用于筛选人工结合蛋白的骨架蛋白

抗体作为最著名的天然结合蛋白,因其具有与抗原特异结合的特性,近100多年以来无论在生物技术领域,还是在疾病的诊断及治疗方面,都发挥着广泛而重要的作用。但是抗体自身固有的局限性也在很大程度上限制了它的应用,而人工结合蛋白既具有抗体的特点,又兼具更多优势:分子更小;稳定性更高;能在大肠杆菌中高产量、高可溶性表达;易于修饰;能够达到高亲合力和高特异性;并且与抗体没有知识产权的冲突,因此被称为理想的"新一代抗体"。人工结合蛋白是从基因改造构建而成的骨架蛋白库中针对特定的靶分子筛选而得的。从骨架蛋白的概念和设计,骨架蛋白的分类,应用骨架蛋白筛选人工结合蛋白的技术以及人工结合蛋白的应用和前景等方面进行总结概述。     

食管鳞癌组织中HIF-1α及Fascin蛋白的表达

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及细胞骨架蛋白(Fascin蛋白)在食管鳞癌组织中的表达及其意义。方法:应用免疫组织化SP法检测80例食管鳞癌及癌旁组织中HIF-1α及Fascin蛋白的表达,分析其与食管鳞癌病理特征的关系。结果:食管鳞癌组织中HIF-1α及Fascin蛋白的总阳性表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05),在食管鳞癌组织中HIF-1α的表达与Fascin蛋白的表达呈正相关(r=0.252,P=0.024);HIF-1α及Fascin蛋白在食管鳞癌组织中的表达与癌组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移明显相关(P<0.05),但均与年龄、性别等因素无关(P>0.05)。结论:高表达HIF-1α及Fascin蛋白在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用,且高表达的HIF-1α蛋白与Fascin蛋白存在相关性。     

气虚血瘀证脑卒中患者心血管危险因子与NIHSS评分的关系研究

目的:观察颈动脉IMT值、超敏C反应蛋白以及同型半胱氨酸在气虚血瘀脑卒中患者中的水平,评估三者与NIHSS评分的关系。方法:选取脑卒中患者139例,采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行神经功能缺损程度评分,同时运用颈动脉彩超检测颈动IMT值,全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸,免疫层析技术检测超敏C反应蛋白,观察结果。结果:气虚血瘀证患者与非气虚血瘀证患者NIHSS评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。颈动脉IMT值、血清同型半胱氨酸以及超敏C反应蛋白在不同程度的NIHSS评分中比较差异有统计学意义(P<0.05)。重型神经功能损伤组中三者水平均呈明显上升。结论:检测气虚血瘀证脑卒中患者颈动脉IMT值、超敏C反应蛋白以及同型半胱氨酸等心血管危险因素,有利于从实验室和影像学的角度客观地判断脑卒中后神经功能的损伤程度,对脑卒中后神经功能的恢复有重要的临床意义。     

黄芪炙甘草汤对气血两虚模型心律失常小鼠血清炎症因子及心肌酶的影响

目的:观察黄芪炙甘草汤对气血两虚型心率失常小鼠血清炎症因子及心肌酶的影响。方法:选取80只心电图正常的小鼠,按体质量随机分为5组,每组16只,即空白对照组、乌头碱组、气血两虚-乌头碱组、黄芪炙甘草汤低剂量组、黄芪炙甘草汤高剂量组。通过眼眶后静脉慢性放血、饥饿、疲劳的综合法,复制成气血两虚的小鼠模型,再通过左侧颈外静脉注射乌头碱,进而制成气血两虚型心律失常小鼠模型。灌胃给予不同剂量的黄芪炙甘草汤进行干预,观察黄芪炙甘草汤高剂量组、低剂量组对小鼠治疗前后超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-6等4个血清炎症因子,心电图及血清心肌酶的影响。结果:各组小鼠一般体征比较:(1)气血两虚-乌头碱组小鼠表现出倦怠、毛枯蓬松、倦卧少动、拱背消瘦、睑结膜苍白、唇色淡白、体质量减轻、食欲下降,而黄芪炙甘草汤高剂量组和低剂量组上述症状都有显著改善;(2)黄芪炙甘汤能明显升高模型小鼠的hs-CRP、TNF-α、IL-6以及IL-2等血清炎症水平,与空白组和乌头碱组相比,差异有统计学意义(P<0.05);(3)各组小鼠心肌酶肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)水平比较:芪炙甘草汤高剂量和低剂量组均能明显降低气血两虚型心律失常小鼠心肌酶CK和LDH的水平,与气血两虚-乌头碱组比较,具有明显的差异性(P<0.05)。结论:黄芪炙甘草汤能较好地保护气血两虚型心律失常模型小鼠心脏功能,这可能与提高动物模型的血清炎症因子水平、改善心电图、降低心肌酶的含量等生化指标有关。     

