纳米材料在粮食害虫领域具有巨大的应用前景.     

高产核酸的热带假丝酵母诱变选育及其发酵条件优化

以热带假丝酵母（Candida tropicalis）HY4-17为出发菌株,采用电子束辐射技术诱变,经过初筛、复筛及遗传稳定性试验选育核酸高产菌株,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面法优化培养基,并优化接种量和发酵时间以提高核酸产量。结果表明,获得一株生长快速,遗传稳定的突变菌株EBI-21,其核酸含量较出发菌株HY4-17提高了25%。最佳培养基组成为：糖蜜185 g/L,硫酸铵3 g/L,硫酸锌0.05 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸亚铁0.05 g/L,磷酸1 mL/L,pH值为4.5。在优化培养基及接种量8%,发酵时间12 h条件下,核酸产量达到1.73 g/L,较未优化前提高了80.21%,培养时间缩短了10 h。     

番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术

目的 建立番茄溃疡病菌的环介导等温核酸扩增技术检测方法。方法 应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对番茄溃疡病菌的16S rRNA特异性基因进行扩增, 采用4对引物识别目的片段的6个特异性区域, 62 ℃恒温1 h完成扩增。结果 设计的引物与对照菌皱纹假单胞菌、茄假单胞菌、丁香假单胞菌番茄致病变种都没有扩增反应, 表现了较好的特异性。这些对照菌在茄科蔬菜上易引起类似症状。结论 LAMP检测程序便捷, 所需设备简单, 其结果可以通过肉眼观察来判断, 比常规PCR灵敏且能更早得到反应结果, 因此该技术具有更大的优势。     

恒温荧光核酸检测仪检测2种食源性致病菌的方法验证

目的以传统国标培养法作为参考比对方法,考察恒温荧光核酸检测仪(constant temperature fluorescent nucleic acid detector)检测食品(自然食品和加标食品)中食源性致病菌如阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌的一致性。方法通过对食品中阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌国标培养法和恒温荧光核酸检测仪方法检测结果的比对,考量后者方法的灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率和准确度。结果恒温荧光核酸检测仪检测食品中阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌的灵敏度和特异性都是100%,假阴性率为0;假阳性率为0。结论恒温荧光核酸检测仪方法特异性强、准确度高、无一例漏检。     

鱼产品掺假鉴别技术研究进展

由于水产品种类多、消费量大,近缘关系之间的物种品质和价格差距悬殊,导致水产品掺假以及错贴标签等欺诈现象层出不穷,损害了消费者的利益甚至健康。传统的感官识别方法具有一定的局限性,因此需要建立快速、准确的水产品鉴别方法。本文总结了常见的几类易掺假的鱼肉及鱼产品,并综述了水产品掺假鉴别技术。掺假鉴别技术主要分为无损检测技术、蛋白质分析技术和核酸分析技术三大类,包括光谱、质谱、酶联免疫吸附测定和聚合酶链式反应等。本文概括了水产品掺假鉴别技术的应用与特点,深入探讨了其发展趋势,期望为水产品掺假鉴别提供技术参考。