C-反应蛋白结合血常规对临床呼吸道感染性疾病检测结果分析

目的:研究并探讨C-反应蛋白与血常规检测对临床呼吸道感染性疾病中的诊断意义。方法:选取本院2016年6-12月收治的400例呼吸道感染性疾病患者,所有患者均接受C-反应蛋白和血常规检测,将C-反应蛋白水平升高和血常规检测中白细胞计数异常者(白细胞总数、中性粒细胞计数或淋巴细胞计数任一项高于正常参考值)视为检测结果阳性,分别计算C-反应蛋白、白细胞计数、两项检测中任一项阳性者的阳性率,对统计结果进行分析比较。结果:C-反应蛋白阳性率、白细胞计数阳性率、两项任一阳性者阳性率分别为71.50%、61.75%、84.50%。两项任一阳性者阳性率最高,其次为C-反应蛋白阳性率,而白细胞计数阳性率与C-反应蛋白阳性率相比较低,三者阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在呼吸道感染性疾病的临床诊断中,C-反应蛋白、血常规指标均可在一定程度上反映机体内感染状态和感染程度,但C-反应蛋白更能快速反映机体内的状态,二者结合诊断更有利于为临床诊断感染性疾病的类型和程度提供现实依据。     

乙二醇二缩水甘油醚原位交联纤维素-磷虾蛋白复合纤维的结构与性能

以纤维素(Cell)和南极磷虾蛋白(AKP)为原料，以乙二醇二缩水甘油醚（EGDE）为潜在交联剂，NaOH和尿素水溶液作溶剂，在低温下溶解Cell和AKP后，加入EGDE制备Cell-AKP-EGDE复合纺丝原液，将纺丝原液挤入H₂SO₄-Na₂SO₄-H₂O构成的凝固浴中，经热拉伸定型获得EGDE原位交联的Cell-AKP复合纤维。利用FTIR研究了交联剂EGDE的含量对Cell-AKP复合体系分子间相互作用的影响，采用SEM、XRD、TG等考察了交联剂EGDE的含量与Cell-AKP复合体系的表面形态、结晶性、热稳定性和力学性能的相关性。结果表明:交联剂EGDE含量的不同对Cell-AKP复合纤维的表观黏度、力学性能、结晶性及表面形态等均有影响，且交联剂EGDE含量为3wt%时，Cell-AKP复合纤维的综合性能较好。      

中西医结合治疗重症肺炎临床研究

目的:观察清金化痰汤联合常规抗生素序贯疗法治疗重症肺炎的临床疗效。方法:86例重症肺炎患者随机分为对照组和观察组,每组43例。对照组患者采用常规抗生素序贯疗法治疗,观察组在对照组治疗基础上加服清金化痰汤加减,方药组成:黄芩20 g,栀子10 g,桔梗12 g,生石膏30 g,川贝母10 g,鱼腥草30 g,橘红9 g,茯苓30 g,桑白皮15 g,知母15 g,栝楼仁20 g,甘草6 g。比较两组患者临床疗效,肺功能和生活质量评分。结果:两组患者的体温恢复时间(t=6.323,P<0.01)、呼吸恢复正常时间(t=9.552,P<0.01)、咳嗽消失时间(t=9.578,P<0.01)、肺啰音消失时间(t=3.661,P<0.01)、机械通气时间(t=12.845,P<0.01)、住院时间(t=5.827,P<0.01)均存在统计学差异;治疗后,对照组和观察组的白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)(t=2.555,P=0.012<0.01)、IL-6(t=14.985,P<0.01)、C反应蛋白(t=3.110,P=0.003<0.01)、第1秒用力呼气量(t=-4.747,P<0.01)、用力肺活量(t=-4.104,P<0.01)、第1秒用力呼气量(t=-5.461,P<0.01)、临床肺感染评价(t=-10.299,P<0.01)均存在统计学差异;两组体征分数均有改善,但观察组显著优于对照组;治疗后,对照组和观察组的Barthel指数评估量表评分(t=-8.987,P<0.01)和Rankin神经功能康复情况评估量表评分(t=-8.500,P<0.01)均存在统计学差异,两组的生活质量评分均提高,但观察组评分显著高于对照组。结论:清金化痰汤联合常规抗生素序贯疗法治疗重症肺炎临床疗效显著,能明显改善临床症状,提高患者的生活质量。     

SP-D在AECOPD中的临床意义及与PCT、CRP的相关性研究

目的观察到肺表面活性物质蛋白(SP-D)在急性期慢性阻塞性肺病(AECOPD)中的临床意义,分析SP-D与患者肺功能和降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)的相关性。方法以2014年3月~2015年3月在我院接受治疗的90例慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者为观察对象,其中稳定期和急性期患者各45例,同时选取45例健康成年人作为对照组。观察三组研究对象SP-D、PCT和CRP水平以及肺功能指标的差异;分析SP-D、PCT和CRP与肺功能以及SP-D与PCT和CRP的相关性。结果三组研究对象的SP-D、PCT、CRP水平存在显著差异,且AECOPD组患者高于稳定期COPD患者,稳定期COPD患者高于对照组(P<0.05);三组研究对象的肺功能指标存在显著差异,6分钟步行距离(6MWT)、肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1/FVC、呼气中断流速(MMEF)和最高呼气流速(PEF)水平由高到低依次为对照组、稳定期COPD组和AECOPD(P<0.05);SP-D与肺功能相关指标水平呈显著负相关,而PCT水平和CRP水平与肺功能无明显相关关系;SP-D水平与PCT水平显著正相关,而与CRP水平无明显相关关系。结论 AECOPD患者血清SP-D水平较高,且SP-D水平与患者的肺功能和血清PCT水平密切相关。     

淀粉样前体蛋白在神经发生中的作用与阿尔茨海默病关系的研究进展

阿尔茨海默病,俗称老年痴呆,由德国外科医生Alzheimer首次发现,是一种进行性发展、致死性神经系统退行性疾病。该病是目前最常见的一种失智症(俗称痴呆症,Dementia),但这种失智不同于正常老化。迄今为止AD具体的发病机制仍未明确、也没有精准的早期筛查和诊断手段及有效控制病情的治疗方法。近年来大量研究证实成年哺乳动物的中枢神经系统终身存在着神经发生。这为脑损伤和神经系统变性疾病的治疗带来了希望。文章将对成年中枢神经系统神经发生的过程及参与AD病程的关键分子APP在神经发生方面的最新发现进行综述,以期为本领域或相关研究提供借鉴或参考。     

胃癌中葡萄糖调节蛋白78的表达及其临床病理学意义

目的检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在胃癌组织中的表达,分析其临床病理学意义,探讨GRP78在胃癌发生发展中的作用。方法收集48例不同临床分期及不同分化程度胃腺癌及28例癌旁正常胃黏膜组织标本,分别应用RT-PCR、Western Blotting和免疫组化检测GRP78 mRNA和蛋白质的表达。结果与正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中GRP78 mRNA及蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。免疫组化检测GRP78阳性表达定位于胞浆,在正常胃粘膜组织中GRP78阳性表达率为10.7%(3/28),高、中分化与低分化胃癌组织阳性表达率分别为59.4%(19/32)和93.8%(15/16);直径≥5 cm的胃癌组织中GRP78阳性表达率(88.9%,16/18)高于直径<5 cm的胃癌组织(60%,18/30),Ⅲ、Ⅳ期(TNM分期)病例胃癌组织中GRP78阳性表达率(90.5%,19/21)高于Ⅰ、Ⅱ期病例(55.6%,15/27);5年内病情复发或者死亡病例胃癌组织中GRP78阳性表达率(82.8%,24/29)高于5年内病情无复发病例(52.6%,10/19);淋巴结转移胃癌组织中GRP78阳性表达率(96.2%,25/26)明显高于非淋巴结转移胃癌组织(40.9%,9/22),各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 GRP78在胃癌组织中高表达,其表达水平与胃癌肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后密切相关。